顧振綸—金蟬花孢子粉及野生金蟬花粗多糖—抗腫瘤作用初步報告

1、金蟬花孢子粉及野生金蟬花粗多糖金蟬花孢子粉及野生金蟬花粗多糖抗腫瘤作用初步報告抗腫瘤作用初步報告Applied report of Cordyceps cicadae and polysaccharide of wild cordycepssobolifera on Anti-tumors2011年3月18日 香港一、前 言Introduction 蟬花Cordyceps cicadae屬蟲生性藥用真菌，生于蟬蛹體上，是蟬在羽化前，接近地面約34cm處，被蟬擬青霉等麥角菌科( Claviceptaceae)真菌寄生的產(chǎn)物。 其藥用始載于南北朝劉宋時代的雷公炮炙論。唐慎微所著經(jīng)史證類備急本草言

2、“蟬花味甘寒，無毒，主小兒天吊，驚癇，夜啼，心悸”。本草綱目中亦記載：“蟬花可治療驚癇，夜啼心悸，功同蟬蛻”。 醫(yī)家認為蟬花是:一種與冬蟲夏草相近的珍貴藥材。1. 蟬花的分類 大蟬草 大蟬草又名金蟬花，其子座一般單生、2個或多個，不分枝，棒狀，褐色；寄生的蟬若蟲較大。 小蟬花 麥角菌科蟲草屬真菌小蟬草寄生于蟬科慈姑（Platylenre Kaempferi Fabr）幼蟲的體內(nèi)所抽出的子座及寄生幼蟲尸體的干燥復合體。 蟬生蟲草 其子座聚生至近叢生，從成蟲寄主的整個腹部長出，子囊殼斜埋在子座內(nèi)。 蟬擬青霉 蟬擬青霉又名雌蟬花，屬半知菌類或有絲分裂孢子真菌，其孢梗束自蟲體頭部叢聚成束長出，淺黃色，

3、長 1.56.0cm，前端膨大，呈紡錘形。2. 蟬花的藥理作用 免疫調(diào)節(jié)作用 調(diào)節(jié)脂類代謝 滋補強壯，提升機體的營養(yǎng)狀況 抗疲勞，抗應激 解熱鎮(zhèn)痛催眠作用 降血糖作用 抗腫瘤作用 日本學者Ukai等從蟬花中分離出一種水溶性多糖即半乳甘露糖，它由D-甘露糖和 D-半乳糖構成，二者比例4：3。當劑量為20mg/kg時，對小鼠S180肉瘤的抑制率為47。 蟬花粗提物能選擇性殺傷 G2/M期細胞，顯著抑制肺癌細胞株 PAA細胞生長。 一定濃度的蟬擬青霉多糖能使人外周血單個核細胞的增殖率升高，較高濃度多糖能抑制白血病細胞株U937、 K562的增殖，同時蟬擬青霉多糖能提高外周血單個核細胞表達 nTNF-

4、、nIFN-。Materials and Methods二、材料與方法 1. 藥品 人工培養(yǎng)金蟬花孢子粉（孢子粉），批號：101201 野生金蟬花粗多糖（粗多糖），批號：110128 均由上海泛亞生命科學研究院提供 人工培養(yǎng)金蟬花孢子粉醇提物由蘇州中藥研究所植化室制備。 人工培養(yǎng)金蟬花孢子粉醇提物、野生金蟬花粗多糖 均用DMSO溶解后配成100mg/ml（DMSO含量5），4保存。 2. 實驗用腫瘤細胞（由中國科學院上海細胞庫供應）編號編號來源來源細胞株細胞株1 1人乳腺癌人乳腺癌MCF-72 2人宮頸癌（鱗癌）人宮頸癌（鱗癌）Hela3 3人宮頸癌（腺癌）人宮頸癌（腺癌）Siha4 4人膠質(zhì)

5、瘤人膠質(zhì)瘤LN2295 5人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤SHG446 6人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U2517 7人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U87MG8 8人肝癌人肝癌HepG29 9人胰腺癌人胰腺癌SW19901010人白血病人白血病K562編號編號來源來源細胞株細胞株1111人白血病人白血病PBL9851212人回盲腸癌人回盲腸癌Ccl-2441313人橫紋肌肉瘤人橫紋肌肉瘤RD1414人肺腺癌人肺腺癌A5491515人卵巢癌人卵巢癌Hey1B1616人卵巢癌人卵巢癌HO-8910PM1717人黑色素瘤人黑色素瘤A3751818人黑色素瘤人黑色素瘤C81611919人膠質(zhì)母細胞瘤人膠質(zhì)母細胞瘤A1722020人胃癌人胃癌HG

6、C27 3. 主要試劑： DMEM（高糖）、MEM及1640培養(yǎng)基，批號：1361834，Hyclone 產(chǎn)品。 胎牛血清（FBS），Hyclone 產(chǎn)品。 四氮唑藍 (MTT)、胰酶、二甲基亞砜（DMSO）、RNA酶（Rnase）、 碘化丙錠(Propidium Iodide，PI)，均為Sigma產(chǎn)品。 戊二醛、鋨酸等制作電鏡樣本所需試劑，由蘇州大學電鏡室提供。 Annexin V/PI 雙染試劑盒：Biouniquer Technology Co. LTD Wright-giemsa染色試劑盒：蘇州金萊生物科技有限公司。 4. 主要儀器設備 CO2 培養(yǎng)箱，Napco 5410 型，Na

7、pco 公司，美國。 醫(yī)用凈化工作臺，YJ-1450 B 型，吳江市設備凈化總廠。 倒置顯微鏡，CKX41，OLYMPUS 公司，日本。 酶聯(lián)免疫檢測儀，DG5032 型，南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限公司。 流式細胞儀，EPICS XL 型，Beckman-Coulter 公司，美國。 熒光顯微鏡，IX71 型，OLYMPUS 公司，日本。 高速低溫離心機，5417R 型，Effendorf 公司，德國。 透射電子顯微鏡，H-600 型，Hitachi 公司，日本。 掃描電子顯微鏡，S-4700型，日立公司，日本。 三、實 驗 結 果Results（一）四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測結果F

8、ig. 1-1A. The inhibited rates of Cordyceps cicadae were detected by MTT assay （n=6）表表1-1A 金蟬花孢子粉對金蟬花孢子粉對9株腫瘤細胞生長抑制率的影響株腫瘤細胞生長抑制率的影響 （n=6）編號編號細胞細胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1 1人胃癌細胞人胃癌細胞HGC27 0 -2.55 0 -2.5512.4412.4422.822.8* * *37.9537.95* * *71.8471.84* * *2 2人宮頸癌人宮頸癌Hela

9、 0 0 26.2526.25* * *42.142.1* * *44.6844.68* * *44.2944.29* * *61.7861.78* * *3 3人宮頸癌人宮頸癌Siha 0 -8.85 0 -8.8515.4415.44* * *32.4432.44* * *26.426.4* * *35.0735.07* * *4 4人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤LN229 0 0 35.835.8* * *36.2336.23* * *44.0944.09* * *47.447.4* * *50.5250.52* * *5 5人胰腺癌人胰腺癌SW1990 0 0 2.872.87* * *66.296

10、6.29* * *63.7763.77* * *60.1860.18* * *77.0577.05* * *6 6人白血病細胞人白血病細胞K562 0 35.35 0 35.3540.7740.7741.5241.52* * *49.949.9* * *58.7358.73* *7 7人白血病細胞人白血病細胞PBL985 0 17.24 0 17.2418.8918.8920.3920.3940.9340.93* * *56.0756.07* * *8 8人回盲腸癌細胞人回盲腸癌細胞Ccl-244 0 -8.28 0 -8.28-11.89-11.8932.4532.45* *20.5420.

11、5427.9527.95* *9 9人橫紋肌肉細胞瘤人橫紋肌肉細胞瘤RD 0 -3.66 0 -3.668.948.945.495.4922.2222.22* * *69.1469.14* * *P0.05, *P0.01 vs control group編號編號細胞細胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1010人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤SHG44 0 -0.24 0 -0.240.490.4915.8115.812.342.3433.133.11111人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U251 0 0.95 0 0.95-0.18-0.1822.6

12、622.66-13.84-13.8416.3916.391212人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U87MG 0 -0.49 0 -0.49-2.43-2.4312.4112.416.246.2419.8219.821313人肝癌人肝癌HepG2 0 -0.45 0 -0.45-1.31-1.31-0.84-0.84-0.45-0.450.2470.2471414人肺腺癌人肺腺癌A549 0 -8.19 0 -8.19-20.01-20.01-14.2-14.23.363.3639.3639.361515人卵巢癌細胞人卵巢癌細胞Hey1B 0 -1.51 0 -1.51-10.75-10.75-2.21-2.2

13、1-13.91-13.91-4.73-4.731616人卵巢癌細胞人卵巢癌細胞HO8910PM 0 -0.26 0 -0.262.352.352.012.0113.4313.4319.3819.381717人黑色素瘤細胞人黑色素瘤細胞A375 0 4.61 0 4.61-15.7-15.72.822.8214.0814.0839.3739.371818人黑色素瘤細胞人黑色素瘤細胞C8161 0 7.28 0 7.28-0.09-0.0930.6530.651.941.9435.1835.181919人膠質(zhì)母細胞瘤人膠質(zhì)母細胞瘤A172 0 -10.1 0 -10.1-2.81-2.8116.8

14、116.8110.0810.0829.2129.212020人乳腺癌人乳腺癌MCF-7 0 -1.86 0 -1.86-1.89-1.89-1.17-1.17-0.17-0.171.521.52*P0.05, *P0.01 vs control group表表1-1B 金蟬花孢子粉對金蟬花孢子粉對11株腫瘤細胞生長抑制率的影響株腫瘤細胞生長抑制率的影響（n=6）表表1-2A 野生金蟬花粗多糖對野生金蟬花粗多糖對9株腫瘤細胞生長抑制率的影響株腫瘤細胞生長抑制率的影響 （n=6） Tab. 1-2A. The inhibited rates of Cordyceps cicadae polysac

15、charide were detected by MTT assay. （n=6）*P0.05, *P0.01 vs control group編號編號細胞細胞 抑制率抑制率(%)Control50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1 1人胃癌細胞人胃癌細胞HGC27HGC270 010.4910.4910.6110.6124.6624.66* * *46.2846.28* * *80.7480.74* * *2 2人宮頸癌人宮頸癌Hela0 044.8944.89* * *61.0861.08* * *61.2661.26* * *57.5357.53* * *5

16、8.9558.95* * *3 3人宮頸癌人宮頸癌Siha0 020.6920.69* * *29.7629.76* * *35.7135.71* * *31.9131.91* * *39.6539.65* * *4 4人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤LN2290 041.4341.43* * *38.5738.57* * *37.2837.28* * *40.0540.05* * *47.2647.26* * *5 5人胰腺癌人胰腺癌SW19900 037.5437.54* * *50.7250.72* * *50.9550.95* * *55.5155.51* * *87.2487.24* * *6 6人

17、白血病細胞人白血病細胞K5620 011.2111.2117.0117.0117.7217.7221.7621.7633.3533.357 7人白血病細胞人白血病細胞PBL9850 030.5830.5816.7916.7953.3753.37* * *54.1254.12* * *55.4755.47* * *8 8人回盲腸癌細胞人回盲腸癌細胞Ccl-2440 017.0117.01-13.36-13.3650.1350.13* * *34.9434.94* *33.9733.97* *9 9人橫紋肌肉細胞瘤人橫紋肌肉細胞瘤RD0 0-5.13-5.13-1.30-1.304.404.403

18、0.5430.54* * *54.0054.00* * *編號編號細胞細胞抑制率抑制率(%)(%)Control 50g/ml100g/ml250g/ml500g/ml1mg/ml1010人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤SHG44 0 -2.58 0 -2.581.861.8623.5223.522.942.9410.3310.331111人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U251 0 -13.3 0 -13.3-2.46-2.4627.7627.76-24.45-24.458.468.461212人膠質(zhì)瘤人膠質(zhì)瘤U87MG 0 -7.98 0 -7.98-10.72-10.726.336.3323.523.518.2618.

19、261313人肝癌人肝癌HepG2 0 -0.77 0 -0.77-0.58-0.583.023.0218.6718.6729.8629.861414人肺腺癌人肺腺癌A549 0 -20.79 0 -20.79-24.37-24.37-37.52-37.52-32.76-32.764.954.951515人卵巢癌細胞人卵巢癌細胞Hey1B 0 -4.91 0 -4.91-0.82-0.826.096.09-7.57-7.571.481.481616人卵巢癌細胞人卵巢癌細胞HO-8910PM 0 22.49 0 22.49-3.11-3.113.083.082.392.3920.9420.941

20、717人黑色素瘤細胞人黑色素瘤細胞A375 0 5.49 0 5.49-9.49-9.497.577.578.888.8853.6153.611818人黑色素瘤細胞人黑色素瘤細胞C8161 0 -0.54 0 -0.541.921.9233.8833.881.071.0721.6821.681919人膠質(zhì)母細胞瘤人膠質(zhì)母細胞瘤A172 0 -0.38 0 -0.381.261.2621.121.11.011.0131.4831.482020人乳腺癌人乳腺癌MCF-7 0 -1.43 0 -1.43-1.14-1.14-1.11-1.11-0.58-0.580.020.02*P0.05, *P0

21、.01 vs control group表表1-2B 野生金蟬花粗多糖對野生金蟬花粗多糖對11株腫瘤細胞生長抑制率的影響株腫瘤細胞生長抑制率的影響（n=6）（二） 瑞氏吉姆薩（Wright-giemsa）染色結果Fig. 2-1 Effect of on SW1990 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.圖圖2-1 金蟬花對人胰腺癌金蟬

22、花對人胰腺癌SW1990細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉；：孢子粉；H-L：粗多糖：粗多糖組；組；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） IA controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖圖圖2-2 金蟬花對人宮頸癌金蟬花對人宮頸癌Hela細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉；：孢子粉；H-L：蟬花粗多糖：蟬花粗多糖組；組；G：5-氟尿

23、嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-2 Effect of on Hela (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉

24、粗多糖粗多糖圖圖2-3 金蟬花對人回盲腸癌金蟬花對人回盲腸癌ccl-244細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖組；：粗多糖組；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-3 Effect of on ccl-244 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/

25、ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml粗多糖粗多糖孢子粉孢子粉圖圖2-4 金蟬花對人橫紋肌肉瘤金蟬花對人橫紋肌肉瘤RD細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖組；：粗多糖組；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-4 Effect of on RD (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h

26、 respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖圖圖2-5 金蟬花對人膠質(zhì)瘤金蟬花對人膠質(zhì)瘤LN229細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖組；粗多糖組；G：環(huán)磷酰胺）：環(huán)磷酰胺）Fig. 2

27、-5 Effect of on LN229 (Light microscope 200) A: control group; H-L: Cordyceps cicadae for 48h respectively; G-K: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:100 M Cy.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/ml I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml粗多糖粗多糖孢子粉孢子粉圖圖2-6 金

28、蟬花對人胃癌金蟬花對人胃癌HGC-27細胞形態(tài)學的影響（細胞形態(tài)學的影響（A：正常組；：正常組；B-F：孢子粉孢子粉；H-L：粗多糖組；粗多糖組；G：5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶）Fig. 2-6 Effect of on HGC-27 (Light microscope 200) A: control group; B-F: Cordyceps cicadae for 48h respectively; H-L: Cordyceps cicadae polysaccharide respectively; G:5 M 5-Fu.A controlB 50g/ml C 100g/mlD 250g/m

29、l I 100g/ml F 1mg/mlG 5-Fu(5)H 50g/ml J 250g/ml K 500g/ml L 1mg/mlE 500g/ml孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖 上述結果表明：人工培養(yǎng)金蟬花孢子粉和野生金蟬花粗多糖對體外培養(yǎng)的人胃癌HGC27、人白血病K562和PBL985/GPD、人橫紋肌肉瘤RD、人宮頸癌Siha、Hela、人胰腺癌SW1990、人膠質(zhì)瘤LN229及人回盲腸癌ccl-244細胞等腫瘤細胞的增殖有一定的抑制作用。（三） 流式細胞儀（PI單染）檢測結果G1期： DNA合成前期S期：DNA合成期G2期：DNA合成后期M期：有絲分裂期，DNA的復制Cell Cycle

30、圖圖3-1 金金 蟬花對人胰腺癌蟬花對人胰腺癌SW1990細胞周期的影響（細胞周期的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.3-1 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of SW1990 treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1m

31、g/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.ABCDG1期S期G2期圖圖3-2 金蟬花對人白血病金蟬花對人白血病K562細胞周期的影響（細胞周期的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶 ） Fig.3-2 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of K562 treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A

32、: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide;D: 5 M 5-Fu.ABCD圖圖3-3 金蟬花對人宮頸癌金蟬花對人宮頸癌Hela細胞周期的影響（細胞周期的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.3-3 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of Hela treated with Cordycep

33、s cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.ABCD表表3-1 金蟬花對人胰腺癌金蟬花對人胰腺癌SW1990、人白血病、人白血病K562及人宮頸癌及人宮頸癌Hela細胞周期的影響細胞周期的影響Tab.3-1 Flow Cytometric analysis of DNA histogram of SW1990、K562 and

34、 Hela treated with Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide. 細胞株細胞株濃度濃度正常對照正常對照(%)(%)孢子粉孢子粉 (%)(%)G1G1S SG2G2G1G1S SG2G2人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml66.41719.62819.62813.95613.95666.22466.22415.43315.43318.34318.343人白血病人白血病K562K5621mg/ml41.99650.45650.4567.5487.54820.60920.60952.6352.6326

35、.7626.76人宮頸癌人宮頸癌HelaHela1mg/ml59.45627.77327.77312.77112.77173.73873.73813.30513.30512.95712.957細胞株細胞株濃度濃度粗多糖粗多糖(%)(%)5-Fu(%)5-Fu(%)G1G1S SG2G2G1G1S SG2G2人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml70.04670.0469.8529.85220.10120.10181.2481.249.0819.0819.6799.679人白血病人白血病K562K5621mg/ml33.85533.85551.77651.77614.36914.3

36、6936.30736.30753.12653.12610.56610.566人宮頸癌人宮頸癌HelaHela1mg/ml57.87157.87132.06832.06810.06110.06145.41845.41847.46347.4637.1197.119 流式細胞儀（PI單染）檢測結果表明： 金蟬花孢子粉醇提物和野生蟬花粗多糖可使人胰腺癌SW1990及人白血病K562細胞周期阻滯在G2期； 金蟬花孢子粉醇提物可使人宮頸癌Hela細胞周期阻滯在G1期。腫瘤細胞死亡有哪幾種形式？chromatin clumpmitochondria swellcellular componentsdisin

37、tegratemembrane rupturenuclear compactionorganelles intactnucleus fragments, membrane-bound apoptotic bodiesphagocytosis of apoptotic bodies,lysosomal degradationisolationmembraneautophagosomelysosomeautophago-lysosomenecrosisapoptosisautophagyThree forms of cell deathnecrosisapoptosisautophagyAP-au

38、tophagosomeAL-autophagolysosome腫瘤細胞死亡的主要形式： 壞死（necrosis） 凋亡（apoptosis） 壞死性凋亡（necroptosis ） 自噬（autophagy）（四） 流式細胞儀（Annexin V/PI雙染）檢測結果金蟬花能否誘導腫瘤細胞凋亡？圖圖4-1 金金 蟬花對人胰腺癌蟬花對人胰腺癌SW1990細胞凋亡的影響（細胞凋亡的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.4-1 Flow cytometric analyses of Annex

39、in V-FITC binding and PI uptake in SW1990 after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.3.85%43.77%12.11%5.31%ABCD左上象：死亡細胞左下象：活細胞右上象：晚期凋亡細胞右下象：早期凋亡細胞圖圖4-2 金蟬花對人白血

40、病金蟬花對人白血病K562細胞凋亡的影響（細胞凋亡的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） Fig.4-2 Flow cytometric analyses of Annexin V-FITC binding and PI uptake in K562 after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cica

41、dae; C: 1mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.3.35%52.59%33.35%3.16%ABCDFig.4-3 Flow cytometric analyses of Annexin V-FITC binding and PI uptake in Hela after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. A: control group; B: 1mg/ml Cordyceps cicadae; C: 1

42、mg/ml Cordyceps cicadae polysaccharide; D: 5 M 5-Fu.圖圖4-3 金蟬花對人宮頸癌金蟬花對人宮頸癌Hela細胞凋亡的影響（細胞凋亡的影響（A：正常組；：正常組；B： 1mg/ml 孢子粉孢子粉; C: 1mg/ml 粗多糖粗多糖; D: 5 M 5-氟尿嘧啶）氟尿嘧啶） 2.17%86.75%57.50%3.70%ABCD表表4-1 金蟬花對人胰腺癌金蟬花對人胰腺癌SW1990、人白血病、人白血病K562及人宮頸癌及人宮頸癌Hela細胞凋亡的影響細胞凋亡的影響Tab.4-1 Flow cytometric analyses of Annexin

43、 V-FITC binding and PI uptake in SW1990、K562 and Hela after Cordyceps cicadae and Cordyceps cicadae polysaccharide treatment for 48 h. 細胞株細胞株濃度濃度對照對照孢子粉孢子粉粗多糖粗多糖5-Fu5-Fu凋亡率凋亡率% %壞死率壞死率% %凋亡率凋亡率% %壞死率壞死率% %凋亡率凋亡率% %壞死率壞死率% %凋亡率凋亡率% %壞死率壞死率% %人胰腺癌人胰腺癌SW1990SW19901mg/ml4.934.930.320.3243.7743.777.27.21

44、2.1112.1113.3813.385.315.310.830.83人白血病人白血病K562K5621mg/ml3.363.360.110.1152.5952.5911.5111.5133.3533.3510.1710.173.163.160.040.04人宮頸癌人宮頸癌HelaHela1mg/ml1.171.170.180.1886.7586.753.783.7857.557.534.3334.333.73.70.120.12 流式細胞儀（Annexin V/PI雙染）初步觀察結果: 金蟬花孢子粉作用人胰腺癌SW1990、人白血病K562及人宮頸癌Hela細胞48小時后，凋亡率分別為43.

45、17%、52.59%和 86.75% ； 蟬花粗多糖作用人胰腺癌SW1990、人白血病K562及人宮頸癌Hela細胞48小時后，凋亡率分別為12.11%、33.35%、 57.5% 。 （五） 電鏡觀察結果核大，核型不規(guī)則，有切跡，核質(zhì)比值大，核仁明顯，細胞器豐富。（18000） 給藥前人胰腺癌細胞胞核內(nèi)核膜旁異染色質(zhì)邊集，細胞膜溶解消失，線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張 ，呈壞死性凋亡。（12000） 孢子粉（1mg/ml） 圖圖 5-1. 透射電鏡觀察金蟬花對人胰腺癌透射電鏡觀察金蟬花對人胰腺癌SW1990及人宮頸癌及人宮頸癌Hela細胞超微結構的影響細胞超微結構的影響胞核變小，核漿比值減小，核仁減

46、小，異染色質(zhì)增多，沿核膜邊集，呈早期凋亡形態(tài) （22500） 。核膜旁異染色質(zhì)邊集，胞漿內(nèi)空泡變性，可見自噬小體（18000） 。 人胰腺癌細胞粗多糖組（1mg/ml） 人胰腺癌細胞粗多糖組（1mg/ml） 核型不整，核膜有切跡，核漿比值大，雙核仁，細胞表面有微絨毛（9000）。給藥前人宮頸癌Hela細胞（1mg/ml） 核小，核異染色質(zhì)邊集在核膜旁，未見核仁 （22500）。人宮頸癌Hela細胞孢子粉組（1mg/ml） 人宮頸癌Hela細胞孢子粉組（1mg/ml） 核膜旁異染色質(zhì)邊集，可見自噬小體，脂質(zhì)空泡（30000）。.核膜旁異染色質(zhì)邊集，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，細胞膜破損，呈壞死性凋亡（ 9000 ）人宮頸癌Hela細胞粗多糖組（1mg/ml） 透射電鏡觀察結果表明： 1. 金蟬花孢子粉和粗多糖可誘導人胰腺癌SW1990、人宮頸癌Hela細胞和人胰腺癌SW1990細胞凋亡。 2. 金蟬花孢子粉和粗多糖可誘導人胰腺癌SW1990及人宮頸癌Hela細胞壞死性凋亡。 3. 金蟬花孢子粉和粗多糖可誘導人胰腺癌SW1990及人宮頸癌Hela細胞自噬。 金蟬花孢子粉和粗多糖對腫瘤細胞形態(tài)和 腫瘤細胞膜有什么影響呢？細胞分裂末期，其中數(shù)對子細胞逐步分開，子細胞呈橢圓形（1000）。