HPLC法測定阿莫西林雙氯西林鈉膠囊含量

1、HPLC法測定阿莫西林雙氯西林鈉膠囊含量                         【摘要】  目的 建立阿莫西林雙氯西林鈉膠囊中阿莫西林和雙氯西林鈉的含量測定方法。方法 采用Shimadzu VPODS色譜柱，流動相為0.008 mol/L十二烷基硫酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)至pH4.5）甲醇（體積比6832）,檢測波長225 nm。 結(jié)果 阿莫西林

2、和雙氯西林在該色譜條件下均有合適的保留,測定可在10 min內(nèi)完成。阿莫西林在0.00501.0000 mg/mL，雙氯西林在0.00250.5036 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。阿莫西林和雙氯西林鈉平均回收率（n=9）分別為99.4（RSD=1.0%）和99.1（RSD=0.97）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好、靈敏度高, 可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】  阿莫西林雙氯西林鈉膠囊 高效液相色譜法 阿莫西林 雙氯西林Abstract:Objective To establish an HPLC method for simultaneously assay

3、ing of amoxicillin and dicloxacillin in capsules.Methods The separation was performed on a Shimadzu VPODS column. The mobile phase was 0.008 mol/L sodium lauryl sulpate (adjusted with phosphoric acid to pH4.5) methanol(6832). The detection wavelength was 230 nm. Results  Amoxicillin and dicloxa

4、cillin had suitable retention time, which could be separated within 10 min. The standard curves of amoxicillin and dicloxacillin were all linear over the concentrations of 0.00501.0000 mg/mL (r=0.9999,n=7) and 0.0025-0.5036 mg/mL (r=0.999 9,n=7), respectively. The average recoveries of amoxicillin a

5、nd diclxacillin were 99.4% （RSD 1.0%）and 99.1%（RSD 0.97）, respectively.  Conclusion This method is simple, sensitive, accurate and reproducible, which can be used for the quality of amoxicillindicloxacillin capsule.Key words:amoxicillin; dicloxacillin; HPLC 阿莫西林、雙氯西林屬內(nèi)酰胺類抗生素，阿莫西林對需氧革蘭氏陽性菌及

6、部分革蘭氏陰性菌具抗菌活性，雙氯西林具耐酸、耐酶等特點(diǎn)，對葡萄球菌和革蘭陽性菌具抗菌活性。研究表明，阿莫西林雙氯西林對常見的病原菌具良好抗菌作用,對傷寒沙門菌也具有良好抗菌作用,可作為治療呼吸道感染、單純性皮膚軟組織感染和傷寒等的首選藥物之一1。該品種目前在中國藥典、美國藥典、日抗基和英國藥典均未收載。文獻(xiàn)2-4采用HPLC法同時測定阿莫西林、雙氯西林的含量，以磷酸鹽緩沖液和乙腈為流動相。但是阿莫西林和雙氯西林的極性相差較大，兩者的保留時間相差較大，在該色譜條件下為了保證雙氯西林有適宜的保留時間，阿莫西林往往在溶劑峰左右出峰，幾乎沒有保留。本文經(jīng)優(yōu)化色譜條件，改用離子對試劑和甲醇為流動相的RP

7、HPLC法，使兩者均具有適宜的色譜保留時間，可用于阿莫西林和雙氯西林制劑的含量測定。1  儀器和試藥    Agilent 1100高效液相色譜儀，Sartorius BP211D萬分之一電子天平。    甲醇（色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司出品，批號：051221101）；十二烷基硫酸鈉（廣州市醫(yī)藥公司進(jìn)口分裝，批號：980503）；阿莫西林對照品（中國藥品生物制品檢定，批號：130409200208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：86.2%）；雙氯西林對照品（Bright  Future  Pharm.Fty, 批

8、號：B4520042，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：91.4%）；阿莫西林雙氯西林鈉膠囊（香港澳美制藥廠提供，規(guī)格：0.375 g）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。2  方法與結(jié)果2.1  色譜條件    色譜柱：Shimadzu VPODS（ 250 mm×4.6 mm）；流動相：0.008 mol/L十二烷基硫酸鈉（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5）甲醇（體積比6832）；流速1 mL/min；檢測波長 225 nm；進(jìn)樣量20 L。色譜圖見圖1。A 空白品   B 對照品  C 樣品  1.雙氯西林  2.阿莫西林圖1

9、  雙氯西林和阿莫西林的HPLC色譜圖（略）Fig.1  HPLC chromatograms of amoxicillin and dicloxacillin2.2  溶液的制備2.2 .2  供試品溶液的配制       取供試品20粒，除去囊殼，均勻研細(xì)并混合，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿莫西林200 mg,雙氯西林100 mg）,置200 mL容量瓶中，加0.02 mol/L磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置20 mL容量瓶中，加0.02 mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，

10、用0.45   m濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3  專屬性考察    取阿莫西林雙氯西林鈉膠囊內(nèi)容物，分別用藥物光照試驗(yàn)儀強(qiáng)光照射24 h和高溫95  進(jìn)行24 h強(qiáng)力破壞，分別取樣品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋成含阿莫西林2 mg/mL和雙氯西林1 mg/mL的溶液, 用0.45 m濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液20  L，按“2.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測定。試驗(yàn)結(jié)果表明，雜質(zhì)峰與兩主峰均有較好的分離，不影響測定。2.4  線性范圍的確定    分別取阿莫西林、雙氯西林對照

11、品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成含阿莫西林為0.005 01.000 0 mg/mL和雙氯西林為0.002 50.503 6 mg/mL的溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度（）為橫坐標(biāo)，得阿莫西林和雙氯西林的線性回歸方程分別為：A=27 989-26.88，r0.999 9（n=7）；A46 883-48.554，r=0.999 9（n=7）。結(jié)果表明，阿莫西林在0.005 01.000 0 mg/mL,雙氯西林在0.002 50.503 6 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。     &#

12、160;                       2.8  干擾試驗(yàn)    取陰性空白樣品液，依法進(jìn)行測定。結(jié)果表明空白輔料對樣品測定無干擾，色譜圖見圖1。2.9  加樣回收率試驗(yàn)    取已知濃度的供試品溶液加入不同濃度的對照液，制成含阿莫西林標(biāo)示量的80、100、120的溶液，按含量測定項(xiàng)下

13、的方法進(jìn)行試驗(yàn)，考察其加樣回收率。阿莫西林的平均回收率為99.4%,RSD為1.0%；雙氯西林的平均回收率為99.1%,RSD為0.970%。 見表1。表1  阿莫西林雙氯西林鈉膠囊回收率（略）Tab.1  Recovery test of amoxicillin and dicloxacillin sodium表2  阿莫西林和雙氯西林的含量測定（n=3)（略）Tab.2  Contents of amoxicillin and dicloxacillin sodium3  討論3.1  檢測波長的選擇  

14、60; 取供試品溶液適量，加流動相溶解并稀釋，在波長200600 nm之間進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果阿莫西林和雙氯西林在225 nm下均有較高的響應(yīng)。參照美國藥典24版中雙氯西林鈉HPLC法測定的檢測波長225 nm5,選擇225 nm為本法的檢測波長。3.2  離子對濃度的選擇      實(shí)驗(yàn)中考察了不同離子對濃度（0.005 mol/L、0.006 mol/L、0.007 mol/L、0.008 mol/L、0.01 mol/L）對分離的影響，發(fā)現(xiàn)濃度低于0.007mol/L時，離子對不起作用， 0.008 mol/L時保留適宜，分離效果好，而當(dāng)濃

15、度大于0.01 mol/L時，流動相濁度較大，且長鏈離子對濃度過高容易形成膠束，可使溶質(zhì)的k值出現(xiàn)極大值的現(xiàn)象，另外可能對柱效有一定的影響。實(shí)驗(yàn)證明，采用0.008 mol/L的濃度可保證柱效、峰型及保留時間均較好。3.3  流動相pH值的選擇        對流動相的pH值進(jìn)行考察，流動相pH值低于4.0，阿莫西林及雙氯西林的保留均加強(qiáng)，不易洗脫；pH值大于6.0時,峰變形。經(jīng)考察，pH值在4.5時阿莫西林及雙氯西林的峰型最好，且柱效最佳。3.4  耐用性考察    分別使用國內(nèi)外不

16、同品牌十八烷基鍵合硅膠色譜柱，不同品牌的高效液相色譜儀，對同一批樣品進(jìn)行測定，其結(jié)果基本一致。表明該方法耐用性較好。3.5  方法的優(yōu)點(diǎn)    本法使極性相差較大的阿莫西林和雙氯西林在同樣的色譜條件下均有適宜的保留，可在10 min內(nèi)完全被洗脫。可用于阿莫西林和雙氯西林不同制劑的含量測定。【參考文獻(xiàn)】  1 朱德妹,張嬰元.阿莫西林雙氯西林的體外抗菌作用研究J.中國抗感染化療雜志,2005，5（5）：260-265.2 陳紅,張丹. RP-HPLC法測定阿雙西林中阿莫西林和雙氯西林的含量J.藥物分析雜志,2003，（23）:51.3 陳悅.HPLC離子對梯度洗脫法同時測定注射用阿莫西林鈉/氟氯西林鈉的含量和有關(guān)物質(zhì)J.中國抗生素雜志