標(biāo)記物的制備與鑒定

1、標(biāo)記物制備與鑒定125125I I- -125125I I或或125125I I+ +125125I-I-標(biāo)記物標(biāo)記物（混合物）（混合物）Ch-TCh-T、LPOLPO氧化氧化取代反應(yīng)取代反應(yīng)直接標(biāo)記法化學(xué)或酶促反應(yīng)，將化學(xué)或酶促反應(yīng)，將放射性負(fù)電碘離子氧放射性負(fù)電碘離子氧化成碘原子或正電碘化成碘原子或正電碘離子，通過取代反應(yīng)離子，通過取代反應(yīng)置換被標(biāo)記物分子中置換被標(biāo)記物分子中酪氨酸或酪胺殘基以酪氨酸或酪胺殘基以及組胺殘基上的氫原及組胺殘基上的氫原子。子。 n 使用無還原劑的高使用無還原劑的高比放射性碘源比放射性碘源n 被標(biāo)記物用量要少被標(biāo)記物用量要少n ch-Tch-T用量要低用量要低n

2、控制總反應(yīng)體積控制總反應(yīng)體積200l200ln 反應(yīng)時間反應(yīng)時間1-21-2分鐘分鐘n 弱堿性反應(yīng)條件弱堿性反應(yīng)條件 bolton-Hunter間接標(biāo)記法 聯(lián)接標(biāo)記聯(lián)接標(biāo)記( ( bolton-Hunter ) )預(yù)先將預(yù)先將125125I I 用用ch-T法標(biāo)記琥珀酰法標(biāo)記琥珀酰 胺酯，制成的胺酯，制成的125125I I 化化 脂功能基團可與蛋白脂功能基團可與蛋白 分子上的氨基酸殘基分子上的氨基酸殘基 反應(yīng)，從而使待標(biāo)記反應(yīng)，從而使待標(biāo)記 物被碘化。物被碘化。 聚合、聚合、損傷物損傷物 標(biāo)記蛋白標(biāo)記蛋白游離游離125125I I125碘-標(biāo)記物的制備純化 凝膠過濾法 離子交換層析法 聚丙烯

3、酰胺 凝膠電泳 高效液相色譜法125碘-標(biāo)記物的制備鑒定放射化學(xué)純度l 單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率l 應(yīng)大于95%免疫活性l 標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力l 標(biāo)記物與過量抗體反應(yīng)百分比l 該值越大, 標(biāo)記物免疫活性好 結(jié)果準(zhǔn)，結(jié)果準(zhǔn)，測定復(fù)雜測定復(fù)雜比放射活性l單位化學(xué)量標(biāo)記物中含單位化學(xué)量標(biāo)記物中含的放射性強度的放射性強度l單位：單位：Ci/g Ci/g mCi/mgCi/mmol mCi/mgCi/mmol l比放射性過高，將影響比放射性過高，將影響標(biāo)記物免疫活性標(biāo)記物免疫活性 計算法：依據(jù)標(biāo)記反應(yīng)中放射性核素的利用率（標(biāo)記率）來計算標(biāo)記物的比放射性. 自身置換法 ：

4、比較標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原的免疫活性來測定標(biāo)記物的比放射性 結(jié)果結(jié)果欠欠準(zhǔn)，準(zhǔn)，計算計算簡便簡便比放射性計算法 自身置換曲線自身置換曲線 l反應(yīng)系統(tǒng)：限量Ab和遞增劑量(cpm)的標(biāo)記抗原l標(biāo)記抗原的結(jié)合率(B/T%)隨標(biāo)記抗原總量的增加而減少 l兩條曲線平行,若標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)品抗原具有相同的免疫活性標(biāo)準(zhǔn)曲線 l反應(yīng)系統(tǒng):抗體（限量）、標(biāo)記抗原（定量）和劑量遞增的標(biāo)準(zhǔn)抗原組成 l標(biāo)記抗原與抗體的結(jié)合率(B/T%)隨標(biāo)準(zhǔn)抗原的增加而競爭抑制性減少 比放射性=自身置換法比放射性自身置換法標(biāo)準(zhǔn)曲線與自身置換曲線平行 表明在相同的放射性結(jié)合水平上，二實驗中抗體上結(jié)合的抗原物質(zhì)總量相同 計算置換曲線平行段某結(jié)合率的放射性強度(cpm/ml換算為nCi/ml) 計算標(biāo)準(zhǔn)曲線平行段相應(yīng)結(jié)