試驗(yàn)六細(xì)菌的生化試驗(yàn)

1、硫乙醇酸鈉1g實(shí)驗(yàn)六細(xì)菌的生化試驗(yàn)?zāi)康囊? 通過本試驗(yàn)加深對(duì)細(xì)菌生化反應(yīng)原理和意義的理解；2 掌握常規(guī)細(xì)菌生化試驗(yàn)操作方法。操作步驟一、糖類發(fā)酵（分解）試驗(yàn)原理：細(xì)菌含有分解不同糖（醇、苷）類的酶，因而分解各種糖（醇、苷）類的能力也不一樣。有些細(xì)菌分解某些糖（醇、苷）產(chǎn)酸（符號(hào)：+）、產(chǎn)氣（符號(hào)：O），培養(yǎng)基由蘭變黃（指示劑溴麝香草酚蘭由蘭遇酸變黃的結(jié)果），并有氣泡；有些產(chǎn)酸，僅培養(yǎng)基變黃；有些不分解糖類（符號(hào)：-），培養(yǎng)基仍為蘭色。（一）適用于需氧菌的方法培養(yǎng)基 用鄧亨氏（Dun ham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g,氯化鈉0.5g,水100ml, pH7.6 按0.51 %的比例分別加入各種

2、糖），每100ml加入1.2ml的0.2%溴麝香草酚藍(lán)（或用1.6% 溴甲酚紫酒精溶液 0.1ml ）作指示劑。分裝于試管（每一個(gè)試管事先都加有一枚倒立的小發(fā) 酵管），10磅高壓滅菌10分鐘。如在培養(yǎng)基中加入瓊脂達(dá) 0.50.7%，則成半固體，可省去倒立的小發(fā)酵管。0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液配法:0.2g5ml95ml溴麝香草酚藍(lán)0.1N NaOH蒸餾水方法：從瓊脂斜面的純培養(yǎng)物上,用接種環(huán)取少量被檢細(xì)菌接種于糖發(fā)酵管培養(yǎng)基中（如為半固體，應(yīng)穿刺），在37C培養(yǎng),般觀察 23天，觀察時(shí)用上述符號(hào)標(biāo)記之。（二）適用于厭氧菌的方法培養(yǎng)基:蛋白胨20g氯化鈉5g瓊脂1g1.6%溴甲酚紫酒精溶液1ml蒸

3、餾水1000ml將胨、鹽、硫乙醇酸鈉、瓊脂和水放于燒瓶?jī)?nèi)，加熱使融化，再加入所需的糖，調(diào)整pH到7.0,加入指示劑，分裝試管，在10磅高壓滅菌15分鐘后，做成高層。方法 將厭氧菌的培養(yǎng)物用穿刺接種法接種于上述培養(yǎng)基的深部，于37C培養(yǎng)。結(jié)果觀察同需氧菌。二、V P試驗(yàn)（二乙酰試驗(yàn)）原理：某些細(xì)菌能從葡萄糖t丙酮酸t(yī)乙酰甲基甲醇（ Acetymethyl carbinol ）宀2, 3- 丁烯二醇（2, 3-bytaylene cylycol ）,在有堿存在時(shí)氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物 起作用，產(chǎn)生粉紅色的化合物。其反應(yīng)式為：2CH3COCOOH> CH3COCHOHCH 3 十

4、 2CO?丙酮酸乙酰甲基甲醇-2H5CH3CHOHCHOHCH 3 KOHCH3COCOCH 32, 3-丁烯二醇丁二酮（二乙酰）乙離甲基甲尊OCCHxxNH2丁二瀾孤基丁二恫（二乙酰）= C-CHi=I+HtO= CCH*紅色化合物培養(yǎng)基：含葡萄糖、K2HPO4、蛋白胨各5g,完全溶解于1000ml水中后，分裝試管內(nèi)， 間歇滅菌或10磅10分鐘滅菌。方法：1. O' Meara' s法試劑：40g氫氧化鉀溶于100ml蒸餾水中，加入 0.3g肌酐即成。將被檢細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)后，于3537C培養(yǎng)48小時(shí)，于每毫升培養(yǎng)物中加入0.1ml，猛烈搖振混合。2. Barit

5、t' s 法試劑：6% a-奈酚酒精溶液為甲液，40%氫氧化鉀為乙液。同上法接種培養(yǎng)細(xì)菌，于 2ml培養(yǎng)液內(nèi)加入甲液1ml和乙液0.4毫升，搖振混合。試驗(yàn)時(shí)強(qiáng)陽性者約于 5分鐘后，可產(chǎn)生粉紅色反應(yīng)（長(zhǎng)時(shí)間無反應(yīng)，置室溫過夜），次日不變者為陰性。三、甲基紅（M . R.）試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中生成丙酮酸，有的甚至進(jìn)一步被分解為甲酸、乙酸、乳酸等，而不是生成 V P試驗(yàn)中的二乙酰，從而使培養(yǎng)基的pH下降至4.5或以下（V P試驗(yàn)的培養(yǎng)物pH常在4.5以上），故加入甲基紅試劑呈紅色。 本試驗(yàn)常與 V P試驗(yàn)一起使用， 因?yàn)榍罢叱赎栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。培養(yǎng)基：同 V P試驗(yàn)培養(yǎng)

6、基。甲基紅指示劑：0.1g甲基紅溶于300ml95 %酒精中，再加入蒸餾水 200ml。方法：接種細(xì)菌于培養(yǎng)液中，37C培養(yǎng)27天后，于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑，變紅色者為陽性反應(yīng)。四、淀粉水解試驗(yàn)在培養(yǎng)基上滴加碘液， 可在菌落周圍出原理：細(xì)菌如產(chǎn)生淀粉酶可將淀粉分解為糖類, 現(xiàn)透明區(qū)。淀粉瓊脂培養(yǎng)基：pH7.6的肉浸湯瓊脂90ml無菌羊血清（只對(duì)不易生長(zhǎng)的細(xì)菌才加）5ml無菌3 %淀粉溶液10ml將瓊脂加熱融化，冷卻到 45C，加入淀粉溶液及羊血清，混勻后，傾注平板。方法：將細(xì)菌劃線接種于上述平板上，在37 C培養(yǎng)24小時(shí)。生長(zhǎng)后取出，在菌落處滴加革蘭氏碘液少許，觀察。結(jié)果：培養(yǎng)基呈深藍(lán)色，能水

7、解淀粉的細(xì)菌及其菌落周圍有透明的環(huán)。五、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理：當(dāng)細(xì)菌利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，生成碳酸鈉，并同時(shí)利用銨鹽生成氫，使培養(yǎng)基呈堿性。方法1：Simmons氏培養(yǎng)基：檸檬酸鈉lgK2HPO4lg硫酸鎂0.2g氯化鈉5g瓊脂（洗過）20gNH4H2PO41g1 %溴麝香草酚藍(lán)酒精溶液10ml蒸餾水 加至1, 000ml調(diào)整pH至6.8，15磅15分鐘高壓滅菌后制成斜面。將上述培養(yǎng)基中的瓊脂省去，制成液體培養(yǎng)基，同樣可以應(yīng)用。將被檢細(xì)菌少量接種到培養(yǎng)基中，37C培養(yǎng)24日，培養(yǎng)基變藍(lán)色者為陽性，不變者為陰性。方法2:Christente

8、n氏培養(yǎng)基：檸檬酸鈉5gKH 2PO41g葡萄糖0.2g氯化鈉5g酚紅0.012g半胱氨酸0.1g瓊脂15g酵母浸膏0.5g蒸餾水加至1000ml有的配方尚加檸檬酸鐵銨0.4g，硫代硫酸鈉0.08g。PH不必調(diào)整。高壓滅菌后做成短厚的斜面。接種時(shí)先劃線后穿刺，孵育于37C觀察七天。陽性者培養(yǎng)基變紅色，陰性者培養(yǎng)基仍為黃色。六、吲哚試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基質(zhì)），經(jīng)與試劑中的對(duì)位二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚。培養(yǎng)基：鄧亨氏蛋白胨溶液同（一）試劑：常用下述兩種。1.歐立希氏（Ebrlich ' s）吲哚試劑95ml純乙醇對(duì)位二甲基氨基苯甲醛（P-dimethy

9、l aminobenzaldehyde ） 1g濃鹽酸20ml色氨酸>Oq.75g25ml+ NH3 4-CHiCOCOOHN ( CHa ):HCH聞呀對(duì)二申基氛墓N < CH. )玫先以乙醇溶解試劑，后加鹽酸，要避光保存。2. Kovacs 試劑5g對(duì)位二甲基氨基苯甲醛方法：以接種環(huán)接種待試細(xì)菌的新鮮斜面培養(yǎng)物于鄧亨氏蛋白胨溶液中，37 C培養(yǎng)2448小時(shí)后（可延長(zhǎng)45天）。于培養(yǎng)液中加入戊醇或二甲苯23ml，搖勻，靜置片刻后，沿試管壁加入試劑 2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液體變紅色者為陽性反應(yīng)。也可將一指頭大的脫脂棉，滴上兩滴歐立希氏試劑，再在同處加滴兩滴高硫酸鉀（K2S2O

10、4）飽和水溶液，置于含培養(yǎng)液的被檢試管中，離液面約半寸，置燒杯內(nèi)水浴煮沸為止，脫脂棉上出現(xiàn)紅色為陽性。此法略繁，但省試齊川準(zhǔn)確，因?yàn)閷⒃噭┘拥揭后w中，吲哚 和糞臭素均呈陽性，而用此法，只是吲哚（它能揮發(fā)）呈陽性反應(yīng)。亦可以濾紙片浸濕1%的二甲基苯丙烯甲醛的 10%濃HCI溶液，然后以接種環(huán)刮取一環(huán) 瓊脂的純培養(yǎng)物涂布于該濾紙上。細(xì)菌涂印周圍呈藍(lán)色者為陽性，細(xì)菌涂印周圍無色澤變化或淡黃色者為陰性。厭氧菌用蛋白胨水蛋白胨20g葡萄糖10g硫乙醇酸鈉1gNa2HPO4 (無水)2g瓊脂1g蒸餾水1000ml加熱溶解，調(diào)整 pH至7.47.6,過濾，分裝小試管，15磅高壓15分鐘。七、硫化氫試驗(yàn)原理：

11、有些細(xì)菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫（H2S）, H2S會(huì)使培養(yǎng)基中的醋酸鉛或氯化鐵形成黑色的硫化鉛或硫化鐵。方法1:醋酸鉛瓊脂法培養(yǎng)基：肉湯瓊脂100ml10%硫代硫酸鈉溶液（新配）2.5ml10%醋酸鉛溶液3ml三種成份分別高壓滅菌，前二者混合后待涼至60C，加入醋酸鉛溶液，混合均勻，無菌分裝試管達(dá)56cm高，立即浸入冷水中，使冷凝成瓊脂高層。方法：用接種針蘸取純培養(yǎng)物，沿管壁作穿刺，孵育于 37 C 12天后觀察，必要時(shí)可延長(zhǎng)57天。培養(yǎng)基變黑色者為陽性?；?qū)⒓?xì)菌培養(yǎng)于肉湯、 肝浸湯瓊脂斜面或血清葡萄糖瓊脂斜面，在試管的棉花塞下方掛 一約6.5X 0.6cm2的浸蘸飽和醋酸鉛溶液（10g

12、醋酸鉛溶于50毫升沸蒸餾水中即成）且已干燥的濾紙條，于37C培養(yǎng)，觀察7天，紙條變黑者為陽性結(jié)果。方法2:三氯化鐵明膠培養(yǎng)基法培養(yǎng)基：硫胨(Thiopeptone)25g明膠120g牛肉膏7.5g氯化鈉5g蒸餾水加至1000ml上述成份火菌后趁熱加入5ml滅菌的10%氯化鐵溶液。立即以無菌操作分裝試管，達(dá)56cm高，迅速冷凝成高層。八、硝酸鹽還原試驗(yàn)方法：穿刺接種，培養(yǎng)于 37C觀察7天，培養(yǎng)基變黑色者為陽性。原理：有的細(xì)菌能把硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而亞硝酸鹽能和對(duì)氨基苯磺酸作用生成對(duì)重氮基苯磺酸，且對(duì)重氮基苯磺酸與a -萘胺作用能生成紅色的化合物N- a -萘胺偶氮苯磺酸，其反應(yīng)式為：對(duì)重氮

13、基苯磺酸對(duì)氨基苯磺酸住一蔡胺N-漑第胺偶氮苯堿醜（一）適用于需氧菌的方法培養(yǎng)基：硝酸鉀（不含NO2-）0.2g蛋白胨5g蒸餾水1000ml溶解，調(diào)節(jié)pH至7.4,分裝試管。每管約 5毫升，15磅高壓滅菌15分鐘。試劑：甲液對(duì)位氨基苯磺酸0.8g5N醋酸溶液100ml乙液a 萘胺0.5g5N醋酸溶液100ml方法：接種細(xì)菌后37C培養(yǎng)4天，沿管壁加入甲液二滴與乙液二滴，當(dāng)時(shí)觀察。陽性者立刻 呈紅色。（二）厭氧菌硝酸鹽培養(yǎng)基法培養(yǎng)基：硝酸鉀（不含 NO 2-，化學(xué)純）1g磷酸氫二鈉2g葡萄糖1g瓊脂1g蛋白胨20g蒸餾水1000ml加熱溶解，調(diào)整pH至7.2,過濾，分裝試管，15磅高壓滅菌15分鐘

14、。方法：接種后作厭氧培養(yǎng)，試驗(yàn)方法和結(jié)果觀察同上法，但培養(yǎng)12日即可。九、石蕊牛乳試驗(yàn)原理：紫乳培養(yǎng)基中的主要成分為干酪素、乳糖及指示劑等。由于各種細(xì)菌對(duì)這些成分的作用不同，引起培養(yǎng)基的變化也有不同，觀察的主要變化為：產(chǎn)酸：主要從乳糖產(chǎn)生酸，指示劑變酸色（石蕊為紅色，溴甲酚紫為黃色）。酸凝或加有產(chǎn)氣：產(chǎn)酸，并有牛乳的凝固（pH4.7以下）；如有氣體形成，則凝塊中有裂隙，在魏氏梭菌則呈“暴烈發(fā)酵”。凝乳酶產(chǎn)生：很少或無酸產(chǎn)生，牛乳凝固。胨化：部分或大部分牛奶變清亮。產(chǎn)堿：細(xì)菌產(chǎn)生蛋白酶可將干酪素分解產(chǎn)生胺或氨，使培養(yǎng)基的pH進(jìn)一步升高，呈深紫色。培養(yǎng)基：加石蕊的酒精飽和溶液于新鮮脫脂牛奶中，使達(dá)

15、淺紫色，分裝于小試管，用流動(dòng)蒸汽滅菌，每天1次，每次1小時(shí)，共3天。接種細(xì)菌后，培養(yǎng)及觀察一周。石蕊酒精溶液的制備：8g石蕊在30ml40 %乙醇中研磨，吸出上清液，再如此用乙醇操作兩次。加40%乙醇到總量為100ml，并煮沸1分鐘。取用上清液，必要時(shí)可加幾滴1N鹽酸使達(dá)艷紫色?，F(xiàn)在多應(yīng)用溴甲酚紫代替石蕊，即于100ml脫脂乳中加入1.2ml的1.6%溴甲酚紫的乙醇溶液。方法：將細(xì)菌接種于紫乳培養(yǎng)基中，37 C培養(yǎng)17天后觀察結(jié)果，根據(jù)細(xì)菌的種類不同，可呈現(xiàn)上述一種或幾種現(xiàn)象。十、凝固血清液化試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌產(chǎn)生胞外酶，可使凝固的血清液化，借此鑒別細(xì)菌。呂氏血清培養(yǎng)基：1 %葡萄糖肉湯（pH

16、7.6） 100毫升，無菌羊（牛、豬）血清 300ml, 混合后，分裝于無菌試管，每管約57ml，在血清凝固器內(nèi)擺成斜面，間歇滅菌。第一天，80C l小時(shí)，于37C過夜；第二天，85 C 1小時(shí)，于37C過夜；第三天，90 C 1小時(shí)，于37C過夜。棄去有污染的管。葡萄糖1g氯化鈉5g方法與結(jié)果：將純培養(yǎng)物在斜面上作劃線接種，于37C培養(yǎng)1周，觀察培養(yǎng)基有無液化。十一、肉渣消化試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能夠產(chǎn)生蛋白酶，消化肉渣。熟肉基：即于 pH7.47.6的牛肉湯中，于分裝試管前，加入半指高的肉渣。液面上加 少量凡士林或液體石蠟，15磅高壓滅菌30分鐘。方法：用無菌毛細(xì)玻管或接種環(huán)接種細(xì)菌后，用蠟筆

17、于培養(yǎng)基的肉渣層上緣劃一橫線作標(biāo)記，在37C培養(yǎng)幾天，觀察管內(nèi)肉渣的高度有無變化，即可判定肉渣是否已被部分消化。十二、明膠液化試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能產(chǎn)生分泌于細(xì)胞外的明膠酶，分解明膠為氨基酸， 使半固體的明膠培養(yǎng)基成為液體。培養(yǎng)基：明膠培養(yǎng)基（見附錄培養(yǎng)基27）方法1、明膠瓊脂平板法可于普通瓊脂加入1%明膠傾注平板后，分為四個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)分別劃線接種一種被檢菌，經(jīng)2448小時(shí)培養(yǎng)后，于培養(yǎng)基表面注入氯化汞溶液（氯化汞12g,蒸餾水80ml，濃鹽酸16ml）,如細(xì)菌液化明膠，則在菌落周圍出現(xiàn)透明帶。方法2、將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，于20C培養(yǎng)7天，逐日觀察明膠液化現(xiàn)象。如室溫咼，培養(yǎng)基自行溶化

18、時(shí)，可與冰箱內(nèi)放置30分鐘，然后取出觀察結(jié)果，不再凝固時(shí)為陽性。十三、尿素酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶。尿素酶可分解尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基的pH值升高，反應(yīng)式為：尿素酶z、NH2-C-NH 2+2H2O( NH4) 2CO3一； 2NH3+CO2+H2O培養(yǎng)基: 應(yīng)用 Christenrsen氏培養(yǎng)基蛋白胨1gKH 2PO42g0.2%酚紅溶液6ml瓊脂20g蒸餾水加至1000ml調(diào)整pH至6.9。需生長(zhǎng)因子的細(xì)菌，可加入酵母浸膏0.1%。121 C高壓滅菌15分鐘，冷卻到55C時(shí)加入十分之一的 20%尿素液（經(jīng)濾過法除菌） 使尿素含量為2% （即每1000ml中有20g）,制成短斜

19、面。接種細(xì)菌時(shí)，同時(shí)作劃線及穿刺， 置37C培養(yǎng)24小時(shí)后觀察，培養(yǎng)基從黃色變紅色時(shí)為陽性。接種量多，反應(yīng)快的細(xì)菌，數(shù) 小時(shí)即可使培養(yǎng)基變紅。陰性者應(yīng)繼續(xù)觀察4天?？梢允∪キ傊?，將各物（包括20g尿素）溶解后，過濾除菌，無菌分裝，培養(yǎng)2日，無菌者應(yīng)用。十四、觸酶試驗(yàn)原理：觸酶又稱過氧化氫酶，能將過氧化氫分解為水和氧氣：細(xì)胞色素人2出。22H2O+O2 t培養(yǎng)基：細(xì)菌應(yīng)培養(yǎng)在不含血液的營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，因?yàn)榧t血球含有接觸酶。方法：將約1 ml3%的H2O2傾注于生長(zhǎng)物（菌落或菌苔）上，有氣泡（。2）發(fā)生者為陽性。亦可于清潔小試管中加入少量的H2O2 （30%）,再用清潔無菌的細(xì)玻捧（或火焰封口的毛細(xì)玻

20、管或鎳鉻絲做成的接種環(huán)）蘸細(xì)菌少許，插入于H2O2液面下，有氣泡產(chǎn)生者為陽性。不可用鉑環(huán)取細(xì)菌，因?yàn)殂K有時(shí)可使H2O2產(chǎn)生氣泡。Daniel, Y . C.法：將細(xì)菌在平皿上劃線，培養(yǎng)于 37C 24小時(shí)。另取一支毛細(xì)玻璃管 （外徑1mm,長(zhǎng)67mm左右）,將其一端浸于3%的H2o2液中，使H2o2上升到毛細(xì)玻管內(nèi)， 高度約達(dá)20mm。將這一支帶有H2O2的毛細(xì)管下端，輕輕接觸菌落，毛細(xì)管內(nèi)立即出現(xiàn)"沸 騰”者為強(qiáng)陽性，觀察時(shí)間以10秒鐘為限。十五、氧化酶試驗(yàn)（Kovac試驗(yàn)）原理：氧化酶及細(xì)胞色素氧化酶。做氧化酶試驗(yàn)時(shí)，此酶并不直接與氧化酶試劑起反應(yīng)，而是首先使細(xì)胞色素 C氧化，然

21、后此氧化型細(xì)胞色素 C再使對(duì)苯二胺氧化， 產(chǎn)生顏色反應(yīng)。1氧化酶+細(xì)胞色素2還原型細(xì)胞色素 C+2H + 2 O22氧化型細(xì)胞色素 C十H2OCH* CH. XZNCH. CHt XZN*丄.0氧化型細(xì)胞色索vN61/CHa CH,（四甲基苯二胺II N* 嚴(yán)/CH* CHS<藍(lán)鹽 >試劑，1%鹽酸四甲基苯二胺水溶液，或1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺水溶液，配制后盛于棕色瓶中，置冰箱中可保存 2周，若冰凍保存可用 46周。方法1如細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落，可將試劑直接滴在細(xì)菌的菌落上，菌落呈玫 瑰紅色然后到深紫色者為氧化酶陽性。方法2取白色潔凈濾紙一角，蘸取試驗(yàn)菌菌落少許，加試劑一滴，陽

22、性者立即呈粉紅 色，以后顏色逐漸加深。十六、DNA酶試驗(yàn)原理：DNA酶可使DNA鏈水解成為由幾個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈。長(zhǎng)鏈DNA可被酸沉淀，而水解后形成的寡核苷酸，則可溶于酸，于DNA瓊脂平板上進(jìn)行試驗(yàn)，可在菌落周圍形成透明環(huán)。培養(yǎng)基： DNA酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂（pH7.2）100ml脫氧核糖核酸（DNA）0.2g8% CaCb水溶液 1ml方法：將被檢菌接種于 0.2%DNA瓊脂平板上做點(diǎn)狀接種，于 3537C培養(yǎng)1824小 時(shí)后，用1N鹽酸傾注平板。于菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)為陽性。十七、脂酶試驗(yàn)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。加在培養(yǎng)基中的維多利亞藍(lán)可與脂肪結(jié)合成為無色化合

23、物，如果脂肪被細(xì)菌產(chǎn)生的脂肪酶分解，則維多利亞藍(lán)釋出，呈現(xiàn)深藍(lán)色。該試驗(yàn)主要用于厭氧菌的鑒定。培養(yǎng)基：脂酶培養(yǎng)基蛋白胨10g酵母浸膏3g氯化鈉5g瓊脂20gpH7.8蒸餾水1000ml玉米油50ml蒸餾水900ml方法：將被檢細(xì)菌接種于脂酶培養(yǎng)基上，于3537C培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)菌如有脂酶，則使培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色，否則培養(yǎng)基不變色（無色或粉紅色）。十八、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理：有的細(xì)菌具有脫羧酶，能使氨基酸脫羧（ -COOH ）,生成胺和CO?，使培養(yǎng)基的 pH升高，最常用的氨基酸有賴氨酸、鳥氨酸和精氨酸?；A(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨5g葡萄糖1g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12ml蒸餾水1000ml調(diào)整pH到6.8，每100m1基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入所需要測(cè)定的氨基酸0.5g