補陽還五湯注射液對家兔洗滌血小板PAF受體活性的影響

1、補陽還五湯注射液對家兔洗滌血小板PAF受體活性的影響提要采用放射配基受體結合法，觀察補陽還五湯注射液體外給藥對家兔洗滌血小板PAF受體活性的影響，結果補陽還五湯注射液體外給藥可明顯抑制家兔洗滌血小板PAF受體與放射配基3H-PAF的特異結合，其特異結合抑制率與銀杏苦內脂B相似，且有一定的量效關系。提示補陽還五湯注射液對家兔血小板膜上PAF受體活性有一定影響。 主題詞補陽還五湯藥理學血小板活化因子藥物作用補陽還五湯臨床上不僅用于治療缺血性中風、腦栓塞等中風后遺癥；而且已廣泛用于治療冠心病、深部靜脈血栓、肺栓塞等血栓性疾病。我們實驗研究發(fā)現，本方能明顯降低實驗性動、靜脈血栓模型血栓形成后血液中血小

2、板活化因子（PlateletActivatingFactor，PAF）含量，延長動脈血栓形成的潛伏期，降低靜脈血栓形成百分率12。為了探討補陽還五湯預防和治療腦血栓形成等血栓性疾病的作用機理，本研究采用放射配基受體結合法，觀察了補陽還五湯注射液體外給藥對家兔洗滌血小板PAF受體活性的影響。1材料1.1動物新西蘭白色家兔1.83kg，雌雄不拘，由北京醫(yī)科大學實驗動物科學部提供。1.2藥物與試劑藥材：按醫(yī)林改錯原方所載的藥味和配方比例，按文獻每錢以3 g換算，生黃芪120 g，當歸尾6 g，赤芍4.5 g，地龍、桃仁、紅花、川芎各3 g，于北京同仁堂藥店購得各種飲片。按文獻方法3制備補陽還五湯注射

3、液（3.6 g生藥ml，pH7.0）。銀杏苦內脂B（浙江寧波立華制藥有限公司）。PAF標準品（sigma）；明膠（serva）；肌酸磷酸（CP，Serva）；肌酸磷酸激酶（CPK，中國科學院上海生化所）；阿斯匹林（ASA，北京朝陽門藥品分裝廠）；小牛血清白蛋白（BSA，北京紅星生化技術公司）；其余試劑均為國產分析純。1.3主要儀器LS-5810型液閃儀（Beckman美國）；多頭細胞分離器（Skatron美國）。2方法2.1家兔洗滌血小板懸液的制備家兔清醒狀態(tài)下頸總動脈插管取血（3.8枸櫞酸三鈉抗凝，19）混勻，在41 000rpm10分鐘離心，取上層富含血小板血漿，加等量體積的磷酸緩沖液（K

4、H2PO40.22g，Na2 HPO40.86g，檸檬酸8.4g，葡萄糖0.44 g，溶于500 ml去離子水中，pH：6.5）混勻，在42 900rpm 10分鐘離心，取沉淀用等量體積的磷酸緩沖液懸浮混勻，4 3 000 rpm 5分鐘離心后棄上清，取血小板沉淀，重復洗滌1次；取沉淀的血小板加入含有0.1BSA和1 mM MgCl2的磷酸緩沖液中，稀釋成濃度為(34)106ml的血小板懸液（PRP）備用。2.23H-PAF與洗滌血小板PAF受體結合的測定將補陽還五湯注射液用蒸餾水配成3個不同濃度；銀杏苦內脂B用蒸餾水配成4個不同濃度的實驗用藥?？偨Y合管（T）：取PRP 380l3H-PAF（

5、0.35 nM）10 l蒸餾水5 l；非特異結合管（P）：取PRP 380 l3H-PAF 10 l冷PAF（1 M）5l；樣品管（Y）：取PRP 380 l3H-PAF 10 l實驗藥物5 l；以上每管作3個平行管，取平均值計算，加樣完畢后，在振蕩器上混合振搖30 秒，然后在25溫浴40分鐘，用含有0.1BSA的冰冷Tris緩沖液終止反應，用多頭細胞分離器真空抽濾，過濾分離游離與結合的3H-PAF，濾紙用冰冷的Tris緩沖液洗4次，濾紙片放入紅外線烘箱內（5 分鐘）烘干，置4 ml已測本底的閃爍液中，在液閃儀中測定放射性量。計算特異結合率（S）（T-P）T100和特異結合抑制率（So）(T-

6、Y）（T-P）100。3結果補陽還五湯注射液體外給藥可明顯抑制家兔洗滌血小板PAF受體與放射配基3H-PAF的特異結合，其特異結合抑制率分別為48.31、56.65和21.23，與銀杏苦內脂B相似（30.9464.61），說明補陽還五湯注射液體外給藥對家兔洗滌血小板PAF受體與放射配基3H-PAF的特異結合有一定的抑制作用，但高濃度反而抑制作用減弱。見表1。 表1補陽還五湯注射液對家兔PAF受體的影響藥物終濃度（gml）特異結合率（）特異結合抑制率（）38.0026.8248.31補陽還五湯注射液75.0032.0656.65146.3411.9221.230.0117.5630.94銀杏苦內

7、脂B0.0527.6848.430.2533.1958.321.2536.5864.61 4討論近年臨床研究表明，用藥物抑制中風患者血小板環(huán)氧化酶代謝途徑TXA2可緩解腦缺血發(fā)作，但不能阻斷由于PAF引起的血小板的繼續(xù)活化，此乃中風難治和復發(fā)的重要原因之一。基于這一原因，在中風治療時除考慮抑制TXA2、凝血酶、膠原等誘導的血小板聚集外，抑制PAF誘導的血小板聚集對防止病理性血栓形成尤為重要，亦是近年臨床探索抗PAF藥物、提高中風療效和作用機理研究所面臨的一個新課題。PAF是由各種炎癥細胞和血小板產生的一種內源性脂質介質，它是很強的血小板聚集劑，PAF與血管內皮細胞、血小板等相互作用，在血栓形成

8、過程中起著重要作用，與花生四烯酸（AA）、ADP同時被稱為血小板聚集的三大途徑。國外目前對PAF拮抗劑的研究，多從特異的結構上或從天然植物中分離活性成分入手4。從整體水平觀察中藥復方對PAF受體的拮抗作用尚少見報道。我們曾研究發(fā)現，補陽還五湯體內多次灌服給藥，能提高家兔洗滌血小板PAF受體與放射配基的特異結合量，其作用與銀杏葉提取物相似，其特異結合率為36.525。本研究發(fā)現：補陽還五湯注射液體外給藥亦能明顯抑制家兔洗滌血小板PAF受體與放射配基的特異性結合，其特異結合抑制率與銀杏苦內脂B相似；但高濃度卻反而抑制作用減弱；結合補陽還五湯注射液低濃度對PAF誘導的家兔洗滌或未洗滌血小板聚集效應有促進作用，而高濃度卻具有抑制作用來看6，補陽還五湯注射液體外給藥可能對PAF受體與放射配基的特異結合有雙向調節(jié)作用，其機理有待進一步探討。國家中醫(yī)藥管理局資助課題93C029廣東省中醫(yī)藥管理局資助課題97296張繼平（廣東省佛山市中醫(yī)院，佛山市