臨床基因擴(kuò)增實驗室建設(shè)方案

1、臨床基因擴(kuò)增實驗室建設(shè)方案1、概述臨床基因擴(kuò)增實驗又稱PCR實驗,是專門用來檢驗新型冠狀病毒、艾滋病、乙型肝炎、人乳頭狀瘤病毒等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測岀的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點(diǎn),因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的疾病診斷。 新型冠狀病毒（2019-nCoV）是人類分離的第七類冠狀病毒。該病毒屬于屬，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，常為多形性，直徑60-140nm。其基因特征與SARS-CoV

2、 和MERS-CoV 有明顯區(qū)別。目前研究顯示與蝙蝠SARS 樣冠狀病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性達(dá)85%以上。病毒對紫外線和熱敏感，56 度30分鐘、乙醚、75%乙醇、含氯消毒劑、過氧乙酸和氯仿等脂溶劑均可有效滅活病毒。基于目前的流行病學(xué)調(diào)查和研究結(jié)果，新型冠狀病毒潛伏期為1-14 天，多為3-7 天；傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者，無癥狀感染者也可能成為傳染源；主要傳播途徑為經(jīng)呼吸道飛沫和接觸傳播，在相對封閉的環(huán)境中長時間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在經(jīng)氣溶膠傳播的可能，其他傳播途徑待明確；人群普遍易感。2020 年01 月20 日國家衛(wèi)健委公告：將新型冠狀病毒感染的肺炎納入

3、中華人民共和國傳染病防治法規(guī)定的乙類傳染病，并采取甲類傳染病的預(yù)防、控制措施。并納入中華人民共和國國境衛(wèi)生檢疫法規(guī)定的檢疫傳染病管理。實驗活動暫按第二類病原微生物進(jìn)行管理。因此，開展新冠病毒核酸檢測需要在法律條規(guī)、人員環(huán)境、生物安全與防護(hù)以及質(zhì)量控制等方面滿足并符合國家相關(guān)技術(shù)規(guī)范要求。因此對新型冠狀病毒檢測需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的建設(shè)越來越得到重視,因為它對檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本方案主要從臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的平面布局,空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制和污染的防制幾個方面對實驗室設(shè)計中的主要特點(diǎn)

4、進(jìn)行了闡述。臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進(jìn)行的。下面就對這幾個方面分別進(jìn)說明。2、PCR實驗室平面布局臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室原則上分為四個單獨(dú)的工作區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，同時為了符合新冠實驗檢測需要增加獨(dú)立衣帽間方便更換防護(hù)裝備。為避免交叉污染,進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能在衣帽間更換防護(hù)服后從試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)基因擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。3、實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制P

5、CR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。4、實驗室建設(shè)及設(shè)備4.1實驗室分區(qū)功能分區(qū)名稱實驗室功能實驗室專業(yè)要求衣帽間存儲防護(hù)物質(zhì)和實驗前更換防護(hù)服無特殊要求試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求樣本制備區(qū)核酸（RNA、DNA）提取、貯存及制備工作應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求擴(kuò)增區(qū)cDNA合成、DNA擴(kuò)增應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)

6、和操作規(guī)范的要求產(chǎn)物分析區(qū)基因擴(kuò)增產(chǎn)物分析應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求4.2、實驗室設(shè)計要求（僅供參考）實驗室名稱使用面積（）通風(fēng)要求噪聲（dB）溫濕度相對外界大氣壓（Pa）不間斷電源大型落地設(shè)備平均照度（lx）衣帽間10試劑準(zhǔn)備區(qū)2012次/h601827 30%70%緩沖間10主實驗室5有300樣本制備區(qū)3012次/h601827 30%70%緩沖間5主實驗室-5有300擴(kuò)增區(qū)2012次/h601827 30%70%緩沖間5主實驗室-10有（熒光PCR儀）有300產(chǎn)物分析區(qū)3012次/h6018±250%±20%緩沖間5主實驗室-15有（雜

7、交儀）有3004.3實驗室設(shè)備要求序號 設(shè)備名稱 型號配備數(shù)量 備注 1 空氣消毒機(jī) 4臺需保證標(biāo)本制備區(qū)1臺； 有條件PCR每個分區(qū) 各1臺 2 移動式紫外燈 4臺 需保證四個分區(qū)各1臺有條件每個緩沖間各1臺3超凈工作臺1臺試劑準(zhǔn)備區(qū)4微型離心機(jī)3臺需保證試劑準(zhǔn)備區(qū)1臺，擴(kuò)增區(qū)1臺，擴(kuò)增區(qū)1臺5振蕩器可調(diào)速3臺需保證試劑準(zhǔn)備區(qū)1臺，標(biāo)本制備區(qū)1臺，標(biāo)本制備區(qū)生物安全柜里使用1臺6生物安全柜1.5米全排雙人，A2、B2均可2臺標(biāo)本制備區(qū)，有條件可根據(jù)提取通量及檢測量增加（至少1臺）7全自動核酸提取儀1臺標(biāo)本制備區(qū)，有條件可根據(jù)提取通量及檢測量增加8 高速離心機(jī)2臺標(biāo)本制備區(qū)，需要保證標(biāo)本制備區(qū)

8、生物安全柜里使用1臺（建議采購Eppendorf品牌）9醫(yī)用冰箱4臺試劑準(zhǔn)備區(qū)1臺，標(biāo)本制備區(qū)2臺（其中1臺帶鎖），產(chǎn)物分析區(qū)1臺 需具備-20度以下10多通道熒光儀96孔 4通道（具備CY5通道）1臺擴(kuò)增區(qū)1臺，有條件可根據(jù)提取通量及檢測量增加11移液器 100-1000ul 20-200ul 2-10ul 3套 試劑準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)及產(chǎn)物分析區(qū)有條件可根據(jù)樣本數(shù)選用八通道排槍 12恒溫水浴箱 2臺保證標(biāo)本制備區(qū)1臺（病毒滅活處理，可使用恒溫箱代替），產(chǎn)物分析區(qū)1臺13自動手消器 3個標(biāo)本制備間2個，標(biāo)本制備間緩沖間1個14醫(yī)廢垃圾桶 12個4分區(qū)及其緩沖間各1個，而新冠檢測還需要保證標(biāo)本

9、制備區(qū)及其緩沖間多配1個，以區(qū)分高壓及未高壓的醫(yī)廢垃圾15高壓滅菌鍋 2臺自動，無需人工排氣式；建議保證標(biāo)本制備區(qū)1臺16抽濕機(jī)（選用）1臺根據(jù)實際實驗室環(huán)境選用17耗材無RNA酶適量吸頭（帶濾芯）/八連管/EP18移液器10ul/50ul/200ul/1000ul2/1/4/5根據(jù)標(biāo)本量可以對部分量程數(shù)量增加5、實驗室人員資質(zhì)及配置經(jīng)省（市）臨檢中心基因檢測技術(shù)培訓(xùn)合格（持崗位合格證）；經(jīng)過省（市）疾控或其他相關(guān)部門的生物安全培訓(xùn)（培訓(xùn)合格）和具備相應(yīng)的實驗技能；經(jīng)PCR實驗室內(nèi)部的生物安全與操作規(guī)范培訓(xùn)與考核合格。（要求具備PCR上崗證）：高級職稱1人以上、中級職稱2人以上、初級職稱要求4人以上，標(biāo)本接收員1人以上。6、實驗室防護(hù)物質(zhì)要求