制劑長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

1、北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述長期毒性研究可為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑（以下簡稱“制劑”）的研發(fā) 提供重要的安全性參考信息，是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容。通過長期毒性研究，可預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、量毒關(guān)系和時毒關(guān)系、可逆性等；判斷受試 物長期給藥的毒性靶器官或靶組織；推測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍； 提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標(biāo)；提供臨床試驗中解毒或解救措施的參考。本指導(dǎo)原則適用于中藥制劑、化學(xué)制劑的長期毒性試驗研究。二、一般要求長期毒性研究應(yīng)遵守藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范，遵循毒理學(xué)研究中隨機(jī)、 對照、重復(fù)的基本原則進(jìn)行試驗設(shè)計

2、和開展研 究工作。研究機(jī)構(gòu)必須具有法人資格，具備從事藥物安全性評價的相關(guān) 設(shè)備、設(shè)施及資質(zhì)，必須取得相應(yīng)實驗動物使用許可證，具有與所 使用的實驗動物級別相符的實驗環(huán)境。試驗項目負(fù)責(zé)人必須獲得相關(guān)專業(yè)領(lǐng)域副高級以上職稱（含副高），所有參加研究的人員必須經(jīng)過相關(guān)專業(yè)的業(yè)務(wù)培訓(xùn)。三、基本內(nèi)容制劑的開發(fā)背景和研究基礎(chǔ)各不相同，在長期毒性研究立題之前應(yīng)進(jìn)行文獻(xiàn)查閱，根據(jù)申報品種的立題依據(jù)、臨床意義、處方來源、使用歷史、有效性與安全性等背景資料進(jìn)行綜合考慮。（一）試驗項目的選擇1. 制劑注冊申請（ 1 ）中藥制劑若滿足以下全部條件，可免于進(jìn)行長期毒性試驗：根據(jù)中醫(yī)藥理論組方；處方中的藥味用量不超過法定藥品

3、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；處方組成中不含有法定標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)識有毒性及現(xiàn)代毒理學(xué)證明有毒性的藥材（毒性藥材是指歷版中國藥典，部頒標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)口藥材標(biāo)準(zhǔn)，省、自治區(qū)、直轄市的中藥材標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)注為大毒/劇毒和有毒的藥材，如制附子、制川烏、制草烏等）；處方組成不含有十八反、十九畏配伍禁忌；利用傳統(tǒng)工藝配制（即制劑配制過程沒有使原組方中治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生變化的）；急性毒性試驗（采用最大給藥容量、最大給藥濃度）未見明顯毒性反應(yīng)；臨床實際用藥周期為1 周以內(nèi)。實際用藥周期超過1 周者， 如符合上述條件，且該處方在本醫(yī)療機(jī)構(gòu)具有5 年以上 （含 5 年） 使用歷史、能提供可靠的臨床安全性資料，亦可免于進(jìn)行長期毒性試驗。（ 2） 申

4、請配制的化學(xué)制劑屬已有同品種獲得制劑批準(zhǔn)文號的，可免于進(jìn)行長期毒性試驗。（ 3 ）本醫(yī)療機(jī)構(gòu)已有品種的改劑型品種，如果配制工藝無質(zhì)的改變且臨床用量、給藥途徑相同，可以免報長期毒性研究資料（緩釋、控釋制劑除外）。否則，應(yīng)按臨床擬用途徑比較改變前后的長期毒性反應(yīng)。（ 4 ）化學(xué)制劑注射劑品種，參照新藥的注射劑相關(guān)研究技術(shù)要求進(jìn)行試驗研究，提供申報資料及文獻(xiàn)資料。（ . 制劑補(bǔ)充申請（ 1 ）增加中藥制劑的功能主治（需延長用藥周期或者增加劑量者） 、增加化學(xué)制劑的適應(yīng)癥，應(yīng)當(dāng)提供長期毒性試驗資料及文獻(xiàn)資料。（ 2 ）變更制劑使用劑量，應(yīng)當(dāng)提供長期毒性試驗資料或文獻(xiàn)資料。（ 3 ）變更制劑規(guī)格，此類變

5、更若引起藥用物質(zhì)基礎(chǔ)的明顯改變，或?qū)χ苿┑奈?、利用可能產(chǎn)生明顯影響，根據(jù)需要提供長期毒性試驗資料或文獻(xiàn)資料。（ 4 ）變更制劑的輔料，此類變更若對藥用物質(zhì)基礎(chǔ)或?qū)χ苿┑奈铡?利用有影響，根據(jù)需要提供長期毒性試驗資料或文獻(xiàn)資料。（ 5 ）變更制劑的配制工藝，如果其配制工藝的改變已改變藥用物質(zhì)基礎(chǔ)的，應(yīng)當(dāng)按臨床擬用途徑比較改變前后的長期毒性反應(yīng)。（ 6 ）替代或減去制劑標(biāo)準(zhǔn)處方中的毒性藥材或處于瀕危狀態(tài)藥材， 若替代藥材為毒性藥材，或者被替代的藥材在處方中處于主要地位的，應(yīng)按臨床擬用途徑比較改變前后的長期毒性反應(yīng)。（ 7 ）補(bǔ)充完善制劑說明書安全性內(nèi)容，需提供長期毒性試驗資料或文獻(xiàn)資料。（二）

6、受試物中藥制劑：受試物應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后所制備的中試或中試以上規(guī)模樣品，注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并提供樣品的檢驗報告。如因給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn)行試驗。由于中藥的特殊性，建議臨用現(xiàn)配?；瘜W(xué)制劑：受試物應(yīng)采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映臨床試驗擬用樣品和/或配制樣品質(zhì)量和安全性的中試或中試以上規(guī)模樣品，注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并提供樣品的檢驗報告。（三）實驗動物一般應(yīng)選擇健康、成年的動物，雌性動物須未孕。體重差異應(yīng)在平均體重的20% 之內(nèi)。動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求

7、（清潔級或SPF 級），并具有實驗動物質(zhì)量合格證。1. 種屬通常先進(jìn)行一種動物（嚙齒類）的長期毒性試驗。當(dāng)發(fā)現(xiàn)明顯毒性時，為進(jìn)一步研究毒性情況，再采用第二種動物（非嚙齒類）進(jìn)行研究。中藥制劑處方中含有歷版中國藥典，部頒標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)口藥材標(biāo)準(zhǔn)，省、自治區(qū)、直轄市的中藥材標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)注為大毒/劇毒的藥材，或有十八反、十九畏等配伍禁忌時，則應(yīng)進(jìn)行兩種動物（嚙齒類和非嚙齒類）的長期毒性試驗。2. 性別通常采用兩種性別的動物進(jìn)行試驗，雌雄各半。若采用單性別動物進(jìn)行試驗，應(yīng)闡明其合理性。3. 年齡根據(jù)研究期限的長短和受試物的使用人群范圍確定動物的年齡。一般情況下，大鼠為 69周齡；Beagle犬為612月齡。原則

8、上，動物應(yīng)雌雄各半。當(dāng)臨床擬用于單性別時，可采用相應(yīng)性別的動物。4. 體重動物初始給藥時體重不應(yīng)超過或低于平均體重的20% 。5. 動物數(shù)每組動物的數(shù)量應(yīng)滿足試驗結(jié)果分析和評價的需要。一般大鼠可為雌、雄各1030只，犬可為雌、雄各 36只。（四）給藥方案1. 給藥劑量長期毒性研究至少應(yīng)設(shè)3個給藥劑量組以及1 個溶媒（或輔料）對照組，必要時設(shè)立空白對照組和/或陽性對照組。高劑量原則上應(yīng)使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，低劑量原則上高于動物藥效學(xué)試驗的等效劑量、并不使動物出現(xiàn)毒性反應(yīng)，在高劑量和低劑量之間設(shè)立中劑量，以考察毒性反應(yīng)劑量-反應(yīng)關(guān)系。2. 給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑一致，如不一致則應(yīng)提供相關(guān)研究

9、資料或充分說明理由。3. 給藥頻率原則上應(yīng)每天對試驗動物進(jìn)行給藥，給藥期限長（3個月或以上）的制劑每周至少應(yīng)給藥6天。4. 給藥期限原則上臨床單次用藥，需進(jìn)行2周長期毒性試驗；臨床用藥不超過2周者，需進(jìn)行1 個月長期毒性試驗；臨床用藥超過2周者，試驗周期應(yīng)為臨床療程的34倍。采用嚙齒類進(jìn)行試驗的一般最長不超過6個月，非嚙齒類不超過9個月。（五）檢測指標(biāo)和檢測時間5. 前，對動物進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)。 嚙齒類動物至少應(yīng)進(jìn)行 35天的適應(yīng)性觀察，非嚙齒類動物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察2周。給藥期間，對動物進(jìn)行外觀體征、行為活動、攝食量、體重、腺體分泌、呼吸、糞便性狀、給藥局部反應(yīng)、血液學(xué)指標(biāo)、血液生 化學(xué)指標(biāo)等的觀

10、測。非嚙齒類動物還應(yīng)進(jìn)行體溫、眼科檢查、心電 圖、尿液分析，根據(jù)試驗周期的長短和受試物的特點確定檢測時間 和檢測次數(shù)。大鼠體重應(yīng)雌雄分開進(jìn)行計算。長期毒性研究除必須的檢測指標(biāo)（參見附錄）外，還應(yīng)根據(jù)受 試物的特點、在其他試驗中已觀察到的莫些改變或其他的相關(guān)信息 （如處方中組成成分有關(guān)于毒性的文獻(xiàn)報道），增加相應(yīng)的觀察和檢測指標(biāo)。在試驗結(jié)束時應(yīng)進(jìn)行一次全面檢測。 當(dāng)給藥期限較長時， 應(yīng)根 據(jù)受試物的特點選擇合適的時間進(jìn)行中期階段性的檢測；試驗期間對瀕死或死亡動物應(yīng)及時取到標(biāo)本進(jìn)行觀察和組織學(xué)檢查，分析瀕死或死亡的原因；恢復(fù)期結(jié)束時應(yīng)進(jìn)行一次全面的檢測。給藥結(jié)束，對動物（除恢復(fù)期觀察動物） 進(jìn)行全

11、面的大體解剖， 稱重主要臟器并計算臟器系數(shù)；進(jìn)行組織病理學(xué)檢查并由具病理學(xué)檢查報告，應(yīng)附有相應(yīng)的組織病理學(xué)照片。對照組動物、高劑量組 動物以及尸檢異常動物應(yīng)詳細(xì)檢查。若高劑量組動物更一組織發(fā)生病理改變，應(yīng)對其它劑量組動物的相同組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。通常需要制備骨髓涂片， 以便當(dāng)受試物可能對造血系統(tǒng)有影響時進(jìn) 一步進(jìn)行骨髓的檢查。在給藥結(jié)束后對部分動物進(jìn)行恢復(fù)期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能由現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。四、結(jié)果分析和評價分析長期毒性研究結(jié)果可判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)，最終可判斷人體可能由現(xiàn)的毒性反應(yīng)。只有通過研究結(jié)果的科學(xué)分析和評價才能夠清楚描述動物的毒性反應(yīng)，并推斷其與人體的

12、相關(guān)性。通過分析長期毒性研究結(jié)果的毒性起始時間、程度、持續(xù)時間、 可逆性等和靶器官等，確定安全范圍，并探討可能的毒性作用機(jī)制。在分析長期毒性研究結(jié)果時應(yīng)綜合考慮數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)意義和 生物學(xué)意義，正確利用統(tǒng)計學(xué)假設(shè)檢驗有助于確定試驗結(jié)果的生物 學(xué)意義，需要注意的是具有統(tǒng)計學(xué)意義并不一定代表具有生物學(xué)意 義。在對長期毒性研究結(jié)果進(jìn)行分析時，應(yīng)對異常數(shù)據(jù)進(jìn)行合理的解釋。由于動物和人體的實際差異， 動物長期毒性研究的結(jié)果一般不 會完全再現(xiàn)于人體臨床試驗。 但如果沒有試驗或文獻(xiàn)依據(jù)證明受試 物對動物的毒性反應(yīng)與人體無關(guān)，在進(jìn)行制劑評價時必須首先假設(shè) 人最為敏感，長期毒性研究中動物的毒性反應(yīng)將會在臨床試驗中

13、再 現(xiàn)?？傊趯﹂L期毒性研究結(jié)果進(jìn)行評價時，應(yīng)結(jié)合受試物的藥學(xué)特點、藥效學(xué)和其他毒理學(xué)研究的結(jié)果以及已取得的臨床研究的 結(jié)果，進(jìn)行綜合評價?！靖戒洝块L期毒性試驗中必須檢測的指標(biāo)1、血液學(xué)指標(biāo)紅細(xì)胞計數(shù)血紅蛋白紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞血紅蛋白平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù)及其分類血小板計數(shù)凝血酶原時間2、血液生化學(xué)指標(biāo)天門冬氨酸匆基轉(zhuǎn)換酶丙氨酸匆基轉(zhuǎn)換酶堿性磷酸酶硼酸磷酸激酶尿素氮酬W總蛋白白蛋白血糖總膽紅素總膽固醇油三醋-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（非嚙齒類動物）鉀離子濃度氯離子濃度鈉離子濃度3、尿液分析指標(biāo)非嚙齒類動物尿液分析指標(biāo)尿液外觀比重pH值尿糖尿蛋白尿膽紅素尿膽原酮體潛血白細(xì)胞4、組織病理學(xué)檢查指標(biāo)長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官腦心臟肝臟肺臟腎臟腎上腺胸腺脾臟睪丸附睪子宮卵巢長期毒性試驗中需進(jìn)行組織病理學(xué)檢查的臟器、組織腦（大腦、小腦、腦干）脊髓（頸、胸、腰段）垂體胸腺甲狀腺甲狀旁腺食管唾液腺胃小腸和大腸肝臟膽鑒腎臟腎上腺脾臟胰腺氣管肺主動脈心臟附睪睪丸卵巢子宮