PCR技術(shù)在基因工程中的重要意義

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)稱 PCR。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文Polymerase Cha in Reactio n(PCR)是體外酶促合成特異 DNA 片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成 一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的 DNA 得以迅速擴(kuò)增，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí) 等特點(diǎn)。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或任何有 DNA,RNA 的地方.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，簡(jiǎn)稱 PCR)又稱無(wú)細(xì) 胞分子克隆或特異性 DNA 序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。PCR 技術(shù)能快速特異地在體外復(fù)制目的，理

2、論上能將其量極微的(fg DNA)目的基因在較短的時(shí)間內(nèi)(1-2 小時(shí))擴(kuò)增到極易檢測(cè)的微克水平。PCR 技術(shù)目前已經(jīng)成為人們獲得目標(biāo)基因的最常用的方法之一。然而其基本原理并不 復(fù)雜，主要包括模板 DNA(目標(biāo) DNA)加熱變性；降溫后反應(yīng)混合物中特異性引物與單鏈DNA模板的復(fù)性;72C條件下，Taq 酶誘導(dǎo)引物借助模板信息由5端到 3端延伸。每一輪反應(yīng)，模板拷貝數(shù)都增加一倍，理論上n 次循環(huán)后，擴(kuò)增產(chǎn)物拷貝數(shù)為2E(n-1)。但在 PCR 反應(yīng)后期由于底物的消耗，Taq 酶活力的下降，PCR 抑制物的增加，PCR 反應(yīng)的指數(shù)形式逐漸轉(zhuǎn)化 為線性形式進(jìn)入擴(kuò)增的平臺(tái)期，實(shí)際上 30-35 個(gè)循環(huán)

3、，擴(kuò)增倍數(shù)一般可達(dá)百萬(wàn)倍。如果想再 提高擴(kuò)增產(chǎn)物的量，可以將產(chǎn)物 DNA 再稀釋 1000 倍作為新的模板進(jìn)行第二輪的PCR 擴(kuò)增，一般二次擴(kuò)增后的 DNA 數(shù)量已達(dá)到所有分子生物學(xué)操作的要求。PCR 技術(shù)問(wèn)世以來(lái)正以驚人的速度發(fā)展，不僅其本身不斷地優(yōu)化改進(jìn)，許多新型的 PCR技術(shù)或由 PCR 衍生的新技術(shù)正不斷出現(xiàn)。在 PCR 技術(shù)的啟發(fā)下，諸如轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增系統(tǒng)(TAS)、連接酶鏈反應(yīng)(LCR)、自主序列復(fù)制系統(tǒng)(3SR)、鏈替代擴(kuò)增(SDA)、循環(huán)探針?lè)磻?yīng)、 等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)等核酸體外擴(kuò)增技術(shù)不斷誕生。當(dāng)然，目前Mullis 發(fā)明的經(jīng)典 PCR 技術(shù)，仍是多數(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸體外擴(kuò)增時(shí)的首選和

4、最常用的技術(shù)。三觀就是世界觀、價(jià)值觀、人生觀，這三觀不合的人是不太可能做朋友的，勉強(qiáng)不來(lái)的。物以類聚，人以群分。三觀，才是人和人之間最大的障礙!三觀不合的人，所說(shuō)的話難有交集，更談不上碰出火花，寒暄片刻尚可，相處時(shí)間稍長(zhǎng)，便如雞同鴨講，彼此都覺(jué)得索然無(wú)味，甚至有可能互相傷害。有一則寓言說(shuō)，青蛙和老鼠成了好友，想時(shí)時(shí)刻刻都在一起。于是，它們把腳綁在了一起。剛開(kāi)始，它們?cè)诘孛嫔闲凶哒?，還能吃到谷子。當(dāng)它們來(lái)到池塘邊時(shí)，青蛙一下就跳進(jìn)了水里，把老鼠也拖下了水。青蛙在水里玩得高興，而可憐的老鼠不會(huì)游泳，淹死了。最后，老鼠的尸體浮上水面，它的腳仍然和青蛙綁在一起。一只老鷹發(fā)現(xiàn)了老鼠，便沖向水面，抓起老

5、鼠，而青蛙也跟著被提出水面，成了老鷹的美食。三觀不同的人密切來(lái)往，就像寓言中的青蛙和老鼠，只會(huì)給雙方帶來(lái)傷害。摸不透的心就算了，不必費(fèi)力去揣摩；看不清的人就遠(yuǎn)躲，不必勞神去猜測(cè)。人生短暫，精力有限。我們應(yīng)該將所有傾注于所愛(ài)的人、相處愉快的人。對(duì)于那些志不同道不合的朋友，我們大可以選擇悄悄離開(kāi)。畢竟，誰(shuí)的生活里也不會(huì)缺了一個(gè)人就不行。所謂打交道，交在其次，重要的是有相同的道，也就是三觀要合。二、大路朝天，各走一邊人與人之間互相理解并不容易，觀念差異大的人則更難。貪婪的人怎么也無(wú)法理解有些人視錢財(cái)如浮云，勢(shì)利的人怎么也不會(huì)相信有些人對(duì)待別人可以做到一視同仁。人都容易以自己內(nèi)心所想的為標(biāo)準(zhǔn)，以此來(lái)分

6、析和判斷他人。如果有人的言行跟自己內(nèi)心的標(biāo)準(zhǔn)不一致，則認(rèn)為他人是裝腔作勢(shì)，虛偽透頂，這實(shí)在是自以為是!在這個(gè)世界上，總有一些人是看你不順眼的。沒(méi)關(guān)系，你走你的陽(yáng)關(guān)道，我過(guò)我的獨(dú)木橋，相安無(wú)事便好。朋友，沒(méi)有必要強(qiáng)求，意氣相投就真心相處，看不慣的就拂袖而去，大路朝天，各走一邊。不必把太多人，請(qǐng)進(jìn)生命里。若他們走進(jìn)不了你內(nèi)心，就只會(huì)把你的生活攪擾得一地雞毛。生活無(wú)需過(guò)多陪襯，三觀不和的朋友多了，越熱鬧反而越讓人感到冷清。三、圈子不同，不必強(qiáng)融人是群居動(dòng)物，怎么可能離開(kāi)群居而獨(dú)自生存？這是圈子存在的必要性。對(duì)我們平常百姓來(lái)說(shuō)，處世方式相近，三觀較為一致的，自然就在同一個(gè)圈子，相互幫助，同進(jìn)同退。如果我們一路同行，那便風(fēng)雨同舟；如果我們只是彼此的過(guò)客，那便淡淡一笑，無(wú)需多言。以利相交，利盡則散；以勢(shì)相交，勢(shì)敗則傾；以權(quán)相交，權(quán)失則棄；以情相交，情斷則傷；唯以心相交，