焦慮抑郁行為學(xué)試驗(yàn)方法

1、1、 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)Open field test又稱敞箱實(shí)驗(yàn),就是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中自主行為、 探究行為與緊張度的一種方法.例如動(dòng)物對(duì)新開闊環(huán)境的恐懼而主要在周邊區(qū)域活動(dòng),在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)較少,但動(dòng)物的探究特性又促使其產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)的動(dòng)機(jī).1 .開口的木盒底部形成16個(gè)等大的方格.場(chǎng)地中央置一彩色瓶子以激發(fā)小鼠的好奇心. 照明來(lái)自一高出場(chǎng)地中央2、80 m的40 W白熾燈.2 .預(yù)適應(yīng)：每只小鼠放入場(chǎng)地中央自由活動(dòng) 3min3 .每只小鼠面朝墻放入同一個(gè)拐角方格,并讓其自由探索環(huán)境5 min.4 .每只小鼠測(cè)試結(jié)束后,濕布洗擦場(chǎng)地并用干布擦干.5 .數(shù)據(jù)分析：跨越方格總數(shù)以雙后肢跨出作為標(biāo)

2、準(zhǔn),時(shí)間也以后肢為算.第一格的潛伏 期、周邊時(shí)間、抬腿次數(shù)雙腿離地.2、 高架十字迷宮elevated plus-maze,EPM就是非條件反射模型,以動(dòng)物自發(fā)的恐懼樣反應(yīng)為行為學(xué)根底.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)就就是由于動(dòng)物對(duì)新環(huán)境的探究與對(duì)高懸開放臂的恐 懼而形成的矛盾沖突狀態(tài),從而反映出動(dòng)物的焦慮情緒,所以高架十字迷宮既可以建立非條 件反射焦慮動(dòng)物模型,也可以作為測(cè)量動(dòng)物焦慮反響的方法.1 .將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入迷宮中央?yún)^(qū),頭朝開臂,并注意此后每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均放在同一位置.2 .同時(shí)開啟攝像監(jiān)控器記錄5min內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物開臂與閉臂的進(jìn)入次數(shù)及進(jìn)入各臂的時(shí)間.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中實(shí)驗(yàn)者需距離迷宮1米的距離.3 .記錄結(jié)

3、束后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠具內(nèi).同時(shí)清理迷宮,并用5%勺醋酸水溶液或75% 的酒精擦拭迷宮,借以消除動(dòng)物氣味對(duì)后繼實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響.4 .分析：1開臂進(jìn)入次數(shù)百分比=開臂進(jìn)入次數(shù)/開臂進(jìn)入次數(shù)十閉臂進(jìn)入次數(shù)2開臂滯留時(shí)間百分比= 開臂滯留時(shí)間/開臂滯留時(shí)間+閉臂滯留時(shí)間進(jìn)入開放臂時(shí)間百分比與進(jìn)入開放臂次數(shù)百分比反映了動(dòng)物的焦慮狀態(tài)；進(jìn)入開放臂與封閉臂總次數(shù)反映動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)水平晌下探究次數(shù)反映了動(dòng)物在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為,與焦 慮程度有一定相關(guān)性.3、 明暗穿梭實(shí)驗(yàn)：回避實(shí)驗(yàn)就是利用動(dòng)物的好暗避光明暗穿梭而建立起來(lái)的.1 .將小鼠放入明箱,讓小鼠進(jìn)行自由穿梭,觀察5min.2 .每只小鼠測(cè)試結(jié)束后,濕

4、布洗擦場(chǎng)地并用干布擦干.3 、分析：穿梭次數(shù)、潛伏期、明箱活動(dòng)時(shí)間、明箱活動(dòng)時(shí)間百分比、暗想活動(dòng)時(shí)間、暗箱活動(dòng)時(shí)間百分比、總路程、明箱活動(dòng)路程、暗箱活動(dòng)路程.四、洞板實(shí)驗(yàn)一根本原理孔板實(shí)驗(yàn)就是Boissiex與Simon1962年首次建立的,此后被廣泛用于藥效研究.該實(shí)驗(yàn)就是利 用新奇curiosity與恐懼fear兩個(gè)因素來(lái)限制動(dòng)物在新環(huán)境下的行為,用逃避escapes來(lái)反映 這兩個(gè)因素的作用結(jié)果.動(dòng)物反復(fù)鉆頭head dipping反映其新奇感與對(duì)逃避的渴望.一般 認(rèn)為,藥物在不影響動(dòng)物運(yùn)動(dòng)活性的劑量下,增加鉆頭次數(shù)與時(shí)間,表現(xiàn)為抗焦慮作用,減少鉆頭 次數(shù)與時(shí)間那么為致焦慮作用.二操作步驟

5、大鼠與小鼠的實(shí)驗(yàn)裝置有所不同.大鼠裝置為一個(gè)66cm x 56cm x 47cm的木箱,底板有4個(gè)直 徑為3、8cm、深1 cm的等大圓孔,其中兩孔離最近壁14cm,另兩孔17cm,孔板水平抬高12em; 小鼠木箱為44cm x 40cm x 27cm , 4個(gè)孔的孔徑均為3cm,厚1、8cm,每孔中央離最近壁的距 離為10cm.80年代之后,孔板箱壁及每一孔周邊都裝有紅外光電管,并與微機(jī)相聯(lián),這樣可同 時(shí)自動(dòng)記錄動(dòng)物的鉆頭次數(shù)與鉆頭時(shí)間、運(yùn)動(dòng)活性及站立數(shù)等多項(xiàng)指標(biāo),既提升了工作效率,又增加了實(shí)驗(yàn)的可靠性.實(shí)驗(yàn)用雄性成年的大鼠或小鼠.將動(dòng)物置于孔板中央,背朝觀察者.動(dòng)物兩眼消失在洞中為一次鉆頭

6、a head dip,記錄5-10min的鉆頭次數(shù)及鉆頭持續(xù)時(shí)間. 三考前須知與評(píng)價(jià)對(duì)孔板箱的形狀與大小沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),但常采用方型,其邊長(zhǎng)在大鼠一般60cm,小鼠為40c m左右.孔的數(shù)量早期多為16孔,現(xiàn)在通常采用4孔板.動(dòng)物在上午的鉆頭數(shù)往往比下午多.因此,應(yīng)盡量在每天固定的時(shí)間內(nèi)做實(shí)驗(yàn).4本實(shí)驗(yàn)對(duì)致焦慮藥如BDZ受體反相沖動(dòng)劑引起探究性鉆頭的特異性降低結(jié)果較為一致, 而某些缺乏抗焦慮作用的藥物如BDZ受體拮抗劑氟馬西尼反可使探究性鉆頭增加.故在篩 選未知藥物時(shí)應(yīng)結(jié)合其它焦慮模型進(jìn)行評(píng)價(jià).五、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)Forced Swimming Test, FST僚統(tǒng)主要用于抗抑郁、鎮(zhèn)靜以及止痛類

7、藥物的 研究.該系統(tǒng)適用于大鼠、小鼠或其她實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物,通過(guò)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于一個(gè)局限的環(huán)境中如 水中,動(dòng)物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無(wú)法逃脫,從而提供了一個(gè)無(wú)可回避的壓迫環(huán)境,一段時(shí)間的實(shí)驗(yàn)后,動(dòng)物即表現(xiàn)出典型的不動(dòng)狀態(tài)反映了一種被稱之為行為絕望狀態(tài)記錄 處于該環(huán)境的動(dòng)物產(chǎn)生絕望的不動(dòng)狀態(tài)過(guò)程中的一系列參數(shù).該系統(tǒng)使用攝像頭對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程 錄像并用相應(yīng)軟件對(duì)圖像進(jìn)行跟蹤分析,減少人為操作,數(shù)據(jù)客觀.強(qiáng)迫游泳的抑郁癥動(dòng)物模型, 就是研究人類抑郁癥藥理學(xué)及其發(fā)病機(jī)理、篩選觀察抗抑郁藥物研究中可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?其主要的特點(diǎn)就是藥物作用的高度特異性,該實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚝芎玫膶⒖挂钟羲幬锱c強(qiáng)安定與抗焦慮藥 加以區(qū)別,而

8、且大多數(shù)抗抑郁藥所產(chǎn)生的效應(yīng)與臨床效價(jià)顯著相關(guān),這已為廣闊學(xué)者所接受.焦慮抑郁行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法1977年,P o r s o l t R D首次應(yīng)用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗抑郁藥物的作用.后來(lái)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 就成為評(píng)價(jià)藥物抗抑郁作用的動(dòng)物模型.該實(shí)驗(yàn)方法就是一種行為絕望實(shí)驗(yàn)法,其根本原理就是當(dāng)大鼠或小鼠放進(jìn)一個(gè)有限的空間使之游泳,開始時(shí)拼命游泳力圖逃脫 很快就變成漂浮不 動(dòng)狀態(tài),僅露出鼻孔保持呼吸,四肢偶爾劃動(dòng)以保持身體不至于沉下去,實(shí)際就是動(dòng)物放棄逃 脫的希望,屬于行為絕望.經(jīng)典的強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)分兩天進(jìn)行.第一天讓大鼠或小鼠在2 5 C的深水中強(qiáng)迫游泳 15 m i n ,取出后在犯C溫室烘干,歸籠.第

9、二天,在同樣的條件下進(jìn)行強(qiáng)迫游泳 5 m i n ,記 錄不動(dòng)時(shí)間.M i r u a H等將強(qiáng)迫游泳的時(shí)間改為1 0 3 0 m i n i ' 1 .張中啟 等在實(shí)驗(yàn)第2天直接觀察小鼠強(qiáng)迫游泳6 m i n內(nèi)后4 m i n的不動(dòng)時(shí)間圖.這些都就是對(duì)經(jīng) 典實(shí)驗(yàn)方法所做的修改.大鼠或小鼠的不動(dòng)時(shí)間就是判斷抗抑郁藥物作用的指標(biāo).不動(dòng)時(shí)間 越短,抗抑郁作用越強(qiáng).D e t k e等將強(qiáng)迫游泳中的行為分成4類：游泳動(dòng)物在水中四處游動(dòng)、攀爬動(dòng)物前爪劃 動(dòng)水面,碰觸缸壁、潛水動(dòng)物整個(gè)身體沉于水下與不動(dòng)動(dòng)物四肢不動(dòng)漂浮于水面,僅 頭部露出水面呼吸.經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)不同機(jī)制的抗抑郁藥影響不同的行

10、為,如地昔帕明與馬普替 林N E再攝取才制劑可選擇性增加大鼠的攀爬行為,而氟西汀5 - H T再攝取抑制劑選 擇性增加大鼠的游泳行為川.六、懸尾實(shí)驗(yàn)Tail suspension test, TSTft是一種經(jīng)典而又能快速評(píng)價(jià)抗抑郁藥物、興奮藥物、 鎮(zhèn)靜藥物藥效的方法.其原理就是利用小鼠懸尾后企圖逃脫但又無(wú)法逃脫,從而放棄掙扎,進(jìn)入 特有的抑郁不動(dòng)狀態(tài),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄動(dòng)物不動(dòng)時(shí)間來(lái)反映抑郁狀態(tài),抗抑郁藥物、興奮藥物能 明顯地縮短改變其狀態(tài).末次給藥1 h后,將小鼠尾部距末端約1 cm處用夾子固定,使其倒吊 于距地面15 cm左右的橫桿上,動(dòng)物為克服不正常體位而掙扎活動(dòng),但活動(dòng)一段時(shí)間后,出現(xiàn)問(wèn) 斷性不動(dòng),顯示失望狀態(tài),累計(jì)各組8 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間七、新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn)Novelty suppressed feeding test, NSF:使用邊長(zhǎng)50cm、高40cm箱底鋪勻2cm高木削的 試驗(yàn)箱,箱底中央放置糖丸或小塊食