《DNA重組技術(shù)的基本工具》課件解讀

1、基因工程基因工程每每100kg 豬或牛的胰腺中僅可提取豬或牛的胰腺中僅可提取45g。1979年，美國將年，美國將人的胰島素基因人的胰島素基因重組到重組到大腸桿菌大腸桿菌內(nèi)，內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了細(xì)菌生產(chǎn)胰島素，大大降低了生產(chǎn)成本。實(shí)現(xiàn)了細(xì)菌生產(chǎn)胰島素，大大降低了生產(chǎn)成本。治療糖尿病特效藥 據(jù)WTO調(diào)查： 2005年全世界約有糖尿病患者1.8億人，我國約6000萬。基因工程的概念 基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過 和 ，賦予生物以 ，創(chuàng)造出更符合人們需要的新新的生物類型和生物產(chǎn)品。基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過程問題探討：蘇云金芽孢桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋

2、白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。想一想需要做哪些關(guān)鍵工作？蘇云金芽孢桿菌蘇云金芽孢桿菌普通棉花抗蟲棉普通棉花抗蟲棉思考：自然界是否存在一種生物的DNA進(jìn)入另一生物的情況？2.單細(xì)胞生物并沒有在進(jìn)化中滅絕，有何保護(hù)機(jī)制？可能產(chǎn)生了一些特殊的酶可能產(chǎn)生了一些特殊的酶來防范。可而這種酶能識(shí)別外來防范。可而這種酶能識(shí)別外來侵入的來侵入的DNA并將其分解，而并將其分解，而對(duì)自身的對(duì)自身的DNA不能起作用。不能起作用?！胺肿邮中g(shù)刀分子手術(shù)刀”限限制性核酸內(nèi)切酶制性核酸內(nèi)切酶1.“分子手術(shù)刀”限制酶 （1）來源：主要是從 中分離純化出來的。 （2）功能： 能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特

3、定的 ， 并且使每一條鏈中特定部位部位的兩個(gè)核苷酸之間的 斷開. (切割部位一般都具有反向重復(fù)序列） 因此具有專一性(特異性）。 （3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式： 和 。思考與探究 P7 （2）1、細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其DNA分子中不具備這種限制酶的識(shí)別切割序列；2：通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？ T磷磷酸酸二二酯酯鍵鍵1234512345 A限制酶DNA解旋酶區(qū)別切割特定的核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的的磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵將將DNADNA兩條鏈的兩條鏈的

4、氫鍵氫鍵打開形成兩條單鏈打開形成兩條單鏈能被限制酶能被限制酶特異性識(shí)別特異性識(shí)別的切割部位的切割部位都具有都具有回文回文序列序列：在切在切割部位，一割部位，一條鏈正向讀條鏈正向讀的堿基順序的堿基順序與另一條鏈與另一條鏈反向讀的順反向讀的順序完全一致序完全一致。黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端平末端平末端平末端平末端二、“分子縫合針” DNA連接酶催化催化 形成形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵類型DNA聚合酶DNA連接酶區(qū)別區(qū)別1 1區(qū)別區(qū)別2 2相同點(diǎn)相同點(diǎn)1)1)只能將只能將單個(gè)核苷酸單個(gè)核苷酸連連接到接到已有的核酸片段已有的核酸片段上，上，形成形成磷酸二酯鍵磷酸二酯

5、鍵形成形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵1)1)在在兩個(gè)兩個(gè)DNADNA片段片段之之間間形成形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵2)2)以以一條一條DNADNA鏈為模板鏈為模板，連接成一條互補(bǔ)連接成一條互補(bǔ)的的DNADNA鏈鏈2)2)將將DNADNA雙鏈上的兩雙鏈上的兩個(gè)缺口個(gè)缺口同時(shí)連接起來，同時(shí)連接起來，不需要模板不需要模板三、“分子運(yùn)輸車” 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體載體需要的條件：有1多個(gè)限制酶切點(diǎn)對(duì)受體細(xì)胞無害導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)有某些標(biāo)記基因，便于篩選常用運(yùn)載體： 細(xì)菌的質(zhì)粒 噬菌體或某些動(dòng)植物病毒假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？作為分子運(yùn)輸車載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來做分子