郁金散半仿生提取物對(duì)急、慢性腸炎的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

1、郁金散半仿生提取物對(duì)急、慢性腸炎的保護(hù)作用及其機(jī)制研究郁金散是中(獸)醫(yī)臨床常用經(jīng)典方藥,主治急慢性腸炎、腹瀉、傳染性發(fā)熱、肺炎、肝炎等,療效顯著,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抗炎、抗菌及解熱鎮(zhèn)痛的作用,但對(duì)其治療腸炎作用的確切機(jī)制尚無深入研究。本研究采用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選郁金散半仿生提取的最佳工藝條件,對(duì)郁金散半仿生提取物(Semi-bionicExtractionofCompoundTurmeric,SET)、醇提物(AlcoholExtraction,AE)及水提物(WaterExtraction,WE)進(jìn)行平行對(duì)照實(shí)驗(yàn),用化學(xué)指標(biāo)結(jié)合藥效學(xué)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià),確定郁金散的最佳提取方法。研究SET的急

2、性毒性、解熱和抗炎鎮(zhèn)痛作用,并采用葡聚糖硫酸鈉(DextranSulfateSodium,DSS)誘導(dǎo)建立大鼠急性腸炎(AcuteEnteritis,AE)及慢性腸炎(ChronicEnteritis,CE)模型，觀察SETM急、慢性腸炎的7B療作用及其機(jī)制,為中藥郁金散的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù),主要研究結(jié)果如下:1、采用均勻設(shè)計(jì)法研究郁金散的半仿生提取工藝,以黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、姜黃素、芍藥苷和梔子苷含量為指標(biāo),并對(duì)提取物總黃酮、總生物堿、總蒽醌進(jìn)行檢測,綜合評(píng)判工藝參數(shù),優(yōu)選出郁金散半仿生提取的最佳條件,結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際,確定其工藝參數(shù)為:3煎用水pH依次為:2.0,7.0和9.0;提

3、取時(shí)間依次為：2,1.5和1.5h。此方法可控性強(qiáng)、操作簡單、穩(wěn)定性較好。2、以干浸膏得率、總蒽醌、總黃酮、總生物堿為化學(xué)指標(biāo),以抗炎效應(yīng)(小鼠耳殼腫脹試驗(yàn))和抗菌效應(yīng)(體外大腸桿菌、綠膿桿菌、金葡萄球菌及白色念珠菌抑菌試驗(yàn))為藥效學(xué)指標(biāo)，對(duì)SETAE及WES行平行又1照實(shí)驗(yàn)，比較郁金散不同方法提取物的作用效果。結(jié)果表明三種不同方法的提取液的作用效力順序?yàn)?SET>AE>WE,表明用化學(xué)指標(biāo)結(jié)合藥效學(xué)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，優(yōu)選出的郁金散半仿生工藝可行,且提半仿生取法優(yōu)于傳統(tǒng)的水提及醇提法。3、SET對(duì)小鼠經(jīng)口給藥LD50為4.20g/kg,置信系數(shù)a=0.05時(shí)的置信區(qū)間為

4、3.63g/kg<LD5(K4.56g/kg;SET對(duì)二甲苯致小鼠耳月中脹試驗(yàn)及角叉菜膠致小鼠足跖腫脹急性炎癥反應(yīng)具有明顯抑制作用,對(duì)干酵母及對(duì)2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱具有一定的解熱作用,且呈現(xiàn)量效關(guān)系;對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)及熱刺激致小鼠痛反應(yīng)試SET具有一定的鎮(zhèn)痛作用。4、DSSB導(dǎo)建立大鼠AE模型，動(dòng)態(tài)監(jiān)測模型大鼠消化功能和組織形態(tài)的變化，結(jié)果顯示SET干預(yù)后大鼠體重及24小時(shí)攝食量均有所恢復(fù)；SET可顯著降低DAI值及結(jié)腸W/D比值，提示SET可改善模型大鼠消化功能，減輕腸道水月中；血清促炎及抗炎因子檢測結(jié)果顯示SET干預(yù)后模型大鼠血清TNF-a、IL-6、IL-1B、IL-

5、8含量降低，IL-10含量升高，結(jié)腸組織MDAMPOt量降低,DAQGSH-Pxt量升高；給藥后第7d,模型大鼠CMDI及HPS分明顯高于正常對(duì)照組，經(jīng)SET干預(yù)后，各組CMD吸HPS分值均有不同程度的減小;組織病理學(xué)觀察顯示模型大鼠結(jié)腸隱窩和上皮結(jié)構(gòu)消失,腺體多數(shù)不完整,炎癥細(xì)胞廣泛浸潤,水腫和出血明顯,SET高劑量組大鼠結(jié)腸組織炎性細(xì)胞的浸潤明顯減少,水腫和充血明顯減輕,SET低劑量組大鼠結(jié)腸組織依然有大量的炎性細(xì)胞浸潤和出血點(diǎn)，但比模型組有輕微的好轉(zhuǎn)；RT-PCR檢測結(jié)果顯示,SET干預(yù)后模型大鼠NF-kB-p65mRNAiICAM-1mRNA量降低;Westernbloting分析顯示

6、,SET干預(yù)后模型大鼠結(jié)腸組織NFkB-p65及ICAM-1表達(dá)降低。提示SET可作為急性腸炎的有效治療物質(zhì)。5、DSSB導(dǎo)建立大鼠CE模型，研究SETMCE模型大鼠的治療作用，結(jié)果顯示,SET干預(yù)后模型大鼠體重及24小時(shí)攝食量明顯增加，模型大鼠DAI值及結(jié)腸W/D比值明顯降低；采用擴(kuò)張球囊對(duì)CE大鼠進(jìn)行結(jié)直腸刺激，結(jié)果顯示SET干預(yù)后在第21d、31d、41d及51d,SET高劑量組大鼠腹部撤回反射(AbdominalwithDrawalReflex,AWR)評(píng)分明顯降低,第42d及51d,SET低劑量組大鼠AWFfi明顯降低，結(jié)果提示SET可緩解DSS弓I起的CE大鼠內(nèi)臟痛敏；SET干預(yù)后模型大鼠血