蛋白質(zhì)等電點的應(yīng)用ppt課件

1、蛋白質(zhì)等電點的運用蛋白質(zhì)等電點的運用化學系化學專業(yè)化學系化學專業(yè)2班班羅佳羅佳04081052蛋白質(zhì)等電點的運用蛋白質(zhì)等電點的運用 等電點等電點 等電點時蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)等電點時蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì) 主要運用主要運用 等電點沉淀與分別等電點沉淀與分別 電泳分別電泳分別 等電聚焦電泳等電聚焦電泳 目前研討運用情況目前研討運用情況 等電點的測定等電點的測定等電點等電點 以氨基乙酸為例,離解平衡為:氨基乙酸 Ka1 雙極離子 Ka2 氨基乙酸 陽離子 pI=1/2(pKa1+pKa2) 陰離子 當氨基酸的各種帶電離子所帶正電荷數(shù)與負電荷數(shù)相等時,此時溶液的pH就是這種氨基酸的等電點(pI). 蛋白質(zhì)是由

2、氨基酸組成的,除了有末端-NH3+和末端-COO-外,參與其組成的氨基酸殘基側(cè)鏈上還有酸、堿性基團,因此蛋白質(zhì)是兩性物質(zhì),也有等電點.2233323222H OH OH OH ONH CH COOHNH CH COONH CH COO陰陰 極極陽陽 極極pH=pIpHpI帶正電荷帶正電荷帶負電荷帶負電荷凈電荷為零凈電荷為零導電率導電率溶解度溶解度浸透壓浸透壓粘度粘度到達最低到達最低等電點時蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)等電點時蛋白質(zhì)的特殊性質(zhì)緣由緣由:在等電點時，蛋白質(zhì)分子以雙極離子存在，總凈在等電點時，蛋白質(zhì)分子以雙極離子存在，總凈電荷為零電荷為零,顆粒無電荷間的排斥作用顆粒無電荷間的排斥作用,易凝集成大

3、顆粒，易凝集成大顆粒，因此最不穩(wěn)定，溶解度最小，易沉淀析出。因此最不穩(wěn)定，溶解度最小，易沉淀析出。 電泳分電泳分別別沉淀分別沉淀分別 pH=pI 溶解度最小等電點沉淀與分別等電點沉淀與分別大部或全部沉淀下來大部或全部沉淀下來pHpI仍留在溶液中仍留在溶液中蛋白質(zhì)的分別蛋白質(zhì)的分別沉淀出來的蛋白質(zhì)可堅持天然構(gòu)象，能再溶解沉淀出來的蛋白質(zhì)可堅持天然構(gòu)象，能再溶解于水并具有生物活性。于水并具有生物活性。等電聚焦電泳等電聚焦電泳加加 酸酸加加 堿堿pI小小大大pH高高低低關(guān)鍵是構(gòu)成關(guān)鍵是構(gòu)成pH梯度梯度等電點的測定等電點的測定 從實際上講從實際上講,一種蛋白質(zhì)只需一個等電點一種蛋白質(zhì)只需一個等電點 ,但等電但等電點測定結(jié)果受實驗方法和條件點測定結(jié)果受實驗方法和條件 (溶劑性質(zhì)、離子溶劑性質(zhì)、離子強度等強度等)影響較大，影響較大， 一種蛋白質(zhì)也能夠具有多個一種蛋白質(zhì)也能夠具有多個等電點。等電點。 在在這篇文章中這篇文章中,作者指出：作者指出：“很多學者發(fā)現(xiàn)很多學者發(fā)現(xiàn),經(jīng)過各經(jīng)過各種色譜均證明為純品的重組蛋白在等電聚焦時表種色譜均證明為純品的重組蛋白在等電聚焦時表現(xiàn)為多條帶現(xiàn)為多條帶,這種景象的出現(xiàn)能夠與蛋白質(zhì)空間構(gòu)這種景象的出現(xiàn)能