中醫(yī)試驗研究的思路

1、上海中醫(yī)藥大學(xué)?實驗中醫(yī)學(xué)?教案2課程名稱 實驗中醫(yī)學(xué)理論局部總學(xué)時數(shù)36專業(yè) 中醫(yī)根底和中醫(yī)臨床專業(yè)授課教師 方肇勤內(nèi) 容中醫(yī)實驗研究的思路和規(guī)律一時數(shù) 4本 次 課 目 的 要 求1 .掌握中醫(yī)古典文獻收集的原那么和方法.2 .掌握中醫(yī)實驗研究的思路包括實驗研究的選題,設(shè)計與分析總結(jié)；臨 床實驗研究；動物實驗研究和離體實驗研究.3 .掌握中醫(yī)實驗研究的目的與意義.4 . 了解中醫(yī)古典的特點,常用的中醫(yī)古籍書目,中醫(yī)古典文獻的整理方 法.本 次 課 的 重 點 難 占 八、中醫(yī)古典文獻的收集,整理及其在實驗研究中的應(yīng)用1 .中醫(yī)古典義獻在實驗研究中的重要性.2 .中醫(yī)古典義獻的特點.3 .中

2、醫(yī)古典義獻的收集.4 .中醫(yī)古典義獻的整理與研究.中醫(yī)實驗研究的思路1 .中醫(yī)實驗研究的目的匕意義.2 .中醫(yī)實驗研究的開展.3 .中醫(yī)實驗研究的思路.本 次 課 的 應(yīng) 用 教 具多媒體設(shè)備.第二節(jié) 中醫(yī)實驗研究的思路2學(xué)時本節(jié)撰寫者：趙偉康教授,資深中西醫(yī)結(jié)合研究專家,我校終生教授.長期從事中西 醫(yī)結(jié)合根底研究,作為我校和全國中醫(yī)界的專家,經(jīng)常參加國家到地方中醫(yī)藥科研工程的評 審、評獎、檢查,因而對全國中醫(yī)實驗研究開展的歷程、進展、存在的問題、開展趨勢等有 比擬全面地把握.本節(jié)特點：深入淺出,高屋建領(lǐng),是一篇值得反復(fù)研讀的文章.2.2.1 中醫(yī)實驗研究的目的與意義該節(jié)講了這樣一些問題：首先

3、,第一自然段,講定義,講目的.定義與緒論中的異同介紹,包括具體.目的包 括：1說明中醫(yī)根本理論、證的本質(zhì)、復(fù)方藥理；2促進和提升辨證論治水平和中醫(yī)臨床療效；3實現(xiàn)中醫(yī)現(xiàn)代化,開展中醫(yī)和人類保健事業(yè).如何理解.其次,第二六自然段,介紹實驗,及其在中醫(yī)研究中應(yīng)用的必要性.1介紹了為什么中醫(yī)要引入實驗方法彌補臨床觀察、直覺領(lǐng)悟之缺乏等等.思考：是否由于“中醫(yī)的生命在臨床,便可以不開展實驗研究討論2與當代西醫(yī)相比,中醫(yī)學(xué)的特點,以及開展趨勢.方法是：根據(jù)中醫(yī)藥的特點把生命科學(xué)研究方法與技術(shù)引入中醫(yī)藥領(lǐng)域.中西醫(yī)必須 溝通,中醫(yī)要現(xiàn)代化.中醫(yī)藥的實驗研究是實現(xiàn)這一目標的重要舉措.目的是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和現(xiàn) 代科

4、學(xué)融合、滲透、取長補短.開展自身,且充實和深化西醫(yī).3進一步解釋了中西醫(yī)的共性和個性,全面地看問題、分析問題.注意,有一種傾向,把古代的中醫(yī)與當代的西醫(yī)比,把古代的中醫(yī)與當代的中醫(yī)比. 這樣是否合理討論再次,最后自然段講了中醫(yī)目前的優(yōu)勢,以及實驗研究的切入點和方向.關(guān)于“生物一心理一社會醫(yī)學(xué)模式與中醫(yī)的優(yōu)勢問題討論.關(guān)于綜合一分析一綜合的方法問題討論.關(guān)于研究的切入點選擇的依據(jù)、方法、目的討論.2.2.2中醫(yī)實驗研究的開展該節(jié)簡要介紹了中醫(yī)實驗研究假設(shè)干事例：?靈樞?關(guān)于解剖的記載.?難經(jīng)?對五臟的形狀,重量,容積,長度的詳細描述.唐代陳藏器?本草拾遺?赤銅屑治療折瘍,焊骨的六畜實驗描述.宋?

5、證類本草?白米飼養(yǎng)馬和犬引起腳氣病.還有那些古代實驗記錄同時代的西醫(yī)在干什么課后請大家上網(wǎng)和借閱不同版本的 中醫(yī)和西醫(yī)醫(yī)學(xué)史.1923年陳克恢等在中藥藥理研究中采用動物實驗研究麻黃和當歸.五十年代開始的針灸經(jīng)絡(luò)研究.六十年代開始的中醫(yī)證候動物模型研究,上海邙安坤1963陽虛小鼠證候模型.七十年代后期證候動物模型迅速開展.還有那些代表性的實驗研究2.2.3中醫(yī)實驗研究的思路本節(jié)的論述重點放在思路,與后面比擬具體的介紹要求不一樣.所以,在學(xué)習(xí)上,要 求也不一樣.可能的話,以后可以反復(fù)看幾遍.2.2.3.1 實驗研究的選題、設(shè)計與分析總結(jié)1 .選題“選題應(yīng)結(jié)合社會需要,瞄準國際前沿,充分發(fā)揮中醫(yī)優(yōu)勢

6、,突出創(chuàng)新.這點很重要.社會需要什么,國際前沿在哪,中醫(yī)優(yōu)勢是什么如何了解(討論)如何創(chuàng)新圍繞衰老和延緩衰老討論.目前國際上：限制飲食、激素(性激素、生長激素等)替代療法、專業(yè)人員指導(dǎo)下的 鍛煉,等等.優(yōu)點和缺點.中醫(yī)藥的情況.教材上舉例：(1)臨床選擇西醫(yī)方法較少,而中醫(yī)方法、療效較好的常見病；以及重視繼承開掘老 中醫(yī)的臨床經(jīng)驗.(2)根底找一些與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提法不同的,而中醫(yī)臨床行之有效的,具有創(chuàng)新性和開展 前景的課題進行研究,同時要根據(jù)國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和本單位的中醫(yī)優(yōu)勢和條件從中尋找突破 口.(3)從病證結(jié)合以病帶證或以證帶病著手進行中醫(yī)證和病機的研究是一個重要的突破 口.(4)有的專家認為藏

7、象容易取得成就.(5)復(fù)方研究.(6)中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說.以上13講方向；4-6講具體內(nèi)容.反映了目前中醫(yī)學(xué)術(shù)界的一些共識、方向、熱點.2 .實驗設(shè)計第1自然段提到了：工作假設(shè)；遵循“重復(fù)、對照、隨機等根本科研規(guī)律；密切結(jié) 合中醫(yī)理論和臨床特點等 3個方面.第23自然段講臨床實驗設(shè)計：病證結(jié)合方式,中西醫(yī)診斷和辨證標準,合理的對照 (包括同病無證者、同病同證者、藥物驗證組等).為什么第4自然段講實驗設(shè)計與結(jié)果分析要合理、客觀、中肯.第5自然段講中醫(yī)實驗研究是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和當代高新科技相結(jié)合的過程.要突“拿來主 義,吸收一切先進理論和科技手段.尤其是西醫(yī)學(xué).以下兩個自然段舉例說明.最后,提到了實驗觀察指標

8、要具有代表性、先進性和可行性.各指標間要有內(nèi)在聯(lián) 系.并舉例.3 .實驗結(jié)果的分析與總結(jié)主要介紹：實驗設(shè)計合理；實驗條件、誤差限制；實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理；整理、判斷和 推理；參考國內(nèi)外動態(tài).因之嚴格而周密的科研設(shè)計,可靠的實驗方法和正確的數(shù)據(jù)統(tǒng)計是 獲得正確分析結(jié)果的根本保證.并舉例.2.2.3.2 臨床實驗研究定義：臨床實驗研究以病人為研究對象,通過嚴格的科研設(shè)計,限制條件,對志愿者 進行無損傷性實驗室測試,并對其出現(xiàn)的現(xiàn)象進行觀察、記錄和分析,作出推斷或結(jié)論.局限：難以開展深層次的機理研究.但是在臨床療效評估和理論驗證方面,臨床實驗 是不可缺少的階段.重要性：細致的臨床觀察是中醫(yī)傳統(tǒng)特色,目前

9、還不能為其他方法所取代.對根底實驗研究的奉獻和舉例.(內(nèi)容精彩)2.2.3.3 動物實驗研究定義：動物實驗是用動物來進行生命科學(xué)的實驗研究.意義：可以開展損傷性檢查,是醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)研究不可缺少的手段.限制：動物沒有主訴、動物辨證困難.重點介紹動物模型：1 .以中醫(yī)病因病機為依據(jù)復(fù)制動物模型(1)根據(jù)病因造成的病理模型.這種方法的指導(dǎo)思想是,雖然證的現(xiàn)代病理生理變化 尚不清楚,但可以假定施以同種病因會引起同樣或類似的病理改變.包括六淫的動物模型、 七情的動物模型.(2)根據(jù)中醫(yī)病機造成的模型.各種致病因素作用于人體所引起的疾病發(fā)生開展與變 化的機理稱病機.以中醫(yī)病機為依據(jù)可造成氣虛、血虛、脾虛

10、、血瘀等動物模型.2 .根據(jù)病證結(jié)合,有病必有證,選擇某些西醫(yī)病理模型作為中醫(yī)證的模型3 .根據(jù)證的現(xiàn)代病生機理復(fù)制病理模型.如微循環(huán)障礙是血瘀病理變化的重要標志,故采用高分子右旋糖酊致外周微循環(huán)和腦 微環(huán)障礙的方法復(fù)制高分子右旋糖酊家兔血瘀模型.又如臨床腎陽虛患者有尿17-OHCS排量降低,下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能紊亂的現(xiàn)象.用外源性氫化考的松復(fù)制“陽虛大鼠模型.動物后期可出現(xiàn)一系列耗竭現(xiàn)象,外觀 有類似腎陽虛證候的臨床表現(xiàn)和病理改變,用助陽藥治療后明顯改善.近年來又用皮質(zhì)酮造 成大鼠“腎陽虛模型,觀察到補腎藥右歸飲可使下丘腦室旁核腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)神經(jīng)元與正中隆起 CR

11、H神經(jīng)纖維明顯增加；右歸飲主藥附子的主要成分烏頭堿可 使CRH mRNA表達增加,CRH含量明顯升高.提示腎陽虛證的主要調(diào)節(jié)點定位在下丘 腦,而補腎藥可直接作用于下丘腦.此外,根據(jù)體質(zhì)學(xué)說,匡調(diào)元教授從正常大鼠經(jīng)掌溫測量篩選出自然狀態(tài)下的大鼠“常體、“寒體、“熱體模型.發(fā)現(xiàn)熱體大鼠肝細胞能荷值和Na+-K+-ATP酶活性、血清T3、T4、睪酮、孕酮含量最高,寒體大鼠最低,常體大鼠居中.這對進一步開展體質(zhì) 學(xué)說的實驗研究具有重要意義.八十年代起日本一些學(xué)者從遺傳學(xué)角度復(fù)制證的模型.木村正康曾將糖尿病模型的傳代鼠中低乙酰膽堿(Ach)反響類型與高反響類型同類自行交配,不斷傳至第 14代,兩種 模型

12、分化明顯,其中高 Ach反響型鼠為“虛寒型,低 Ach反響型鼠為“虛熱型.分別 用附子及生地后,可使 Ach反響得到改善.可惜未能得到遺傳學(xué)的認可,因動物需傳代到 二十幾代才有意義.但為病證結(jié)合,同病異證模型的研制方法開闊了思路.獲田善一根據(jù)中醫(yī)“藥證的思路,應(yīng)用遺傳工程技術(shù)研制轉(zhuǎn)基因證的模型,已培育 了八味地黃丸,黃連解毒湯及靈芝等證的模型小鼠,并進行了遺傳藥理學(xué)研究,對小鼠頷下 腺(雄激素和甲狀腺激素的靶器官)激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)進行了分子生物學(xué)測定.可見國外已開始 探索用現(xiàn)代生物技術(shù)復(fù)制證的動物模型.值得我們借鑒和引起重視.綜上所述,目前中醫(yī)動物實驗主要從中醫(yī)病因病機臨床證候表現(xiàn)和證的現(xiàn)代病生機

13、理 入手復(fù)制動物模型,然后用代表方進行治療,以確認造模是否成功,并應(yīng)用該模型進行中醫(yī) 理論及藥物作用機理等研究.理想的動物模型應(yīng)該具有同模擬對象相同的臨床表現(xiàn)和病理變化；并為相應(yīng)的代表方 藥所逆轉(zhuǎn).但由于目前大多數(shù)證的病生機理還不十清楚確,因此一時還難以到達理想要求, 不能苛求.在生命現(xiàn)象上,動物與人有共性的一面,因此可以彼此借鑒.但動物畢竟不是人,因 此其結(jié)果有些不一定與臨床一致.由于中醫(yī)重宏觀,重整體,因此進行動物實驗研究最好能采用多學(xué)科、多途徑、多層 次、多環(huán)節(jié)、多指標同步測試,這樣取得的結(jié)果比擬容易回歸到整體,以彌補微觀與宏觀之 間“脫節(jié)、“斷層現(xiàn)象.八十年代我校曾用組織學(xué)、組織化學(xué)、

14、電鏡、生化、同位素、免疫、遺傳學(xué)等方法研究補腎益精法延緩衰老的機理.根據(jù)中醫(yī)“腎主骨生髓、“髓上通 于腦、“腦為髓海的說法,觀察大腦皮層單胺氧化酶 MAO 、腎上腺素能3受體、 a受體、DA受體和丫 -氨基丁酸GABA受體Rt值；海馬膽堿能系統(tǒng)膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶 ChAT活性和 M受體,以及腦過氧化物歧化酶SOD活性,過氧化脂質(zhì)LPO和脂褐質(zhì)LPF含量；根據(jù)“腎主生殖理論進行腺垂體和睪丸組織學(xué),組織化學(xué)及超微結(jié)構(gòu) 觀察和血漿 T、E2、FSH、LH含量測定；根據(jù)中醫(yī)關(guān)于衰老的“五臟虛損學(xué)說,我們還 觀察了心、肝組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)和SOD、LPO、LPF變化,以及肝核糖核酸酶及其抑制因子RI變化；肺

15、組織環(huán)腺甘酸 cAMP與環(huán)鳥甘酸cGMP;腎上腺和皮膚膠元等的 變化.根據(jù)衰老的“腎精虛衰理論和“冬不藏精,春必病溫的觀點還進行了免疫功能、 細胞因子和外周淋巴細胞DNA修復(fù)水平等的測定.研究對象為24月齡老年大鼠,設(shè)立青年組、老年組、還精煎組和固真方組.進行多學(xué)科、多途徑、多層次、多環(huán)節(jié)、多指標同步 測試.通過動物實驗研究,觀察到老年動物確實存在“五臟虛損的功能的形態(tài)變化.證實 了中醫(yī)關(guān)于衰老的“五臟虛損學(xué)說具有現(xiàn)代的病理生理根底.從補腎益精方藥固真方和還 精煎對垂體、睪丸的作用,可見腎所藏之精確有生殖之精.從上述方藥對腦、心、肝、肺、 皮膚等組織的作用,反映腎所藏之精也含五臟六腑之精.腎是

16、提供五臟精氣的重要源泉.補 腎益精方藥具有整體調(diào)節(jié)作用,能調(diào)節(jié)衰老過程中出現(xiàn)的失衡環(huán)節(jié),以維持陰陽平衡,到達 防病強身,延年益壽目的.這是中藥延緩衰老作用的重要特點.如果我們沒有采用多學(xué)科、 多層次、多環(huán)節(jié)、多指標的方法就很難獲得上述推論.可見在中醫(yī)研究方面增強學(xué)科間協(xié)作 是非常必要的.容易在短期內(nèi)取得成效.2.2.3.4離體實驗離體實驗指在體外進行實驗觀察的方法.包括對各種動物離體器官、離體組織、體外 培養(yǎng)的細胞、細菌、病毒等病原體或癌細胞的實驗等.隨著細胞和分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng) 用,離體實驗已成為實驗室常用的方法.在動物保護呼聲高漲的今天,更具有現(xiàn)實意義.體外實驗有很多優(yōu)越性,例如可以嚴

17、格限制實驗條件,比照性、重復(fù)性、穩(wěn)定性較 好,實驗過程短,大大簡化了分析過程,用藥量少,節(jié)省了試劑和動物飼養(yǎng)開支等等.且所 得結(jié)果較易分析.但用于中藥研究時,應(yīng)充分估計到中藥粗制劑中的雜質(zhì)和理化特性如藥液pH、電解質(zhì)和糅質(zhì)等對實驗結(jié)果的影響.近年來不少單位已開始采用“含藥血清的方法,即給家 兔或大鼠灌服準備試驗的方藥,一定時間后取其血清,加至細胞培養(yǎng)基中進行實驗.這種方 法可以排除中藥 pH、電解質(zhì)等干擾因素的影響,比擬接近藥物體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥理效應(yīng)的 真實過程；還可防止有效成分沒有從胃腸道吸收或經(jīng)體內(nèi)吸收代謝后失活等出現(xiàn)的假象.當 然采用含藥血清作體外實驗也存不少問題,如血清成分本身的復(fù)雜性

18、及其影響,血清標本采 集時間確實定,含藥血清藥物濃度測定等.但可以預(yù)見它將在中醫(yī)藥研究中發(fā)揮積極的作 用.離體實驗對應(yīng)用細胞及分子生物學(xué)技術(shù)研究中醫(yī)藥,建立細胞模型進行復(fù)方研究和藥 物篩選等均具有十分重要的現(xiàn)實意義.但其局限性也不容無視.由于離體的實驗結(jié)果并不代 表它在整體中的存在狀態(tài).從生物個體取其一小局部時,即可改變它的存在狀態(tài),打亂了原 有秩序,割斷了它與機體其他局部千絲萬縷的聯(lián)系,許多體內(nèi)動態(tài)的連系看不到了.因此微 觀研究積累了相當知識后,一定要把它們整合到個體中去探討.從微觀到宏觀任何層次的現(xiàn) 象,如果不與整個個體的生命活動結(jié)合,就難于透徹地了解其在整體中的含意,不易發(fā)現(xiàn)各 種反響過

19、程間的復(fù)雜微妙的相互關(guān)系.2.2.3問題、對策與展望四十年來通過中醫(yī)實驗研究局部說明了證的病生機理；扶正固本、通里攻下、清熱解 毒、活血化瘀等治那么治法的作用機理；針灸原理；推動了脈診、舌診、腹診客觀化；提升了 中醫(yī)臨床療效,取得了重大成就.當前存在的主要問題是創(chuàng)新缺乏,思路不夠活潑.選題大 多仍以一方一藥的研究為主.對深入研究出現(xiàn)一定難度,例如許多實驗已經(jīng)說明中藥有多層 次、多系統(tǒng)、多環(huán)節(jié)的雙相調(diào)節(jié)作用；大多數(shù)研究結(jié)果認為復(fù)方比單味有效,為什么是中 藥多成分多靶點作用,還是其他作用在這些方面提出的思路不夠活潑.在動物模型方面, 對模型的證與病之間,同一證候各種不同模型之間,以及不同證候的模型之間缺乏橫向比 較,同時對現(xiàn)有模型的生物學(xué)特性還比擬模糊.有人提出建立病證結(jié)合模型比擬符合臨床實際,但在這方面除了溫病衛(wèi)氣營血模型以外,成功的經(jīng)驗還不多見.如何將分析所得的實驗 結(jié)果回歸到整體層次上來,也是當前實驗研究中應(yīng)該引起注意的問題.為了充分發(fā)揮實驗研究在中醫(yī)現(xiàn)代化中的作用,研究人員必須在中醫(yī)