蛋白酶酶切位點

1、1 蛋白酶酶切位點 蛋白酶的分類及作用位點 蛋白酶 分類 作用位點 已知抑制物 氨基肽酶 金屬蛋白酶 帶有自由氨基的 L-氨基酸氨基末端； 不分解由 X-Pro、D 或 Q 組成的肽鍵 2，2,雙吡啶,1 . 1()-菲咯啉 菠蘿蛋白酶 巰基蛋白酶 無特異性 a2巨球蛋白，TPCK, TLCK，烷化 羧肽酶 A 鋅金屬蛋白酶 帶有自由氨基酸的 L-氨基酸羧基端； 不能分解 R、P 或羥脯氨酸 EDTA, EGTA 羧肽酶 B 鋅金屬蛋白酶二 J K- Lys, R- Arg 羧基端 EDTA , EGTA，堿性氨基酸 羧肽酶 Y 絲氨酸羧肽酶 氨基酸羧基端 PMSF 組織蛋白酶 C 琉基蛋白酶

2、 氨基端雙肽，可通過 K, R 或 P 氨基 端作為第一或第二個氨基酸封閉 醋酸碘，甲醛 胰凝乳蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 在 F- Phe, T- Thr 或 Y- Tyr 之后 抑肽酶,PMSF,TPCK, a-巨球蛋白 膠原酶 金屬蛋白酶 在 P-X-G-P 肽鏈中 X 之后 EDTA,EGTA,還原劑,但無血清存在 dispase 金屬蛋白酶 無特異性 EDTA , EGTA , Hg 2+,重金屬 內(nèi)肽酶 Arg-C 絲氨酸蛋白酶 在 R- Arg 之后 a巨球蛋白，TLCK 內(nèi)肽酶 Asp-N 金屬蛋白酶 在 D- Asp 和 C- Cys 半胱氨酸之前 EDTA, a菲咯啉 內(nèi)肽酶 G

3、lu-C 內(nèi)肽酶 Lys-C 絲氨酸蛋白酶 在 E- Glu/Gln 或 D- Asp 之后 a巨球蛋白，TLCK 絲氨酸蛋白酶 在 K- Lys 之后 TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 腸激酶 絲氨酸蛋白酶 在 D-D-D-D-K-肽鏈中 K 之后 Xa 因子 絲氨酸蛋白酶 在 R- Arg 之后 PMSF,APMS,大豆胰蛋白酶抑制物 無花果蛋白酶 琉基蛋白酶 無特異性 TPCK, TLCK,a-巨球蛋白 激肽釋放酶 絲氨酸蛋白酶 在一些 R- Arg 之后 抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 木瓜蛋白酶 巰基蛋白酶 長期孵育時具有廣泛特異性 arg、lys TPCK, TLCK，抑蛋白酶醛肽 a 、gl

4、y、L-Citrulline 巨球蛋白，烷化劑 胃蛋白酶 纖溶酶 酸蛋白酶 廣泛特異性 phe、trp、tyr 等疏水 aa 胃蛋白酶抑制素 絲氨酸蛋白酶 在 K- Lys 或 R- Arg 之后 PMSF,TLCK,抑肽酶，a-巨球蛋白 鏈霉蛋白酶 混合型 無特異性 B. M .完整藥片 蛋白酶 K 絲氨酸蛋白酶 廣泛特異性 PMSF, PefablocSc 枯草桿菌蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 無特異性 PMSF,a巨球蛋白，苯甲脒 熱溶素 鋅金屬蛋白酶 在非極性殘基之前 EDTA 凝血酶 絲氨酸蛋白酶 在 K- Lys 之后 TLCK, PMSF,抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，a巨球蛋白，苯甲脒 胰蛋白

5、酶 絲氨酸蛋白酶 在 K- Lys 或 R -Arg 之后 arg、lys TLCK, PMSF,抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，a巨球蛋白 蛋白酶 分類 作用位點 已知抑制物 木瓜蛋白酶 巰基蛋白酶 具有廣泛特異性 TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽 a-巨球蛋白，烷化劑 胃蛋白酶 酸蛋白酶 廣泛特異性 胃蛋白酶抑制素 胰蛋白酶 絲氨酸蛋白酶 在 K 或 R 之后 TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,a巨球蛋白 人體 20 種氨基酸及其英文縮寫 2 名稱 三字符號單字符號 丙氨酸 Ala A 精氨酸 Arg R 天冬氨酸 Asp D 半胱氨酸 Cys C 谷氨酰胺 Gln Q 谷氨酸 Glu/Gl

6、n E 組氨酸 His H 異亮氨酸 Ile I 甘氨酸 Gly G 天冬酰胺 Asn N 亮氨酸 Leu L 賴氨酸 Lys K 甲硫氨酸 Met M 苯丙氨酸 Phe F 脯氨酸 Pro P 絲氨酸 Ser S 蘇氨酸 Thr T 色氨酸 Trp W 酪氨酸 Tyr Y 纈氨酸 Vai V 【生化】特異性蛋白酶的酶切位點 胰蛋白酶 arg、lys，得到以 arg、lys 為 C 末端殘基的肽段。 胰凝乳蛋白酶 phe、trp、tyr 等疏水 aa。 胃蛋白酶 phe、trp、tyr 等疏水 aa 。 木瓜蛋白酶 arg、lys。葡萄球菌蛋白 酶，磷酸緩沖液 ph7.8 時斷裂glu、asp

7、。碳酸氫銨緩沖液 ph7.8 或醋酸銨緩沖液 ph4.0 時斷裂 glu。梭菌蛋白酶 arg，用于不溶性蛋白的長時間裂解。 CNBr 斷裂 Met。羥胺斷 裂 asn gly 間的肽鍵。 二硫鍵可以用巰基化合物還原法或者過甲酸氧化法斷裂 .。 木瓜蛋白酶（Papain ），又稱木瓜酶，是一種蛋 白水解酶。木瓜蛋白酶 是番木瓜 （Carieapapaya ）中含有的一種低特異性蛋白水解酶，廣泛地存在于番木瓜的根、莖、 葉和果實內(nèi)，其中在未成熟的乳汁中含量最豐富。 木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸， 屬于 巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)生安全等特點，因此在食品、醫(yī)藥、飼料、 日化、皮革

8、及紡織等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用。 木瓜蛋白酶是一種蛋白水解酶，分子量為 23406，由一種單肽鏈組成，含有 212 個氨基酸 殘基。至少有三個氨基酸殘基存在于酶的活性中心部位，他們分別是 Cys25、His159 和 Asp158，另外六個半胱氨酸殘基形成了三對二硫鍵 ，且都不在活性部位。純木瓜蛋白酶制品 可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量 21000，約占可溶性蛋白質(zhì)的 10% ； （ 2）木瓜凝乳蛋 白酶，分子量 26000，約占可溶性蛋白質(zhì)的 45% ； （ 3）溶菌酶，分子量 25000，約占可溶 性蛋白質(zhì)的 20% ;及纖維素酶等不同的酶。 番木瓜未成熟果實中含有木瓜蛋白酶 （Papain）

9、、木瓜凝乳蛋白酶 A（Chymopapain A ）、 木瓜凝乳蛋白酶 B（Chym opapain B ） 、木瓜肽酶 B （PapayaPeptidase B ） 等多種蛋白 水解酶。且已知四種半胱氨酸蛋白酶的一級結(jié)構(gòu)具有高度的同源性。 其中，木瓜蛋白酶屬巰 基蛋白酶，可水解蛋白質(zhì)和多肽中精氨酸和賴氨酸的羧基端，并能優(yōu)先水解那些在肽鍵的 3 N-端具有二個羧基的氨基酸或芳香 L-氨基酸的肽鍵。 木瓜蛋白酶 papain 屬巰基蛋白酶，具有較寬的底物特異性，作用于 蛋白質(zhì)中 L-精氨酸、L- 賴氨酸、甘氨酸和 L-瓜氨酸殘基羧基參與形成的肽鍵。 此酶屬內(nèi)肽酶，能切開全蛋蛋白質(zhì)分 子內(nèi)部肽鏈一

10、 CO-NH 生成分子量較小的 多肽類。 最適合 pH 值 5.7（ 一般 39.5 皆可），在中性或偏酸性時亦有作用， 等電點 1= 8.75 ;最適合 溫度 5560 C （一般 1085 C皆可）,耐熱性強，在 90 C時也不會完全失活； 受氧化劑抑制， 還原性物質(zhì)激活。 胃蛋白酶為什么不水解自身百度文庫 胃蛋白酶是一種酸性蛋白酶。 由胃部中的胃粘膜主細胞釋放出沒有活性的胃蛋白酶原。 酶原 在遇到由胃壁細胞所釋放的胃酸中的鹽酸后切去 44 個氨基酸殘基將被激活， 其最適 pH 值 約為 1.52.2，在中性或堿性 pH 值的溶液中，胃蛋白酶 會發(fā)生解鏈而喪失活性。胃蛋白 酶在對蛋白質(zhì)或多肽進行水解時，具有一定的氨基酸序列特異性， 傾向于水解氨基端或羧 基端為芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）或亮氨酸的肽鍵。 胰蛋白酶和糜蛋白酶： 糜蛋