影響ELISA試驗(yàn)因素ppt課件

1、試劑盒保存于試劑盒保存于2-8使用前應(yīng)先將檢測(cè)試劑盒放置室溫平衡使用前應(yīng)先將檢測(cè)試劑盒放置室溫平衡15-30分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及活性分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及活性劑的溶解。劑的溶解。 真空包裝袋漏氣一般不影響試劑盒質(zhì)量，如真空包裝袋漏氣一般不影響試劑盒質(zhì)量，如須拼組板條于板架上，必須保證板條放平，須拼組板條于板架上，必須保證板條放平，以免影響洗板機(jī)的操作。以免影響洗板機(jī)的操作。標(biāo)本采集后，應(yīng)先將標(biāo)本度放標(biāo)本采集后，應(yīng)先將標(biāo)本度放置分鐘置分鐘標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行離心：采用轉(zhuǎn)標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行離心：采用轉(zhuǎn)速離心速離心1520分鐘分鐘3.取上清液加樣取上清液加樣.標(biāo)本采集后，應(yīng)先將標(biāo)本度或者標(biāo)本

2、采集后，應(yīng)先將標(biāo)本度或者室溫放置一定時(shí)間室溫放置一定時(shí)間標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行離心：采用轉(zhuǎn)速標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行離心：采用轉(zhuǎn)速離心離心1015分鐘分鐘3.取上清液加樣取上清液加樣.標(biāo)本處理過(guò)程嚴(yán)謹(jǐn)，可最大限度避免由標(biāo)本處理過(guò)程嚴(yán)謹(jǐn)，可最大限度避免由于標(biāo)本因素造成的非特異反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的于標(biāo)本因素造成的非特異反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，最大限度避免重復(fù)實(shí)驗(yàn)影響，最大限度避免重復(fù)實(shí)驗(yàn),增加不增加不必要的工作量必要的工作量.1.觀察外包裝，內(nèi)組份有無(wú)漏液。觀察外包裝，內(nèi)組份有無(wú)漏液。2.仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。.仔細(xì)注意加樣全部過(guò)程仔細(xì)注意加樣全部過(guò)程.2.加樣后及時(shí)放入

3、孵育箱，避免包被板在室溫加樣后及時(shí)放入孵育箱，避免包被板在室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 3.標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 1.按規(guī)定加蓋封板膜。按規(guī)定加蓋封板膜。 2.按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制孵育時(shí)間。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制孵育時(shí)間。3. 嚴(yán)格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動(dòng)酶免）嚴(yán)格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動(dòng)酶免）的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測(cè)量工具（全自動(dòng)酶的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測(cè)量工具（全自動(dòng)酶免除外）。免除外）。1.要有適當(dāng)?shù)慕輹r(shí)間（要有適當(dāng)?shù)慕輹r(shí)間（3060秒）。秒）。2.洗板機(jī)吸液要徹底洗板機(jī)吸液要徹底,殘余量低于殘余量低于5ul。3.洗板次數(shù)應(yīng)與說(shuō)明書(shū)要求一

4、致，盡量不要私自洗板次數(shù)應(yīng)與說(shuō)明書(shū)要求一致，盡量不要私自 增加或減少洗板次數(shù)。增加或減少洗板次數(shù)。4.洗板后，拍干包被板，應(yīng)垂直扣在備好的洗板后，拍干包被板，應(yīng)垂直扣在備好的 干凈吸水紙或毛巾上，且每次拍板應(yīng)換掉干凈吸水紙或毛巾上，且每次拍板應(yīng)換掉 前次拍過(guò)的毛巾或吸水紙前次拍過(guò)的毛巾或吸水紙,避免交叉污染避免交叉污染.5.洗液應(yīng)調(diào)至適當(dāng)?shù)淖⒊隽?，每孔?yīng)在洗液應(yīng)調(diào)至適當(dāng)?shù)淖⒊隽浚靠讘?yīng)在 350ul-450ul之間，但不要溢出孔外。之間，但不要溢出孔外。6.稀釋洗液應(yīng)用蒸餾水或去離子水，稀釋洗液應(yīng)用蒸餾水或去離子水，pH 值不宜過(guò)酸或過(guò)堿，保證配出的洗液值不宜過(guò)酸或過(guò)堿，保證配出的洗液 pH值

5、值7.40.2，水質(zhì)宜新鮮，長(zhǎng)菌或，水質(zhì)宜新鮮，長(zhǎng)菌或 有沉淀不宜使用，水保存應(yīng)用非金屬有沉淀不宜使用，水保存應(yīng)用非金屬 容器。容器。7.稀釋好的洗液稀釋好的洗液4度情況下可保存度情況下可保存3-5天天.8.由于洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會(huì)形成由于洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會(huì)形成 結(jié)晶，配制洗液時(shí)應(yīng)完全溶解結(jié)晶，配制洗液時(shí)應(yīng)完全溶解. 顯顯 色色 11.試劑顯色時(shí)先加試劑顯色時(shí)先加A液，后加液，后加B液，二者不要顛倒液，二者不要顛倒.2.前后加入的間隔時(shí)間不要超過(guò)前后加入的間隔時(shí)間不要超過(guò)10分鐘分鐘.3.若把若把A液和液和B液先混和，再加樣顯色，需要求二液先混和，再加樣顯色，需要求二 者等體

6、積混合。者等體積混合。4.底物溶液底物溶液B應(yīng)是澄清透亮，如倒出發(fā)現(xiàn)溶液已呈應(yīng)是澄清透亮，如倒出發(fā)現(xiàn)溶液已呈 微蘭色，表明液體已受污染，應(yīng)廢棄不用。微蘭色，表明液體已受污染，應(yīng)廢棄不用。顯顯 色色 25. 將加樣槽清洗干凈。將加樣槽清洗干凈。6.A、B液應(yīng)避免接觸污物液應(yīng)避免接觸污物 。7.不同廠家顯色液不得混用。不同廠家顯色液不得混用。1加完終止后加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。2讀板時(shí)板底如果不清潔，就會(huì)導(dǎo)致所讀的讀板時(shí)板底如果不清潔，就會(huì)導(dǎo)致所讀的 數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標(biāo) 板的底部是清潔的。板的底部是清潔的。 灰區(qū)又稱灰色帶

7、反應(yīng)。就是把灰區(qū)又稱灰色帶反應(yīng)。就是把 OD值在值在Cut off 值正負(fù)值正負(fù)10%這個(gè)范圍內(nèi)的標(biāo)本稱為灰區(qū)標(biāo)這個(gè)范圍內(nèi)的標(biāo)本稱為灰區(qū)標(biāo)本。本。這個(gè)范圍稱為灰區(qū)。這個(gè)范圍稱為灰區(qū)。1.灰區(qū)是客觀存在的，沒(méi)有不存在灰區(qū)的試劑?；覅^(qū)是客觀存在的，沒(méi)有不存在灰區(qū)的試劑。我們只是盡量減少灰區(qū)的出現(xiàn)比例。我們只是盡量減少灰區(qū)的出現(xiàn)比例。2.減少灰區(qū)最有效的方法就是盡量將板洗滌干減少灰區(qū)最有效的方法就是盡量將板洗滌干凈。凈。3.嚴(yán)格控制溫浴時(shí)間。嚴(yán)格控制溫浴時(shí)間。問(wèn)題問(wèn)題1：只有單次實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)靈敏度偏低或只有單次實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)靈敏度偏低或 者偏高。者偏高。 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：重新實(shí)驗(yàn)，并在實(shí)驗(yàn)中注意試重新實(shí)驗(yàn)

8、，并在實(shí)驗(yàn)中注意試 劑盒的溫度平衡、溫育的時(shí)間、劑盒的溫度平衡、溫育的時(shí)間、 顯色的時(shí)間等影響因素的控顯色的時(shí)間等影響因素的控制制 。 問(wèn)題問(wèn)題2：質(zhì)控品漏檢質(zhì)控品漏檢 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：檢查質(zhì)控品是否有反復(fù)凍融檢查質(zhì)控品是否有反復(fù)凍融 的情況、質(zhì)控品是否有批內(nèi)的情況、質(zhì)控品是否有批內(nèi) 差異、質(zhì)控品是否為差異、質(zhì)控品是否為4攝氏度攝氏度 久置。久置。 問(wèn)題：?jiǎn)栴}：日常使用中出現(xiàn)弱陽(yáng)性標(biāo)本漏檢。日常使用中出現(xiàn)弱陽(yáng)性標(biāo)本漏檢。 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：A標(biāo)本本身由于各種因素影響而表現(xiàn)標(biāo)本本身由于各種因素影響而表現(xiàn) 為弱陽(yáng)性，實(shí)際上為陰性標(biāo)本。為弱陽(yáng)性，實(shí)際上為陰性標(biāo)本。 B由于標(biāo)本自身含量較低，易隨

9、實(shí)由于標(biāo)本自身含量較低，易隨實(shí) 驗(yàn)水平位試劑盒調(diào)整等因素波動(dòng)，驗(yàn)水平位試劑盒調(diào)整等因素波動(dòng)， 對(duì)這部份標(biāo)本的處理應(yīng)格外慎重，對(duì)這部份標(biāo)本的處理應(yīng)格外慎重， 有條件的地區(qū)應(yīng)進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)。有條件的地區(qū)應(yīng)進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)。 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：C注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的儀器設(shè)備注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的儀器設(shè)備 是否定期校準(zhǔn)。是否定期校準(zhǔn)。 D注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的板、酶標(biāo)注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的板、酶標(biāo) 試劑的批號(hào)是否在有效期之內(nèi)試劑的批號(hào)是否在有效期之內(nèi).問(wèn)題：?jiǎn)栴}：質(zhì)控品靈敏度偏高質(zhì)控品靈敏度偏高 。處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)控品存在衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)控品存在 批間批內(nèi)差異。批間批內(nèi)差異。 實(shí)驗(yàn)室相關(guān)

10、條件改變導(dǎo)致質(zhì)控變化。實(shí)驗(yàn)室相關(guān)條件改變導(dǎo)致質(zhì)控變化。 問(wèn)題：多次實(shí)驗(yàn)靈敏度一直偏低。問(wèn)題：多次實(shí)驗(yàn)靈敏度一直偏低。處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：A保存環(huán)境不規(guī)范。保存環(huán)境不規(guī)范。 B孵箱溫度不足。孵箱溫度不足。 C溫育時(shí)間不足。溫育時(shí)間不足。 問(wèn)題：?jiǎn)栴}：?jiǎn)未螌?shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性單次實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：注意實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的影響因素，特注意實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的影響因素，特 別是實(shí)驗(yàn)中的洗板應(yīng)設(shè)置浸泡別是實(shí)驗(yàn)中的洗板應(yīng)設(shè)置浸泡 30-60秒時(shí)間。秒時(shí)間。 問(wèn)題：?jiǎn)栴}：臨床實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性偏高。臨床實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性偏高。 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：A注意檢查洗滌液中結(jié)晶部份是否注意檢查洗滌液中結(jié)晶部份是否 完全溶解。完全溶解。 B注意檢查實(shí)驗(yàn)中所使用的儀器設(shè)注意檢查實(shí)驗(yàn)中所使用的儀器設(shè) 備是否定期校準(zhǔn)備是否定期校準(zhǔn) 。 C注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的板、酶標(biāo)注意檢查實(shí)驗(yàn)中所用的板、酶標(biāo) 試劑的批號(hào)是否相同，不同批號(hào)試劑的批號(hào)是否相同，不同批號(hào) 試劑不得混用。試劑不得混用。 處理意見(jiàn)：處理意見(jiàn)：D假陽(yáng)性標(biāo)本表現(xiàn)在臨界值附近較假陽(yáng)性標(biāo)本表現(xiàn)在臨界值附近較 多，通常與當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)的水平有關(guān)，多，通常與當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)的水平有關(guān)， 注意檢查實(shí)驗(yàn)條件的波動(dòng)注意檢查實(shí)驗(yàn)條件的波動(dòng) 。 E避免加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)避免加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 。 F由于試劑盒靈敏度過(guò)高而造成