博士生科研計(jì)劃書模板_第1頁(yè)
博士生科研計(jì)劃書模板_第2頁(yè)
博士生科研計(jì)劃書模板_第3頁(yè)
已閱讀5頁(yè),還剩3頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、博士研究生科研計(jì)劃書()姓 名:報(bào)考專業(yè):計(jì)劃書題目:細(xì)胞角蛋白CK20對(duì)胃癌微轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值及臨床意義2013年2月、立題依據(jù)重點(diǎn)介紹本項(xiàng)目的科學(xué)意義、國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀,并附主要參考文獻(xiàn)胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,居消化道腫瘤發(fā)病率之首,多見于男性,男女發(fā)病率之比為2:1,死亡率居惡性腫瘤首位,平均死亡年齡為61.6歲。臨床上診斷的多為進(jìn)展期胃癌患者,即使經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的根治性手術(shù)治療,其 5年生存率仍在40%左右,其中最重要的原因是胃癌患者術(shù)后了腹膜轉(zhuǎn)移。 近年來在臨床開展的術(shù)前輔助化療,也即新輔助化療(n eoadjuva ntchemotherapy, NACT)是指在惡性腫瘤局部治療、手術(shù)或放療前

2、給予的全身或局部化療,也稱術(shù)前化療(preoperative chemotherapy) 。新輔助化療是對(duì)腫瘤外科醫(yī)生及內(nèi)科醫(yī)生觀念上的一個(gè)挑戰(zhàn),其理論依據(jù)是:手術(shù)切除原發(fā)腫瘤可能會(huì)刺激剩余腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng);腫瘤周圍組織在術(shù)后血供改變影響化療藥物濃度及放療效果;新輔助化療、放療的組織病理學(xué)反應(yīng)與預(yù)后呈正相關(guān):可以達(dá)到預(yù)期的目的以提高手術(shù)切除率,減少術(shù)中播散可能性,降低腫瘤細(xì)胞活性;消除潛在的微轉(zhuǎn)移灶,降低術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的可能;術(shù)前通過可測(cè)量病灶及術(shù)后標(biāo)本準(zhǔn)確判定臨 床緩解率和病理學(xué)有效率;新輔助治療可剔除不宜手術(shù)治療的患者。新輔助化療使進(jìn)展期胃癌治療的效 果得到顯著改善,Wilke等1和Plukk

3、er 2的II期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NACT能夠使原剖腹探查無法切除的胃癌獲得30%-50%勺再切除率,這些再切除患者的中位生存期為24個(gè)月,遠(yuǎn)高于原無法切除患者小于6個(gè)月的生存期。胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)占所有胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的半數(shù)以上,而腹膜轉(zhuǎn)移者的5年生存率低于20%臨床所遇腹膜轉(zhuǎn)移患者多數(shù)在已出現(xiàn)腹水、盆腔腫塊或腸梗阻時(shí)才得以確診,已失去治 療最好時(shí)機(jī),故胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療具有重要意義。腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素是腹腔內(nèi)脫落的 癌細(xì)胞和腹膜微轉(zhuǎn)移灶的存在。微轉(zhuǎn)移是指在手術(shù)治療時(shí)已經(jīng)存在的各種機(jī)體組織、及細(xì)胞移植物中 的腫瘤殘留,是用常規(guī)形態(tài)學(xué)診斷技術(shù)不能檢測(cè)出的、隱匿在原發(fā)灶以外的轉(zhuǎn)移。胃癌腹膜微

4、轉(zhuǎn)移指 術(shù)前或術(shù)中常規(guī)檢查難以發(fā)現(xiàn)的,單個(gè)癌細(xì)胞或一小簇癌細(xì)胞構(gòu)成的種植于腹膜的微小轉(zhuǎn)移。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移發(fā)生的途徑和步驟可能為:1.原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞穿透漿膜,脫落到腹腔內(nèi),形成高度生物活性的游離腫瘤細(xì)胞。2.在一些因子的介導(dǎo)下粘附在腹膜上。3.在基質(zhì)消化酶和相關(guān)因子的作用下,腫瘤細(xì)胞向腹膜組織浸潤(rùn)。4.腫瘤細(xì)胞不斷增值,形成種植結(jié)節(jié)3。前3個(gè)階段為微轉(zhuǎn)移階段,肉眼不可見,亦無法用影像學(xué)方法或常規(guī)HE染色診斷,須通過免疫組織化學(xué)或PCR等方法檢測(cè)腫瘤特異性標(biāo)志物。第 4階段已經(jīng)形成肉眼或影像學(xué)檢查可見的轉(zhuǎn)移。近年來,組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù) 的迅速發(fā)展使得微轉(zhuǎn)移領(lǐng)域也有了較快的發(fā)展;隨著免疫組化和

5、(RT-PCR)方法的應(yīng)用越來越趨向于成熟化和規(guī)范化,微轉(zhuǎn)移檢測(cè)領(lǐng)域日益受到重視,腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)可望成為腫瘤患者的常規(guī)檢查。目前對(duì)于胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移診斷的研究多集中在對(duì)腹腔內(nèi)脫落癌細(xì)胞(ECC)的研究,其中最簡(jiǎn)便、常用的是腹腔灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查印,但是PLC的陽性率低。隨著免疫細(xì)胞化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(reverse tran scriptio n-polymerase chain reacti on, RT-PCR)方法的發(fā)展和應(yīng)用,ECC 的檢出率大大提高。但腹腔內(nèi)脫落的癌細(xì)胞必須粘附于腹膜、著床并增殖方可形成微轉(zhuǎn)移灶和轉(zhuǎn)移灶。所以腹膜 組織內(nèi)種植癌細(xì)胞的檢測(cè),可以更直觀地證實(shí)胃癌腹膜

6、微轉(zhuǎn)移的存在。目前對(duì)于胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的研究已經(jīng)越來越多,但大多數(shù)都是針對(duì)腹腔沖洗液、腹腔脫落細(xì) 胞進(jìn)行研究;術(shù)中取腹膜組織進(jìn)行檢測(cè)的,較少報(bào)道,而像本試驗(yàn)一樣,術(shù)中多處取材,取橫結(jié)腸系膜 前葉、網(wǎng)膜囊后壁近胰腺上緣處、胰腺被膜、盆底腹膜組織,檢測(cè)胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移者,尚無報(bào)道。本 試驗(yàn)證實(shí)免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞角蛋白CK20能夠檢測(cè)胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移,并為胃癌根治術(shù)術(shù)式的胃癌細(xì)胞比較容易通過脫落種植,淋巴轉(zhuǎn)移等途徑擴(kuò)散到胃周系膜組織內(nèi)。如果能在在胃癌根治術(shù)中對(duì)多處腹膜組織進(jìn)行活檢,行免疫組化染色,檢測(cè)CK20,并與常規(guī)HE染色及PLC檢查結(jié)果相比較。結(jié)果表明,雖然常規(guī)HE染色檢查并不能發(fā)現(xiàn),實(shí)際上橫結(jié)腸系

7、膜前葉、胰腺被膜和胰腺上方的網(wǎng)膜囊后壁等 處組織內(nèi)確實(shí)已存在微轉(zhuǎn)移灶,以保障手術(shù)的徹底性腹腔化療是一操作簡(jiǎn)單而行之有效的治療方法,能改善經(jīng)靜脈化療無法完成的腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞陽性和鏡下腹膜轉(zhuǎn)移患者的抗腫瘤果,可治療進(jìn)展期 胃癌術(shù)后腹腔殘存微小癌灶,并防止腹腔復(fù)發(fā)。可以通過術(shù)中腹腔內(nèi)置化療藥物緩釋劑或術(shù)后通過留 置導(dǎo)管腹腔內(nèi)給藥。腹腔化療目前尚無統(tǒng)一的用藥標(biāo)準(zhǔn),正逐步由單一用藥向聯(lián)合用藥發(fā)展。腹腔化 療一般很少發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥,與靜脈化療相比,其全身并發(fā)癥及副作用的發(fā)生率較低,但局部并發(fā)癥 的發(fā)生率較高,應(yīng)注意預(yù)防(刑會(huì)軍)及早診斷胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移,對(duì)于胃癌復(fù)發(fā)和預(yù)后的判斷及指導(dǎo)臨床治療有著極其重要的

8、意義。臨床所見的胃癌多為進(jìn)展期胃癌,約50%勺患者術(shù)后可發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移 4。發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的患者對(duì)靜脈輔助化療、放療等治療手段均不敏感,生存率較低。故及早現(xiàn)腹膜微轉(zhuǎn)移,早期治療,預(yù)防和阻 斷腹膜轉(zhuǎn)移的發(fā)生顯得尤為重要,而對(duì)于已發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的患者,可通過減瘤手術(shù)配合腹腔化療,以 期延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。1 Wilke H, Preusser P, Fi nk U, et al. Preoperative chemotherapy in locally adva need andnon resectable gastric can cer:a phase II study with etoposide,

9、 doxorubici n, and cisplatin J . J Clin Oncol,1989,7:1318-1326.2 Plukker JT, Mulder NH, Sleijfer DT, et al, Chemotherapy and surgery for locally advaneed cancer of the cardia and fun dus: phase II studywith methotrexate and 5-fluorouracill J .Br J Surg, 1991,78: 955-958.3 吳晴,程海霞,李兆申.疾病分冊(cè).2005, 25 (3

10、):胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的基因研究進(jìn)展J.國(guó)外醫(yī)學(xué).消化139-143.4 TanakKumagai K,Shimizu K,et al. Peritonealmetastasis in gastric cancer with particularreference to lymphatic adva nceme nt ;extra no dal in vasi on is agni fica nt risk factor forperit on eal Surg On co1,2000,75:165-171.、研究?jī)?nèi)容研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、創(chuàng)新之處和擬解決的關(guān)鍵問題本研究在胃癌根治術(shù)中對(duì)多處腹膜組織

11、進(jìn)行活檢,行免疫組化染色,檢測(cè)CK20,并與常規(guī)HE染色及PLC檢查結(jié)果相比較。雖然常規(guī)HE染色檢查并不能發(fā)現(xiàn),胰腺被膜、橫結(jié)腸系膜前葉、和胰腺上方的網(wǎng)膜囊后壁等處組織內(nèi)確實(shí)已存在微轉(zhuǎn)移灶,并且微轉(zhuǎn)移發(fā)生概率與腫瘤大小、侵透漿膜等因素相 關(guān)。因此對(duì)于進(jìn)展期胃癌,尤其是腫瘤較大、侵透漿膜者,應(yīng)該剝離橫結(jié)腸系膜前葉、胰腺被膜的網(wǎng) 膜囊后壁,爭(zhēng)取做到網(wǎng)膜囊完整切除,以保證手術(shù)的根治性。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移發(fā)生的途徑和步驟可能為:1.原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞穿透漿膜,脫落到腹腔內(nèi),形成高度生物活性的游離腫瘤細(xì)胞。2.在一些相關(guān)因子的介導(dǎo)下粘附在腹膜上。3.在基質(zhì)消化酶和相關(guān)因子的作用下,腫瘤細(xì)胞向腹膜組織浸潤(rùn)。4.腫

12、瘤細(xì)胞不斷增值,形成種植結(jié)節(jié)。第 4階段已經(jīng)形成肉眼或影像學(xué)檢查可見的轉(zhuǎn)移,并可由常規(guī)病理檢查確定。前3個(gè)階段為微轉(zhuǎn)移階段,肉眼不可見,亦無法用影像學(xué)方法或常規(guī) HE染色診斷,必須通過免疫組織化學(xué)或PCR等方法檢測(cè)腫瘤特異性標(biāo)志物。近年來,組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展使得微轉(zhuǎn)移領(lǐng)域也有了較快的發(fā)展;隨著免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法的應(yīng)用越來越趨向于成熟化和規(guī)范化,微轉(zhuǎn)移檢測(cè)領(lǐng)域日益受到重視, 腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)可望成為腫瘤患者的常規(guī)檢查。雖然取腹腔沖洗液檢查具有操作簡(jiǎn)便、花費(fèi)較少等優(yōu)點(diǎn),但無論是細(xì)胞學(xué)檢查、化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免 疫法或RT-PCR技術(shù),僅僅只是確定游離癌細(xì)胞

13、的存在,這些檢測(cè)方法通胃癌術(shù)中取腹膜組織檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的研究國(guó)內(nèi)外較少報(bào)道,是近年來比較新的研究領(lǐng)域。術(shù)中取材部位有直腸膀膚陷凹(直腸子宮陷凹)、橫結(jié)腸系膜、大網(wǎng)膜等,檢測(cè)方法主要有免疫組織化學(xué)方法和RT-PCR取腹膜組織檢測(cè)胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移,其陽性率一般低于取腹腔灌洗液用同種方法檢測(cè)的結(jié)果。這是因?yàn)楦鼓と〔木哂幸欢ǖ木?限性,但不能確診腹膜微轉(zhuǎn)移游離的腫瘤細(xì)胞必須經(jīng)過粘附、降解腹膜細(xì)胞外基質(zhì)、著床于腹膜間皮 組織并增殖才能形成腹膜微轉(zhuǎn)移另外脫落的腫瘤細(xì)胞必須經(jīng)過粘附、浸潤(rùn)、增值等階段才能形成腹膜微轉(zhuǎn)移。因此,取腹膜組織檢測(cè)可以直觀地證實(shí)腹膜微轉(zhuǎn)移灶的存在。過確定游離癌細(xì)胞的存在, 對(duì)腹膜轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)

14、有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值本研究于胃癌根治術(shù)中自橫結(jié)腸系膜前葉、網(wǎng)膜囊后壁近胰腺上緣處、盆底腹膜處取活,用免疫 組化方法檢測(cè)細(xì)胞角蛋白CK20,研究胃癌患者腹膜微轉(zhuǎn)移的情況,胃癌根治手術(shù)經(jīng)過一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展已經(jīng)相當(dāng)成熟,近年來在進(jìn)展期胃癌根治術(shù)中,剝離橫結(jié)腸系膜前葉和胰腺被膜己逐漸成為常規(guī), 并有學(xué)者提出了胃全系膜切除和胃癌根治術(shù)中網(wǎng)膜囊完整切除的概念,以求達(dá)到根治。胃全系膜切除 術(shù)是指完整切除胃腹側(cè)、背側(cè)系膜內(nèi)所有的組織結(jié)構(gòu),包括胃及其血管和淋巴脂肪組織。網(wǎng)膜囊完整 切除是指將網(wǎng)膜囊的后壁與前壁及胃(包括周圍淋巴脂肪組織)。但胃周系膜內(nèi)是否存胃癌微轉(zhuǎn)移灶分析腹膜微轉(zhuǎn)移與胃癌大小、侵透膜與否、腫瘤分期、

15、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床因素的關(guān)系,探討胃癌腹膜微 轉(zhuǎn)發(fā)生的因素和微轉(zhuǎn)移的規(guī)律,為手術(shù)方式選擇、判斷預(yù)后及建立個(gè)體化的術(shù)后治療方案提供更可靠 的依據(jù)。鑒于胃癌行淋巴結(jié)清掃一直缺乏較為可靠的理論依據(jù),且剝離操作易進(jìn)入錯(cuò)誤分離層面,造成出 血、系膜剝離不全、術(shù)后淋巴漏、胰漏等,故對(duì)于進(jìn)展期胃癌是否應(yīng)該行此術(shù)式值得探討。胃周圍系 膜表面上無關(guān)聯(lián),但在胚胎解剖學(xué)上具有高度的組織同源性。在胚胎時(shí)期,胃腹側(cè)系膜在前腸旋轉(zhuǎn)中 形成小網(wǎng)膜,胃背側(cè)系膜的前后兩層則廣泛覆蓋胃、脾、胰腺,衍化成為大網(wǎng)膜、胃脾韌帶、胰腺被 膜等。在胚胎時(shí)期前腸旋轉(zhuǎn)中,胃周圍系膜與系膜、系膜與臟器和后腹壁相互靠近并貼在一起發(fā)生融 合,形成潛在

16、的,分布廣泛的,充滿淋巴組織和疏松結(jié)締組織的間隙|,容許惡性病變沿其擴(kuò)散、蔓延。胃癌細(xì)胞比較容易通過脫落種植,淋巴轉(zhuǎn)移等途徑擴(kuò)散到胃周系膜組織內(nèi)。如果能在在胃癌根治術(shù)中對(duì)多處腹膜組織進(jìn)行活檢,行免疫組化染色,檢測(cè)CK20,并與常規(guī)HE染色及PLC僉查結(jié)果相比較。結(jié)果表明,雖然常規(guī) HE染色檢查并不能發(fā)現(xiàn),實(shí)際上橫結(jié)腸系膜前葉、胰腺被膜和胰腺上方的 網(wǎng)膜囊后壁等處組織內(nèi)確實(shí)已存在微轉(zhuǎn)移灶,并且微轉(zhuǎn)移發(fā)生概率與腫瘤大小、侵透漿膜等因素相關(guān)。 因此對(duì)于進(jìn)展期胃癌,尤其是腫瘤較大、侵透漿膜者,應(yīng)該剝離橫結(jié)腸系膜前葉、胰腺被膜和胰腺上 方的網(wǎng)膜囊后壁,爭(zhēng)取做到網(wǎng)膜囊完整切除,以保證手術(shù)的根治性。另外淋巴

17、轉(zhuǎn)移途徑在腹膜微轉(zhuǎn)移 中占有一定的地位,胃癌根治術(shù)中必須嚴(yán)格行D2淋巴結(jié)清掃。三、擬采取的研究方法、技術(shù)路線選取術(shù)前影像學(xué)檢查及手術(shù)中探查未發(fā)現(xiàn)周圍臟器侵犯(如:肝臟、胰腺、橫結(jié)腸及其系膜等)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者胃癌腫瘤標(biāo)本?;颊咝g(shù)中為減少腹腔游離癌細(xì)胞和脫落種植轉(zhuǎn)移,均實(shí)行腹腔高溫灌 洗,術(shù)后進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢查以及脫落細(xì)胞學(xué)和腹腔灌洗液檢查,腹腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查采用轉(zhuǎn)速控 制在1600轉(zhuǎn)/分的低速離心機(jī),上清液去除,沉渣圖片行瑞氏染色,鏡下觀察。檢測(cè)到癌細(xì)胞即為陽 性。并去腹膜組織做 HE染色,標(biāo)本來自橫結(jié)腸系膜、男性直腸膀胱陷凹(女性為直腸子宮陷凹)以及 網(wǎng)膜囊后壁,采用免疫組化的方法(免疫組

18、化染色采用鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化酶連接(sP)法)檢查CK20,與腹腔灌洗液體細(xì)胞學(xué)檢查做對(duì)比。CK20陽性者,視為轉(zhuǎn)移,所取不同部位的腹膜組織有一處陽性者即認(rèn)為發(fā)生了腹膜微轉(zhuǎn)移。CK20存在于上皮來源的腫瘤之中,表達(dá)于細(xì)胞漿,以胞漿染為淡黃色到深棕黃色,染色強(qiáng)度明顯高于背景者為陽性。凡無黃色染色且顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者 為陰性(圖5)。本試驗(yàn)中若HE染色陰性,而CK20陽性者,即視為該處腹膜組織發(fā)生了微轉(zhuǎn)移。同一病 人所取的橫結(jié)腸系膜前葉、網(wǎng)膜囊后壁近胰腺上緣處、直腸膀膚陷凹(直腸子宮陷凹)腹膜組織中有一處或一處以上發(fā)生微轉(zhuǎn)移者,視為發(fā)生了腹膜微轉(zhuǎn)移。比較免疫組化Ck20腹膜微轉(zhuǎn)移的陽性率與腹腔灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率。應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。是否發(fā)生腹膜微轉(zhuǎn)移與腫瘤侵漿膜與否,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料的分析采用卡方檢驗(yàn)。四、考核指標(biāo)預(yù)期成果隨著免疫組織學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)手段也越來越可靠,這將為臨床工作中判斷預(yù)后、選擇術(shù)式、確定淋巴結(jié)清掃范圍、術(shù)后確立分期及建立個(gè)體化的化療方案提供更可靠的依據(jù),在胃癌的診治中發(fā)揮更加重要的作用。由于大量文獻(xiàn)中所表

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論