《伯樂gm試驗》ppt課件

1、伯樂伯樂gmgm實驗實驗李丹GM實驗原理GM實驗的臨床價值GM實驗假陽性的情況GM實驗假陰性的情況GM實驗的優(yōu)勢和局限其他樣本的gm實驗與其他廠家比較 GM實驗檢測的是半乳甘露聚糖glactomannan，GM，主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷； 半乳甘露聚糖是廣泛存在于曲霉和青霉細胞壁的一種多糖，菌細胞壁外表菌絲生長時，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原； 本試劑盒采用ELISA夾心法，將EBA-2單克隆抗體包被于微孔內(nèi)檢測結(jié)合結(jié)合物為過氧化物酶銜接的抗體到已激活微孔板上的抗體。參與EDTA的樣本經(jīng)過熱處置(去除免疫復合物和沉淀能夠干擾實驗的血清蛋白質(zhì)，參與微孔板中。假設樣

2、本中有半乳甘露聚糖抗原，那么構(gòu)成單克隆抗體-半乳甘露聚糖-單克隆抗體過氧化物酶復合物。洗板去除沒有結(jié)合的物質(zhì)參與TMB,顯藍色，參與2M硫酸終止反響，酶標儀讀數(shù)。1 伯樂GM實驗的原理 嚴重粒細胞缺乏 免疫功能低下惡性腫瘤、血液病、尿毒癥、艾滋病、器官移植、糖尿病 實體器官移植 入住ICU 血液腫瘤 骨髓移植 長期運用激素治療 慢性阻塞性肺病易感染人群 無菌、無熱源采血管，ep管，槍頭，移液器 金屬浴加熱模塊，離心機支持1.5ml ep管，支持450nm和620/630nm雙波長的酶標儀，水浴鍋必備耗材和儀器 曲霉細胞壁成分 菌絲在組織中生長釋放 熱穩(wěn)定 可溶性:血清，纖支鏡灌洗液，腦脊液 分

3、子量：根據(jù)來源不同從10000到50000不等，屬于高分子化合物半乳甘露聚糖 ELISA指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專注性進展免疫反響的定性和定量檢測方法。 ELISA分為夾心法、間接法和競爭法 夾心法常用于檢測大分子抗原 間接法常用于檢測抗體 競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，普通用于檢測小分子抗原Elisa簡介 將具有專注性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體 參與待測檢體，檢體中假設含有待測之抗原，那么其會與塑膠孔盤上的抗體進展專注性鍵結(jié) 洗去多余待測檢體，參與另一種對抗原專注之一次抗體，與待測抗原進展鍵結(jié) 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，參與

4、帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié) 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，參與酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果夾心法操作原理 將知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原 參與待測檢體，檢體中假設含有待測之一次抗體，那么其會與塑膠孔盤上的抗原進展專注性鍵結(jié) 洗去多余待測檢體，參與帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結(jié) 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，參與酵素受質(zhì)使酵素呈色間接法操作原理 將具有專注性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體 參與待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進展專注性鍵結(jié) 參與帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進展專注性鍵結(jié) 洗去檢體與帶有酵素之抗原，參

5、與酵素受質(zhì)使酵素呈色競爭法操作原理 GM可在患者臨床病癥出現(xiàn)前5-8d獲得陽性結(jié)果 曲菌定植時極少釋放入血，因此有助于鑒別侵襲與定植； GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度； 延續(xù)檢測GM可作為治療療效的監(jiān)測； 在造血干細胞移植患者中的診斷敏感性高； 參考值：I0.5為陽性。2 血清GM實驗的臨床價值 運用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉維酸； 高劑量運用激素 化療的嚴重黏膜炎患者谷類食物中的GM抗原經(jīng)過腸道入血 新生兒和兒童雙歧桿菌定植、食用乳制品； 血液透析； 本身免疫性肝炎等； 食用能夠含有GM的牛奶等高蛋白食物。 交叉反響真菌：青霉、擬青霉、隱球菌、頭狀地霉、組

6、織胞漿菌。3 GM實驗假陽性的情況 釋放入血循環(huán)中的曲霉GM并不繼續(xù)存在而是會很快去除； 以前運用了抗真菌藥物 1.三唑類降低GM程度 2.米卡芬凈類升高GM程度 病情不嚴重； 非粒細胞缺乏的患者。 4 GM實驗假陰性的情況 優(yōu)勢： 鑒別曲霉菌侵襲性感染與定植； 早于臨床病癥和影像學異常5-8d； GM診斷侵襲性曲霉感染的敏感度高于G實驗； 血清中存在時間較短，可作為療效監(jiān)測。5 GM實驗的優(yōu)勢和局限 局限： 陰性實驗結(jié)果不能排除侵襲曲霉病的診斷。侵襲性曲霉病的高危病人，該當每周檢測兩次。 沒有運用新生兒樣本來評價曲霉菌抗原檢測試劑盒的性能。 在慢性牙腫病CGD和Jobs綜合征的患者中，檢出率

7、減低 在侵襲性曲霉病人中，假設采取積極的抗真菌治療，能夠?qū)е虑箍乖瓩z測試劑盒的靈敏度降低 其他屬的真菌如孢擬青霉，青霉，白地酶和組織胞漿有EBA-2單克隆抗體反響性 等許多要素引起的假陽性和假陰性 R5/R4大于等于1.5，R3/R4小于等于0.4 兩個R4之間差距不大于0.2結(jié)果判讀G實驗和GM實驗的結(jié)合運用種屬種屬G G試驗試驗GMGM試驗試驗念珠菌屬念珠菌屬鐮刀菌屬鐮刀菌屬隱球菌屬隱球菌屬曲霉菌屬曲霉菌屬青霉青霉/ /擬青霉擬青霉接合菌綱接合菌綱同時測定同時測定G G實驗和實驗和GMGM實驗有助于早期診斷侵襲性真菌感染！實驗有助于早期診斷侵襲性真菌感染！ 纖支鏡灌洗液肺泡灌洗液 診斷曲霉菌在肺部是定植還是侵襲性生長，關鍵在于其能否合成GM.假設痰液或肺泡灌洗液標本培育到曲霉菌 且GM實驗檢測結(jié)果為陽性，即可診斷為曲霉菌侵襲性感染 腦脊液 穿刺液6.其他樣本的gm實驗 相比天津喜諾操作簡單 1.我們的板條是包被好抗體的 2.喜諾的抗體需求現(xiàn)配現(xiàn)用，而我們早就配好了 3.結(jié)果計算簡單，不用制造線性回歸曲線 我們用的夾心法適用于大分子，而其他廠家用的是競爭法是適用小分子