生工細胞工程復(fù)習(xí)思考題(僅供參考)

1、細胞工程復(fù)習(xí)參考第一章緒論1 .植物組織培養(yǎng)的幾個基本概念：全能性，組織培養(yǎng)，器官培養(yǎng)，外植體細胞的全能性細胞具有發(fā)育成一個完整個體的潛在能力。植物組織培養(yǎng)（tissue culture）：用無菌方法，使植物體的離體器官、組織和細胞在人為提供的條件下生長和發(fā)育的培養(yǎng)技術(shù)的總稱（屬體外培養(yǎng)in vitro culture ）外植體（explant）：由活植物體上切取下來以進行培養(yǎng)的那部分組織或器官。植株培養(yǎng)：以具備完整植株形態(tài)的材料（如幼苗和較大的植株）為外植體的無菌培養(yǎng)。胚胎培養(yǎng)：以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養(yǎng)。器官培養(yǎng)：以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體

2、無菌培養(yǎng)。組織培養(yǎng)：以分離出植物各部位的組織（如分生組織形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無菌培養(yǎng)。植物細胞工程概念：是以植物組織細胞為基本單位，在離體條件下進行培養(yǎng)、繁殖或人為的精細操作，使細胞的某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而改良品種或創(chuàng)造新物種，或加速繁殖植物個體，或獲得有用物質(zhì)的過程統(tǒng)稱為植物細胞工程。2 .細胞工程的定義及分類。定義：以細胞為基本單位，在體外條件下進行培養(yǎng)、繁殖，或人為地使細胞的某些生物學(xué)特性按人的意愿發(fā)生改變從而達到改良生物品種或創(chuàng)造新品種，加速繁育動植物個體，或獲得某種有用的物質(zhì)的過程。分類：

3、根據(jù)生物類型的不同分為動物細胞工程、植物細胞工程和微生物細胞工程。廣義包括所有的生物組織、器官及細胞離體操作和培養(yǎng)技術(shù)狹義的細胞工程：則是指細胞融合和細胞培養(yǎng)技術(shù)3 .請簡單談?wù)勚参锛毎こ淘谠谟N、食品工業(yè)等方面的應(yīng)用。在植物育種上的應(yīng)用： 將植物常規(guī)育種技術(shù)和植物組織培養(yǎng)技術(shù)相結(jié)合，可以獲得常規(guī)技術(shù)難以獲得或無法獲得的種質(zhì)材料，縮短育種周期，提高育種效率。其優(yōu)勢有快速獲得特殊倍性材料，克服遠緣雜交不親和，克服雜種胚早期夭折，導(dǎo)入外源基因，種質(zhì)資源保存， 種苗脫病毒與快速繁殖。在食品工業(yè)中的應(yīng)用：有不受地理、氣候、季節(jié)條件的影響，節(jié)約土地、減低成本、提 高經(jīng)濟效益，容易獲得誘變突變體等優(yōu)點。

4、 但許多技術(shù)還停留在實驗室階段，生產(chǎn)規(guī)模待擴大。應(yīng)用 利用植物細胞工程生產(chǎn)香料、調(diào)料、食品添加劑、天然食品等。4 .動物細胞在食品工業(yè)的應(yīng)用在干擾素生產(chǎn)上的應(yīng)用，在單克隆抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用第二章細胞培養(yǎng)的設(shè)備和操作技術(shù)1. 基本概念基本實驗室，輔助實驗室，超凈工作臺 無菌操作技術(shù),2. 細胞培養(yǎng)的營養(yǎng)成分主要包括哪些？各有什么功能作用？細胞培養(yǎng)的營養(yǎng)成分包括無機鹽、有機化合物和生長調(diào)節(jié)劑。無機鹽：一是組成各種化合物，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；二是構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與植物的代謝活動；三是這些元素之間互相協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平 衡等生物電化學(xué)方面的作用；四是在發(fā)育過程中影響組織器

5、官的建成。有機物質(zhì)：(1)糖：維持培養(yǎng)基合適的滲透壓，為細胞提供合成新物質(zhì)的碳骨架，為細 胞呼吸代謝提供底物和能量。(2)維生素：利于細胞代謝和器官分化。B1是植物組培必須加入的維生素(3)氨基酸：組成蛋白質(zhì)及其他代謝功能。(4)肌醇：促進糖類的相互轉(zhuǎn)化，維生素、激素的利用作用，是培養(yǎng)物快速生長。(5)腺喋吟、硫酸鹽的激素：促進芽、根的形成和生長。(6)附加物：為非細胞生長所必需，但對細胞生長有利。瓊脂：使培養(yǎng)基在常溫下凝 固，不參與代謝?；钚蕴浚豪闷湮侥芰Γ瑴p少一些有害物質(zhì)的影響。(7)其它有益有機添加物或未知復(fù)合成分：提供一些必要的微量營養(yǎng)成分、生理活性 物質(zhì)和生長激素等。生長調(diào)節(jié)劑：

6、培養(yǎng)基中對培養(yǎng)物影響最大最顯著的就是激素，激素的種類、濃度以及配比都會顯著的影響愈傷組織的形成，不定根、不定芽的分化，胚狀體的形成等。主要有生長素、細胞分裂素、赤霉素和脫落酸4類。(1)生長素：誘導(dǎo)愈傷組織的形成、胚狀體的產(chǎn)生以及試管苗的生根，更重要的是配合 一定比例的細胞分裂素誘導(dǎo)腋芽及不定芽的產(chǎn)生。(2)細胞分裂素：促進細胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強蛋白質(zhì)的合成、抑制頂端優(yōu)勢、促進側(cè)芽的生長及顯著改變其他的激素作用。(3)赤霉素：能打破休眠，促進果實成長，能刺激不定胚發(fā)育成正常小植株，但在培養(yǎng) 基中很少添加，因為它的作用往往是負面的。(4)脫落酸：阻礙發(fā)育、促進老化、形成休眠

7、芽、抑制生長使繼代培養(yǎng)時間延長。3. 細胞工程在實驗室設(shè)計上有何要求？滿足實驗準備（培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌） 、無菌操作和控制培養(yǎng)三個基本要求。4. 植物組培中消毒、滅菌有何作用和意義，具體方法包括哪些？植物組培中，凡用于培養(yǎng)和無菌操作的房間、器具、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基，培養(yǎng)材料和操作者的衣物都應(yīng)隨時進行滅菌， 以確保不受雜菌污染， 否則， 由于雜菌的生長繁殖速度一般都比培養(yǎng)的組織快得多， 最終將把組織全部殺死， 這些污染微生物還可能排泄對植物組織有毒的代謝廢物，因此在培養(yǎng)容器內(nèi)部保持一個完全無菌的環(huán)境是絕對必須的。消毒滅菌的具體方法包括物理方法和化學(xué)方法。 物理方法包括高溫高壓滅菌、 烘烤或灼燒滅

8、菌、射線處理、超聲波等滅菌方法，過濾、離心沉淀等除菌方法?；瘜W(xué)方法即使用滅菌劑，如熏蒸滅菌、消毒液滅菌（ 70%酒精、升汞、苯酚、漂白精、新潔爾滅、次氯酸鈉、過氧化氫） 。5. 紫外燈如何殺菌？操作中要注意什么？波長 200-290mm 的紫外線，可透過細菌或病毒的細胞膜對控制著遺傳現(xiàn)象和生物機能核酸（ DNA ）造成機能損傷，使它失去繁殖能力，從而達到殺菌的目的。每次實驗前要用紫外燈滅菌 20 分鐘以上，然后噴酒精滅菌，工作過程中注意一直開著吹風(fēng)機，并且一定要關(guān)掉紫外燈，過濾網(wǎng)應(yīng)經(jīng)常清洗。6. 培養(yǎng)基的分類與配置第三章 愈傷組織培養(yǎng)1. 定義：分化，脫分化，胚狀體，人工種子，愈傷組織，細胞的

9、全能性，植物組織培養(yǎng)體細胞胚,性細胞胚，繼代培養(yǎng)分化： 細胞在分裂過程中發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變， 從而在個發(fā)育中形成各類組織和器官的生活周期。脫分化： 已分化好的細胞在人工誘導(dǎo)條件下恢復(fù)分生能力， 恢復(fù)到分化狀態(tài)的過程。胚狀體 : 對應(yīng)于胚（ embryo） ， 在離體培養(yǎng)過程中產(chǎn)生一種形似胚 （具有明顯的根端和芽端） ，功能與胚相同的結(jié)構(gòu)。人工種子：指將植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細胞胚包埋在含有營養(yǎng)成分和保護功能的物質(zhì)中，在適宜條件下能發(fā)芽出苗的顆粒體。愈傷組織： 在離體培養(yǎng)過程中形成的具有分生能力的一團不規(guī)則細胞， 多在外植體切面上產(chǎn)生。（ 植物受傷后于傷口表面形成的一團薄壁細胞, 在組織培養(yǎng)中

10、， 指在人工培養(yǎng)基上由外植體長出的一團無序生長的薄壁細胞）細胞的全能性： 每個細胞都具有發(fā)育成完整個體的潛在能力， 因為每個細胞都具有全套的遺傳基因，不論是性細胞還是體細胞在特定條件下可以進行表達。植物組織培養(yǎng)的概念：指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞、原生質(zhì)體等， 通過無菌操作， 在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。體細胞胚：是由體細胞組織（一般指愈傷組織）經(jīng)培養(yǎng)再分化形成；性細胞胚：是由性細胞（包括卵細胞和精細胞）再分化形成。繼代培養(yǎng) ：定期（ 24 周）將愈傷組織分成小塊，接種到新鮮的原培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)以維持愈傷組織生長的方法。2. 植

11、物組織培養(yǎng)的主要意義有哪些？植物組織培養(yǎng)的主要意義：加速無性繁殖；獲取脫毒苗；擴大變異范圍；加速親本材料的純化；種質(zhì)資源的試管保存；為基因工程的全面實施人工控制遺傳方向打下基礎(chǔ)。應(yīng)用：1 . 無性系快速繁殖；2 .花藥培養(yǎng)和花粉單倍體育種加快育種過程；3 .藥用植物的工廠化生產(chǎn)（如人參）；4 .種質(zhì)的保存和基因庫的建立；5 .突變體的篩選培育。3. 如何降低或防止外植體在體外培養(yǎng)過程中的褐變現(xiàn)象？1） 培養(yǎng)基中加入抗氧化劑；2） 用抗氧化劑浸泡外植體后再接種；3） 減少光照強度或在黑暗條件下培養(yǎng)；4） 多次更換培養(yǎng)基達到稀釋效應(yīng)；5） 加入多胺類物質(zhì)，如精胺、亞精胺，通過刺激細胞分裂，加速組織

12、生長，減少褐化。4. 請簡單分析植物組織培養(yǎng)的影響因素。影響植物組織培養(yǎng)的因素有植物因素、培養(yǎng)基因素和環(huán)境因 素。植物因素如基因型、植物年齡、組織和器官的年齡、植物的生理狀態(tài)、取材年份及生長條件、取材部位及大小。培養(yǎng)基因素如無機鹽、有機化合物、植物激素、天然提取物、瓊脂、 pH 值、活性炭、滲透壓。環(huán)境因素如光照，包括光強、光質(zhì)、光周期，溫度，濕度，氣體。5. 愈傷組織的形成大致經(jīng)過哪些階段？各有何特征？愈傷組織的形成大致經(jīng)過起始期（誘導(dǎo)期） 、分裂期、形成期（分化期）三個階段，三個時期無嚴格界限。誘導(dǎo)期的特征： 細胞脫分化， 液泡蛋白體出現(xiàn)， 質(zhì)體轉(zhuǎn)變?yōu)榍百|(zhì)體； 細胞大小變化不大；細胞質(zhì)顯著

13、變濃；大液泡消失； RNA 含量迅速增加，細胞核顯著增大并移至細胞中央；細胞器增加。分裂期的特征：細胞數(shù)目迅速增加；細胞鮮重下降；細胞體積減小，無液泡；核和核仁增大到最大； RNA 含量減少， DNA 含量保持不變；細胞總干重、蛋白質(zhì)和核酸含量大大增加，新細胞壁的合成極快；愈傷組織結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持其不分化的狀態(tài)。形成期的特征： 細胞平均大小相對穩(wěn)定； 形成分生組織結(jié)節(jié)； 細胞分裂已基本停止，開始形成一些不同形態(tài)和功能的細胞。6. （重點選擇題）誘導(dǎo)脫分化過程中細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化：1）細胞大小沒有多大變化；2）細胞質(zhì)顯著變濃；3）大液泡消失；4） RNA含量迅速增加，細胞核體積明

14、顯增大并逐漸移位至細胞中央； 5）細胞器增加。7. 愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有哪兩種方式？兩者有何區(qū)別？ 愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式有不定芽方式和胚狀體方式兩種。 重點）胚狀體和不定芽的區(qū)別答；胚狀體指由培養(yǎng)細胞誘導(dǎo)分化出具胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)（胚狀體），進而長成完整植株 。不定芽指細胞或愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株。區(qū)別：1）胚狀體來自單個細胞，具有明顯的兩極性：分化根端和苗端，而不定芽或 不定根都為單向極性。2）胚狀體形成的小植株與周圍組織無結(jié)構(gòu)聯(lián)系；而不定芽或不定根往往總是與母體愈傷組織的維管組織相聯(lián)系。3）胚狀體的維管組織的分布是呈獨立的“Y”字形，而不定芽的維管組織無

15、此現(xiàn)象。8. 愈傷組織形態(tài)發(fā)生主要受哪些因素調(diào)控？愈傷組織的形態(tài)發(fā)生主要受 外植體本身、培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境三大類因素的調(diào)控。（1）外植體本身：遺傳型：不同植物種、同種植物的不同亞種或品種差異很大。取材的器官和部位：通常同一種植物的不同器官和組織所形成的愈傷組織無論在形態(tài)上或生理上差別均不大，但因植物不同而異。年齡：年齡較幼的外植體不僅易于誘導(dǎo)形成愈傷組織，而且也容易誘導(dǎo)分化成植株；愈傷組織的年齡和繼代次數(shù)也有顯著影響。（2）培養(yǎng)基：激素：腺喋吟/IAA的比例控制芽和根形成；生長素和細胞分裂素之間的相互作用調(diào)節(jié)芽和 根的形成，生長素/細胞分裂素的比例大則生根，比例小則生苗，比例適中則產(chǎn)生無結(jié)構(gòu)的

16、愈傷組織；合適范圍內(nèi)激動素促進芽的形成；不同生長素和細胞分裂素對生根和長芽的效果是不同的。無機營養(yǎng)元素：培養(yǎng)基一般都含有C、H、O、N、P、K、S、Ca、Mg、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl16種必需元素，但各種類型的植物、器官所需要的各種元素特別是大量元素的量是有區(qū)別的，對離子的形式也有不同的要求。有機成分：在培養(yǎng)基中加入足夠的糖、硫胺酸、煙酸、口比哆醇、肌醇和甘氨酸，可以滿足愈 傷組織的生長和分化的要求；糖的種類和濃度；加一些植物器官的汁液，有助分化。物理性質(zhì)：pH對芽的分化有一定影響，通常把 pH調(diào)整到5.66.0;滲透壓等物理性質(zhì)的影 響。（3）培養(yǎng)環(huán)境：光照：光對器官的作用是

17、一種誘導(dǎo)反應(yīng)，各種植物的器官發(fā)生對光（光質(zhì)、強度、長度）的 要求是不同的，光照長度對具有光周期反應(yīng)的植物的器官分化有明顯影響。溫度：一般采用2428 c恒溫對外植體培養(yǎng)，可較好地形成根和芽；培養(yǎng)室的溫度最好能保 持一定的日夜溫差，對器官的發(fā)生和生長有利。9. 愈傷組織的分類10. 植物脫毒的方法和基本原理。植物脫毒方法有熱處理脫毒、莖尖培養(yǎng)脫毒、 療法脫毒。愈傷組織培養(yǎng)脫毒、 莖尖微體嫁接、 化學(xué)熱處理脫毒原理： 當植物組織處于高于正常溫度的環(huán)境中時， 組織內(nèi)部的病毒受熱之后部分或全部鈍化， 是病毒在植物體內(nèi)減緩增殖或停止增殖， 而失去病毒的侵染能力； 但寄主植物的組織很少或不會受到傷害， 反

18、而可以加速植物細胞的分裂， 使植物細胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。莖尖培養(yǎng)脫毒原理： 感染病毒植株的體內(nèi)病毒分布并不均勻， 病毒的數(shù)量隨植株部位及年齡而異，越靠近莖頂端區(qū)域的部位病毒感染深度越低，生長點（約 0.11mm 區(qū)域）則不含病毒或含病毒很少。愈傷組織培養(yǎng)脫毒原理： 愈傷組織帶病毒不均一， 部分細胞是不帶病毒的， 由這些細胞再生的植株是無毒的。多次繼代的愈傷組織中病毒繁殖速度下降，甚至檢測不出病毒。莖尖微體嫁接脫毒原理： 木本植物莖尖培養(yǎng)難以生根成植株， 將實生苗砧木在人工培養(yǎng)基上種植培養(yǎng)，再從成年無病樹枝上竊取0.41mm 莖尖，在砧木上進行試管微體嫁接，以獲得無病毒幼苗。化學(xué)療法脫毒

19、原理：許多化學(xué)物品（如嘌呤、嘧啶類似物，氨基酸，抗菌素等）對離體組織或原生質(zhì)體具有脫毒效果。11. 植物脫毒和快速繁殖技術(shù)在生產(chǎn)中有何意義？1） 能夠有效地保持優(yōu)良品種的特性；2） 生產(chǎn)無病毒種苗，防止品種退化；3） 快速繁殖新品種，使優(yōu)良品種迅速應(yīng)用；4） 節(jié)約耕地，提高農(nóng)產(chǎn)品的商品率；5） 便于運輸。12. 請簡單闡述植物脫毒效果的檢測方法主要有哪些？脫毒效果檢測方法有外觀判斷法、指示植物鑒定法、抗血清鑒定法和電子顯微鏡檢查法。 （ 指示植物是指具有辨別某種病毒的專化性癥狀的寄主植物 ） 影響脫毒效果的因素：1 ）母體材料病毒侵染的程度；2）起始培養(yǎng)的莖尖大小13. 結(jié)合已做的愈傷組織誘導(dǎo)

20、實驗，請詳細分析造成實驗中出現(xiàn)污染的各種可能因素，并提出解決措施。1 .防止外植體帶菌，外植體接種前要洗滌和消毒；2 .防止器具或培養(yǎng)基等試劑帶菌，各種器具及培養(yǎng)基要經(jīng)過高溫滅菌；3 .防止操作環(huán)境污染，接種操作前要對無菌室進行消毒，對超凈工作臺要先用新潔爾滅或酒精擦拭，然后紫外燈照射至少20 分鐘；4 .防止操作時染菌， 未污染的材料要放在超凈工作臺的上風(fēng)區(qū)， 操作動作幅度不能太大，手要用酒精消毒， 其他與外植體接觸的器具要浸泡酒精或灼燒消毒， 不能讓帶菌物體碰觸培養(yǎng)容器內(nèi)壁。5 .防止空氣引起染菌，培養(yǎng)容器要密封完好。6 .出現(xiàn)染菌要分析染菌原因，對癥下藥進行處理。12、舉例說明植物組織培

21、養(yǎng)的快速繁殖技術(shù)的步驟與方法。 （ P34 ）如蘆薈組織培養(yǎng)快速繁殖。（1）愈傷組織培養(yǎng)：清水沖洗蘆薈幼苗，取莖尖部分，用 75%乙醇浸泡3060s,再用升汞浸 510min ， 最后用無菌水沖洗數(shù)次。 取包括莖尖生長點的組織切塊接種到愈傷組織培養(yǎng)基上。 培養(yǎng)條件為： 每天光照 1012h， 光照度為 10002000lx ， 溫度 25± 2。 培養(yǎng)約 1525 天后， 形成愈傷組織， 標志外植體已脫離分化狀態(tài)。 愈傷組織形成1 周后可將愈傷組織轉(zhuǎn)培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)或分化培養(yǎng)。（ 2）繼代培養(yǎng)：取出愈傷塊，剔除附著愈傷塊的培養(yǎng)基并用無菌水沖洗數(shù)次。將愈傷塊切成數(shù)小塊， 再接種到愈傷

22、組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上， 在于誘導(dǎo)愈傷組織相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù) 培養(yǎng)。（ 3）分化培養(yǎng)：將愈傷塊接種到分生培養(yǎng)基上，培養(yǎng)環(huán)境同愈傷組織培養(yǎng)。約3050天后出芽。當分化出的幼苗長到一定高度或分化出一定數(shù)量后，取出幼苗進行生根培養(yǎng)。（ 4）生根培養(yǎng)：將幼苗接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同分化培養(yǎng)。約半個月后幼苗生根。（ 5）煉苗：當幼苗的根長到一定長度，幼苗體已顯強壯時，取出幼苗并洗除附著在根上的培養(yǎng)基。排好幼苗，用清水潤濕，在1525、濕度60%80%煉苗1224h。（ 6）移栽：將幼苗栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化，每天定期噴施培養(yǎng)液和清水，約 1520 天后即可移栽到苗圃中。第四章 植物的細胞培

23、養(yǎng)1. 植物單細胞的分離方法主要有哪些？有物理方法、化學(xué)方法和酶法。物理方法即將疏松的愈傷組織放入液體培養(yǎng)集中， 經(jīng)搖床不斷振動， 使細胞分散。 若向 細胞懸浮液中吹入脈沖壓縮氣體，細胞分散得更好?；瘜W(xué)方法即在細胞懸浮培養(yǎng)中加入草酸鹽，或秋水仙素，或2， 4-D ，或水解乳蛋白。酶法即利用果膠酶和纖維素酶使細胞分散。2. 植物單細胞的培養(yǎng)方法有哪些？各有何優(yōu)缺點？植物單細胞的培養(yǎng)方法有平板培養(yǎng)、看護培養(yǎng)、液體淺層培養(yǎng)、微室培養(yǎng)和細胞懸浮培養(yǎng)。平板培養(yǎng)便于定點觀察，但通氣性差。看護培養(yǎng)簡便成功率高，適于難以培養(yǎng)的植物種類，但不能在顯微鏡下直接觀察。液體淺層培養(yǎng)通氣性好，代謝產(chǎn)物容易擴散減少有害物

24、質(zhì)的危害，繼代培養(yǎng)方便，便于觀察，但由于細胞可以游動，不能進行定點觀察。微室培養(yǎng)可以連續(xù)觀察細胞的發(fā)育和分化，但通氣性差，水分難保持，pH 易變動。懸浮培養(yǎng)可改善營養(yǎng)供應(yīng)、減少代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)的危害、改善氣體交換，適于大規(guī)模培養(yǎng)，但細胞長期培養(yǎng)對無菌要求高，細胞易變異，細胞易聚集且對機械剪切力敏感。3.懸浮細胞培養(yǎng)的定義，懸浮細胞培養(yǎng)的優(yōu)點有哪些？并分析影響懸浮細胞生長的可能因素。懸浮細胞培養(yǎng)是指將單個游離細胞或小細胞團在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。其優(yōu)點是能改善營養(yǎng)供應(yīng)、減少代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)的危害、改善氣體交換。影響懸浮細胞生長的可能因素有起始愈傷組織的質(zhì)量，接種細胞密度，培養(yǎng)條件、

25、方式、溫度，繼代周期。懸浮培養(yǎng)過程懸浮培養(yǎng)同步化方法：物理：體積選擇法：將培養(yǎng)細胞經(jīng)過一定大小的篩網(wǎng)過濾，對細胞按大小分別進行收集。冷處理法：先收集細胞，后在低溫（一般為4度）下處理一定時間后加培養(yǎng)液培養(yǎng)。化學(xué)：饑餓法：控制營養(yǎng)使細胞處于饑餓狀態(tài)，后加營養(yǎng)培養(yǎng)；有絲分裂抑制法：向培養(yǎng)液中加入化學(xué)抑制劑抑制細胞分裂，包括尿甘、秋水仙素懸浮細胞培養(yǎng)方法1 .分批培養(yǎng)法；是一種封閉的培養(yǎng)體系，培養(yǎng)過程中不放出培養(yǎng)液，也不補加培養(yǎng)液。2 .半連續(xù)培養(yǎng)法：在培養(yǎng)過程中，每隔一定時間更換一部分培養(yǎng)液或添加某種營養(yǎng)。3 .連續(xù)培養(yǎng)法：通過控制連續(xù)添加和排出的新老營養(yǎng)液的量，維持培養(yǎng)液體積恒定， 據(jù)操作的不同

26、又可分為封閉式和開放式兩種。封閉式：回收流出的細胞于培養(yǎng)系統(tǒng)中，細胞數(shù)目增加開放式：流出的細胞不回收于培養(yǎng)系統(tǒng)中，但進行細胞收獲.影響懸浮細胞生長的因素答：1）起始愈傷組織的質(zhì)量；2）接種細胞密度；3）培養(yǎng)條件：方式、溫度；4）繼代周期。4 . 一個成功的懸浮細胞培養(yǎng)體系必須滿足哪三個條件？（1）懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細胞團較??；（2）均一性好，細胞團大小、細胞形狀大致相同；（3）細胞生長迅速（23天加倍）。5 .植物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用植物細胞含有人類所需的成分，包括初生代謝物（蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪等）和次 生代謝物（多酚類、香精油、生物堿、樹脂等），傳統(tǒng)提取分離這些物質(zhì)由于資源短缺和需求量的

27、加大，難以滿足需求，通過細胞培養(yǎng)生產(chǎn)植物產(chǎn)品成為解決的有效途徑。6 .細胞生物反應(yīng)器的培養(yǎng)過程主要包括哪些步驟？細胞生物反應(yīng)器的培養(yǎng)過程主要包括細胞的馴化、篩選和細胞株的建立，擴大培養(yǎng)， 生物反應(yīng)器培養(yǎng)三個步驟。7 .適合大規(guī)模培養(yǎng)的細胞株應(yīng)具備何條件？生長速度快； 目的代謝產(chǎn)物含量高； 適合懸浮細胞培養(yǎng)。8 .細胞生物反應(yīng)器培養(yǎng)系統(tǒng)主要有哪些？各有何特點？細胞生物反應(yīng)器培養(yǎng)系統(tǒng)包括懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)和固定化培養(yǎng)系統(tǒng)。懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)利于改善營養(yǎng)供應(yīng)、減少代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)的危害、改善氣體交換。固定化培養(yǎng)系統(tǒng)：細胞固定而培養(yǎng)液循環(huán)流動，細胞接觸緊密、生長緩慢，細胞擬組織化，有利于次生產(chǎn)物的積累；包埋式固

28、定可減少剪切力的損傷作用；易于把細胞和培養(yǎng)液分開，更有利于連續(xù)培養(yǎng)及生物轉(zhuǎn)化過程的實現(xiàn)；高密度的細胞群體，可建立細胞間的物理、化學(xué)聯(lián)系，細胞位置的相對固定，有利于物化梯度的建立，更有利于產(chǎn)物的形成；環(huán)境條件易于控制，次生代謝物易于釋放；存在產(chǎn)物釋放和氧、養(yǎng)分傳遞的問題。常見的幾種固定化培養(yǎng)系統(tǒng)：流化床生物反應(yīng)器，填充床生物反應(yīng)器，膜生物反應(yīng)器9 .細胞培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點1)培養(yǎng)細胞是在無菌條件下生長的，不受地區(qū)、季節(jié)和氣候限制；2)占地面積少；3)天然產(chǎn)物的生產(chǎn)在控制的條件下進行，可以得到超越整體植物產(chǎn)量的代謝產(chǎn)物；4)能夠產(chǎn)生原植物所沒有的，甚至是至今在自然界還沒有的化合物。10 .固定化細胞培

29、養(yǎng)的優(yōu)點(1)固相細胞接觸緊密，生長緩慢，細胞擬組織化，有利于次生產(chǎn)物的積累；(2)細胞包埋在聚合物中得到保護，可以減少剪切力的損傷作用；(3)易于把細胞與培養(yǎng)液分開，更有利連續(xù)培養(yǎng)及生物轉(zhuǎn)化過程的實現(xiàn)；(4)高密度的細胞群體，可建立細胞間的物化聯(lián)系，細胞位置的相對固定，有利于物化 梯度的建立，更有利于產(chǎn)物的合成；(5)環(huán)境條件易于控制，次生代謝物易于釋放11 .提高細胞天然產(chǎn)物代謝的新技術(shù)主要有哪四方面？(1)兩步培養(yǎng)技術(shù)；(2)固定化培養(yǎng)技術(shù)；(3)兩相培養(yǎng)技術(shù)；在培養(yǎng)體系中加入脂溶性有機物，或是具有吸附作用的多聚化合 物(如大孔樹脂等)，使培養(yǎng)體系形成上、下兩相，細胞在水相中生長和合成次

30、生 物質(zhì)，次生物質(zhì)分泌出來轉(zhuǎn)到有機相中。(4)加入誘導(dǎo)物、前體物：可引起代謝途徑改變或代謝強度改變的物質(zhì)。無機離子、真菌提取液、葡聚糖等。前體物作用：消除關(guān)鍵酶的阻礙、阻斷內(nèi)源性中間體的分隔和有效貯存， 大大提高次生代謝物的產(chǎn)量。12. 概念：看護培養(yǎng)看護培養(yǎng)是指用一塊活躍生長的愈傷組織來看護單個細胞，使其持續(xù)分裂增殖的一種 培養(yǎng)方法。第五章 植物的原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體的概念原生質(zhì)體培養(yǎng)的優(yōu)越性原生質(zhì)體的分離原生質(zhì)體的培養(yǎng)1、 什么叫原生質(zhì)體？有何特點？原生質(zhì)體指除去細胞壁的細胞，或是說一個被質(zhì)膜包被的裸露球形細胞。原生質(zhì)體的特點： （1）吸收能力增強： （ 2）分泌能力增強；（ 3）具有全能

31、性；（ 4 ）在一定條件下可誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，形成雜合細胞；（ 5）穩(wěn)定性較差。2、 原生質(zhì)體的分離方法有哪些？如何鑒定獲得的原生質(zhì)體？并簡單說明原生質(zhì)體活力的檢測技術(shù)包含哪些？原生質(zhì)體的分離方法有機械法和酶解法。鑒定原生質(zhì)體的方法有低滲脹破法，熒光染色法，兩種方法都是針對有無細胞壁。原生質(zhì)體活力的檢測技術(shù)包括染色法（ FDA 法，伊凡藍法） 、胞質(zhì)環(huán)流法、滲透壓變化法、氧電極法。3、 原生質(zhì)體的發(fā)育主要經(jīng)歷哪些過程？原生質(zhì)體的發(fā)育主要經(jīng)過細胞壁再生、分裂和植株再生三個步驟。4、 原生質(zhì)體的制備: 不同的植物細胞，由于細胞壁的組成、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有所不同，原生質(zhì)體的制備方法也不一樣。材料的準備與消

32、毒，酶解，純化，原生質(zhì)體的活力鑒定原生質(zhì)體的收集和純化方法：沉淀法，漂浮法，沉淀法和漂浮法結(jié)合，界面法。原生質(zhì)體活力檢測方法：1）染色法FDA 法： FDA （二乙酸熒光素）能穿越細胞質(zhì)膜，被活細胞內(nèi)的酯酶裂解，在熒光顯微鏡下發(fā)熒光（熒光素） 。伊凡藍法：伊凡藍不能穿過質(zhì)膜，但質(zhì)膜受到嚴重損壞使細胞被染色。2）胞質(zhì)環(huán)流法：是否存在胞質(zhì)環(huán)流判斷原生質(zhì)體活力；3）滲透壓變化法：活原生質(zhì)體會隨著外界滲透壓的變化體積變化4）氧電極法：活原生質(zhì)體在光照下光合放氧，無光呼吸耗氧影響原生質(zhì)體活力的因素：1 ）分離材料的生理狀態(tài)；2）酶解條件：酶質(zhì)量、濃度、酶解溫度、時間、酶溶液的滲透壓； 3）分離條件：離心

33、次數(shù)、離心速度、純化方法、分離持續(xù)時間； 4）環(huán)境條件：操作環(huán)境的溫度、分離用具的影響。 原生質(zhì)體培養(yǎng)方法： 固體培養(yǎng)；液體淺層培養(yǎng)；固液雙層培養(yǎng)；瓊脂糖珠培養(yǎng) 影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的主要因素： 基因型，原生質(zhì)體的來源，起始培養(yǎng)密度與培養(yǎng)基。植物原生質(zhì)體培養(yǎng)的應(yīng)用：1）利用原生質(zhì)體融合獲得融合細胞2）利用原生質(zhì)體進行外源基因的轉(zhuǎn)化3）利用原生質(zhì)體再生植株4）利用固定化原生質(zhì)體培養(yǎng)生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物較多的分泌產(chǎn)物5）利用原生質(zhì)體進行生物轉(zhuǎn)化：通過原生質(zhì)體中存在的酶或酶系的催化作用，將酶作 用的底物轉(zhuǎn)化為所需的產(chǎn)物，提高轉(zhuǎn)化效率第六章 體細胞雜交細胞融合的概念、意義細胞融合的方法和基本程序融合雜種細胞的

34、選擇與鑒定植物細胞融合和體細胞雜交1、 概念：原生質(zhì)體融合，非對稱融合，電融合法原理，細胞融合，同核體，異核體，對稱融合，非對稱融合原生質(zhì)體融合： 也稱細胞融合、 細胞雜交，是指將不同來源的原生質(zhì)體相融合，并使之分化再生，產(chǎn)生新物種或新品種的技術(shù)。非對稱融合：利用物理化學(xué)方法使融合親本之一的核或細胞質(zhì)失活后再進行融合。電融合法原理： 改變原生質(zhì)體質(zhì)膜表面的電荷和氧化還原電位， 使異種原生質(zhì)體黏合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進而質(zhì)膜開始連接，直到閉合成完整的膜形成融合體。細胞融合（ cell fusion ）概念： 細胞融合是20 世紀 60 年代發(fā)展起來的一項細胞工程技術(shù) 也稱體細胞雜交 、原生質(zhì)體融

35、合 ，是指將 不同來源的原生質(zhì)體相融合并使之分化再生形成新物種或新品種的技術(shù)。同核體基因型相同的細胞融合成的雜交細胞；異核體來自不同基因型的雜交細胞。自發(fā)融合：異種細胞在培養(yǎng)時2 個靠在一起的細胞自發(fā)合并；誘發(fā)融合：異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。對稱融合：即兩個完整的細胞原生質(zhì)體融合。非對稱融合：利用物理或化學(xué)方法使某親本的核或細胞質(zhì)失活后再進行融合。植物細胞融合： 離體條件下用人工的方法把不同的細胞通過無性方式融合成一個雜合細胞的技術(shù)2、細胞融合的意義:1）有性雜交變無性雜交，加快育種速度2）打破遠緣雜交的不親和性3）創(chuàng)造新細胞質(zhì)雜種4）單克隆抗體制備 3、原生質(zhì)體融合的方法和原理，

36、并分析影響原生質(zhì)體融合的可能因素。原生質(zhì)體融合的方法有生物法、化學(xué)法和物理法。生物法一一仙臺病毒法：病毒被膜具有凝聚細胞的能力，兩個細胞在病毒的作用下相互靠近凝聚，誘導(dǎo)細胞融合。化學(xué)法：（1）鹽類融合法：鹽（如NaNO3）能中和原生質(zhì)體表面的電荷，促進原生質(zhì)體聚集，誘導(dǎo)細胞的融合。（2）高Ca2+和高pH值融合：引起原生質(zhì)體表面電荷的紊亂和再 分布，誘導(dǎo)細胞融合。（3）聚乙二醇（PEG）融合法：PEG具有輕微的負極性，能與具有正 極性基團的物質(zhì)形成氫鍵，在原生質(zhì)體之間形成分子橋，使原生質(zhì)體發(fā)生粘連，進而促進原生質(zhì)體融合；PEG能增加類脂膜的流動性，也使原生質(zhì)體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。（4

37、） PEG與高Ca2+、高pH值結(jié)合融合法：PEG使相鄰原生質(zhì)體質(zhì)膜間形成分子橋，高Ca2+和高pH引起原生質(zhì)體表面電荷的紊亂和再分布，誘導(dǎo)細胞融合。物理法電融合法： 改變原生質(zhì)體質(zhì)膜表面的電荷和氧化還原電位，使異種原生質(zhì)體黏合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進而質(zhì)膜開始連接直到閉合成完整的膜形成融合體。影響原生質(zhì)體融合的因素：首先是原生質(zhì)體的質(zhì)量，其次是融合方法，以及其他影響因素，比如 PEG融合法的PEG規(guī)格、純度以及作用時間，電融合法中原 生質(zhì)體密度、交流電壓、交變電場的振幅頻率、交變電場的處理時間、直流高頻電壓、脈沖 寬度、脈沖次數(shù)等。4、簡單闡述植物細胞融合的基本程序。植物細胞融合的基本程序：植

38、物原生質(zhì)體分離，原生質(zhì)體純化，原生質(zhì)體融合，細胞 雜種的選擇，愈傷組織形成、器官分化、植株再生，雜種植物鑒定。體細胞雜交的步驟（以植物細胞為例）1）去除細胞壁以獲得大量的原生質(zhì)體；2）誘導(dǎo)細胞融合形成雜種細胞（細胞相互靠近；形成細胞橋 ：最關(guān)鍵的一步；胞質(zhì)滲透；細胞核融合）3）篩選，培養(yǎng)，促進細胞分裂，分化，4）從細胞團，愈傷組織到最后成株5、體細胞雜種的特點及鑒定方法？體細胞雜種的特點：形態(tài)上的趨中性，變異幅度大，非整倍性，雙親形狀的共顯性，偏親現(xiàn)象。體細胞雜種的鑒定方法有1）形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進行鑒定。2）細胞學(xué)鑒定：細胞器鑒定、染色體鑒定（如核型）。3）生化鑒定：同功酶鑒

39、定。4）分子鑒定：RFLP鑒定、RAPD標記鑒定。6.細胞雜交的應(yīng)用應(yīng)用于：植物育種中的核質(zhì)替換；獲得細胞質(zhì)雜種；遠緣雜交創(chuàng)造新物種；細胞器的 互作研究。第七章 動物細胞工程1. 基本概念原代培養(yǎng)是指將從機體取出的細胞或組織進行實效培養(yǎng)的過程。繼代培養(yǎng)是指將原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。所謂細胞 “一代” ， 即從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。 如某一細胞系為 50 代即該細胞已傳代50 次細胞株：這些存活的細胞一般能夠傳到4050代，這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株細胞的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變細胞系： 細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變， 并且?guī)в邪┳兊奶攸c， 有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去。有限細胞

40、系（ finite cell line ） ：指在連續(xù)傳代培養(yǎng)后，細胞只能在有限的時間存活，最后細胞逐漸死亡。無限細胞系 （infinite cell line） ：也稱為永久細胞系， 理論上可以無限傳代， 但實際上， 每次傳代后細胞有一定變化（例如，發(fā)生染色體丟失） ，多次傳代后必須對細胞再次進行篩選和純化處理多克隆抗體：由多個不同類群的 B 淋巴細胞產(chǎn)生的、針對不同的抗原表位的抗體。單克隆抗體：由單個B 淋巴細胞及其克隆產(chǎn)生的、針對某種抗原表位的特異性抗體。2. 動物細胞工程是以動物細胞培養(yǎng)技術(shù)為主要手段，對動物細胞在離體條件下的細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能進行研究，在此基礎(chǔ)上，采用工程技術(shù)手

41、段對細胞的遺傳或生理特性進行改造，以獲得有價值的細胞產(chǎn)物、器官或個體的生物技術(shù)3. 動物細胞體外培養(yǎng)特性（ 1）細胞生長緩慢； （ 2 ）適應(yīng)環(huán)境能力差；（ 3）培養(yǎng)過程中需氧量少；（ 4）在培養(yǎng)中細胞互相粘連以集群形式存在，培養(yǎng)過程具有群體效應(yīng)、錨地依賴性、功能全能性及接觸抑制性。（ 5）對環(huán)境因素非常敏感；（ 6）原代培養(yǎng)細胞一般繁殖不超過50 代即退化死亡。4. 動物細胞體外培養(yǎng)的生長方式主要有哪些？貼壁生長細胞的生長過程包含哪些階 段？其有何優(yōu)點？體外培養(yǎng)的動物細胞生長方式主要有貼壁依賴型、非貼壁依賴型和兼性貼壁型。貼壁生長細胞的生長過程包括游離期、細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)吸附期

42、、細胞附著于底物上，游離期 結(jié)束潛伏期、細胞有生長活動，而無細胞分裂。對數(shù)生長繁殖期： 細胞數(shù)隨時間變化成倍增長，呈對數(shù)生長狀態(tài)，活力最佳，最適合進行實驗研究。后期呈現(xiàn)接觸抑制，惡性細胞則無接觸抑制現(xiàn)象。癌細胞發(fā)生密度抑制。停止期：細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂退化期：代謝產(chǎn)物積累， PH 下降，細胞中毒受損，大量細胞出現(xiàn)死亡。細胞貼壁生長的優(yōu)點有容易更換培養(yǎng)基、 可采用灌注培養(yǎng)、 方便產(chǎn)物表達、 方便調(diào)節(jié)培 養(yǎng)液和細胞的比例、易于觀察等。5. 細胞為何會貼壁？答：血清中有促使細胞貼壁的冷析球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長基質(zhì)） ，這些帶正電荷的糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮

43、細胞再與吸附有促貼壁因子的附著。而進口塑料培養(yǎng)瓶涂有生長基質(zhì)（化學(xué)合成的功能基團） ，故細胞會貼壁。胰蛋白酶消化液1）胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而使細胞分離。2）胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。3）用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用6. 動物細胞體外培養(yǎng)的要求，基本方法，各有何優(yōu)缺點？細胞體外培養(yǎng)的要求環(huán)境要求：溫度， pH 值，氣體，滲透壓營養(yǎng)要求：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。動物細胞體外培養(yǎng)的基本方法有懸滴培養(yǎng)法、蓋玻片培養(yǎng)法、旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法、 培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法、培養(yǎng)板培養(yǎng)法和灌流小室培養(yǎng)法。懸

44、滴培養(yǎng)法優(yōu)點是便于觀察、培養(yǎng)液用量少，缺點是操作繁雜、空間小、培養(yǎng)環(huán)境難控制。蓋玻片培養(yǎng)法優(yōu)點是便于觀察和染色處理，缺點是表面積小，僅適合短時間培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法優(yōu)點是極大地減小了污染機會、 便于觀察、 換液方便、培養(yǎng)空間大， 缺點是成本較高。旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法優(yōu)點是培養(yǎng)液的均一性好， 有利于細胞生長與物質(zhì)交換， 缺點是培養(yǎng)管球面不利于觀察。培養(yǎng)板培養(yǎng)法優(yōu)點是可進行微量培養(yǎng)、 使培養(yǎng)容積標準化、 可進行組間比較， 缺點是成本較高。灌流小室培養(yǎng)法的優(yōu)點是保持培養(yǎng)液的不斷更新， 有利于細胞生長和物質(zhì)交換， 有利于獲得高濃度的產(chǎn)物，缺點是操作繁瑣，難度較高。7. 動物細胞體外培養(yǎng)所用天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基

45、的營養(yǎng)特點及優(yōu)缺點。天然培養(yǎng)基來自動物的體液或組織液。優(yōu)點： 營養(yǎng)成分豐富， 培養(yǎng)效果好，符合細胞生 長的要求。缺點：成分不穩(wěn)定，來源復(fù)雜、有限，不能做到標準化，易發(fā)生支原體污染。合成培養(yǎng)基根據(jù)動物的體液成分和細胞生長的需要，由各種營養(yǎng)物質(zhì)組合而成。優(yōu)點：能夠標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定， 成本低。 缺點： 不能完全滿足細胞生長和繁殖的需要，因此培養(yǎng)時一般在培養(yǎng)液中加上一定量的血清。8. 動物細胞體外培養(yǎng)技術(shù)有何應(yīng)用？（ 1）在組織學(xué)與胚胎學(xué)研究上的應(yīng)用：研究組織器官的發(fā)生、發(fā)育和分化過程及調(diào)控 機制；研究動物胚胎的發(fā)育過程；應(yīng)用于胚胎的體外操作。（ 2）在細胞學(xué)研究上的應(yīng)用：細胞形態(tài)學(xué)，如

46、細胞核的旋轉(zhuǎn)、細胞膜的運動；細胞生 理學(xué)，如細胞的營養(yǎng)需要、細胞的功能；細胞遺傳學(xué)，如基因轉(zhuǎn)染、細胞融合等。（ 3）在腫瘤學(xué)方面的應(yīng)用：腫瘤細胞生物學(xué)特性研究；腫瘤發(fā)病機制研究；異種、異 體移植研究；腫瘤細胞凋亡與體外誘導(dǎo)分化研究。（ 4）在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用：在病毒學(xué)上的應(yīng)用，如病毒的變異規(guī)律、病毒抗原的制作 及疫苗的生產(chǎn)等；在細菌學(xué)上的應(yīng)用，如組織細胞與病菌的互作、致病機制研究等。（ 5）在免疫學(xué)方面的應(yīng)用：雜交瘤細胞與單克隆抗體制備技術(shù)、抗體形成的機制研究 等。（ 6）在藥理學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：藥物的毒理研究、藥物的細胞代謝動力學(xué)研究等。（ 7）在生物制藥和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用：生物制藥，如抗體、疫苗、激素、干擾素、生 長因子等生物工程產(chǎn)品的制備；現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，如體外受精、試管嬰兒、組織工程技術(shù)等。9. 簡單闡述動物細胞體外培養(yǎng)傳代方法。 傳代操作過程：吸出舊培養(yǎng)液；加入酶解液，消化至細胞間隙變大、胞質(zhì)收縮為止；吸出消化液，用洗液洗；加入培養(yǎng)液，吸管輕輕吹打，制成細胞懸液；重新接種培養(yǎng)。10. 動物的組織或器官解離細胞的方法主要有哪些？ 解離細胞的方法主要有胰蛋白酶解