p53蛋白在細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制研究

1、p53蛋白在細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制研究丟竺下載全文參加收藏夾點(diǎn)擊：ioi 下載：1Bad(Bcl-2 antagonist of cell death)就是Bcl-2 蛋白家族的成員之一 ,就是細(xì)胞凋亡的正調(diào)控因子，正常情況下定位于細(xì)胞質(zhì)中。像其它的BH3-only 蛋白一樣，使結(jié)合在Bcl-2或者Bcl-xl上的Bax游離下來從而促進(jìn)凋亡。Bad的凋亡活性通過它的Ser112,Ser136 與Ser155三點(diǎn)的磷酸化來調(diào)控。在沒有外界壓力的細(xì)胞中,Bad被幾個(gè)蛋白激酶如蛋白激酶A(PKA)或者蛋白激酶B(AKT)磷酸化,從而與14-3-3 結(jié)合。但就是，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡刺激 時(shí),Bad被迅速地去

2、磷酸化并且遷移到線粒體上，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。腫瘤抑制因子p53在不同的刺激下分別調(diào)節(jié)細(xì)胞周期或者細(xì)胞凋亡。它可以轉(zhuǎn)錄活化許多靶基因，如p21,Bax,p53DINP1,Bid,Puma等等。但就是,還有研究證明p53也通過轉(zhuǎn)錄非依賴的形式來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，盡管這個(gè)作用的機(jī)制還沒有被詳細(xì)的說明，但就是最近的研究報(bào)道說明了 ,p53可以直接轉(zhuǎn)移定位到線粒體上，與Bcl-2或者Bcl-xl結(jié)合后,從而使Bax游離下來并活化。同樣,p53還可以通過打斷 Bak/Mcl-1 或者Bak/Bcl-2之間的結(jié)合來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。盡管Bcl-2家族中的許多分子，例如Puma,Noxa,Bax 與Bid,都可以被p

3、53轉(zhuǎn)錄調(diào)控，這些 已經(jīng)被報(bào)道并且研究的很透徹，但就是Bad與p53之間的關(guān)系至今仍沒有被報(bào)道與研究。這里,我們報(bào)道了 p53可以結(jié)合在Bad基因起始密碼子上游的大約6、6kb的區(qū)域,轉(zhuǎn)錄活化Bad的表達(dá)。我們還說明了Bad可以與細(xì)胞質(zhì)中的 p53結(jié)合,從而阻止了 p53的進(jìn)核，導(dǎo)致了 p53對(duì)于Bad轉(zhuǎn)錄活性的降低。另外,Bad可以介導(dǎo)p53定位于線粒體上，并且在 線粒體上形成Bad/p53 的復(fù)合物。兩個(gè)系列的證據(jù)說明了此結(jié)論：其一,當(dāng)我們利用從H1299細(xì)胞中純化的線粒體與純化的p53蛋白，野生型的Bad或者突變體的Bad(這個(gè)突變體仍然可以結(jié)合 p53，但就是不能定位于線粒體上)蛋白質(zhì)

4、共同孵育時(shí)，p53只可以被野生 型的Bad蛋白介導(dǎo)定位于線粒體上，而不能被突變體的Bad介導(dǎo)并定位到線粒體上；其二，利用小RNA干擾的實(shí)驗(yàn)，降低細(xì)胞內(nèi)Bad的蛋白水平時(shí)，同時(shí)也減少了 p53在線粒體上的 定位。在線粒體上形成的Bad/p53 復(fù)合物通過誘導(dǎo) Bak的活化與寡聚化從而誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。通過小RNA干擾試驗(yàn)減少Bad的表達(dá)水平明顯的降低了 etoposide(鬼臼毒素)誘導(dǎo) 的細(xì)胞凋亡。從而，我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)首次證明了Bad在p53轉(zhuǎn)錄依賴的與非依賴的通路中扮演了雙重的角色?？傊?，我們發(fā)現(xiàn)了 Bad基因上游6、6kb處的p53的結(jié)合作用區(qū)域，并且可以被p53轉(zhuǎn)錄活化;Bad通過與p53

5、結(jié)合，一方面抑制了 p53的進(jìn)核,控制了細(xì)胞核內(nèi) p53的量,從而使細(xì)胞內(nèi)Bad的蛋白水平處于平衡，另一方面,Bad通過介導(dǎo)p53定位于線 粒體上從而促進(jìn)了 p53誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。蛋白之間相互作用 Sival就是CD27結(jié)合的蛋白,在細(xì)胞凋亡的內(nèi)在途徑與外在途徑中均起著重要的作用。過量表達(dá)Sival可以結(jié)合BCl-xl,并抑制Bcl-xl介導(dǎo)的對(duì)于uv誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的防護(hù)。Sival與它的剪切突變體 Siva2 在T淋巴細(xì)胞中都可以介導(dǎo)caspase依賴的線粒體途經(jīng)的細(xì)胞凋亡。據(jù)報(bào)道,Siva1包含在TCR介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中。Jacobs SBR等人報(bào)道,Siva1對(duì)于神經(jīng)元細(xì)胞中 p53依賴

6、的 凋亡就是重要的?？傊@些報(bào)道都就是關(guān)于 Siva1在凋亡刺激的情況下，它的促凋亡能力， 但就是,在沒有外加壓力的情況下，Siva1與Siva2在細(xì)胞中起著怎樣的功能一直沒有報(bào)道。 腫瘤抑制因子p53,在細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡與基因組的穩(wěn)定性等的多個(gè)方面中起著關(guān)鍵的調(diào) 節(jié)作用。它可以轉(zhuǎn)錄活化很多的靶基因，如p21waf1,Bax,Bad,Hmd2 與Siva等等。其中一些靶蛋白如Hdm2與Bad等可以結(jié)合p53,從而形成了負(fù)反響來調(diào)節(jié)p53。在正常情況下,p53的蛋白水平被嚴(yán)格地控制著，通過許多的調(diào)控因子進(jìn)行嚴(yán)格的調(diào)節(jié)，其中最關(guān)鍵的就是Hdm2 。Hdm2所介導(dǎo)的p53的泛素化降解又可以被細(xì)胞

7、內(nèi)的很多分子進(jìn)一步更加精確 的調(diào)節(jié)，如PCAT與Daxx等。PACT可以直接與 Hdm2 結(jié)合,增加了 Hdm2 與p53之間 結(jié)合的能力，從而增加了 p53的泛素化降解。與此相近的就是，Daxx通過結(jié)合Hausp來穩(wěn)定了 Hdm2,從而增加了 Hdm2對(duì)于p53的降解活性，進(jìn)一步增加了 p53的泛素化降解。 此外,p53還可以影響細(xì)胞的遷移與腫瘤的發(fā)生。據(jù)文章報(bào)道，在沒有外界壓力的情況下，p53可以促進(jìn)細(xì)胞遷移，而缺乏p53的細(xì)胞其遷移能力減弱。然而，也有文章報(bào)道,Gadea G 等 報(bào)道p53的缺失可以促進(jìn)RhoA-ROCK依賴的細(xì)胞遷移。當(dāng)細(xì)胞受到外界壓力時(shí)，腫瘤抑 制因子p53誘導(dǎo)很強(qiáng)

8、的抗存活能力，p53的這種能力在正常的細(xì)胞中被限制，主要就是由于 被Hdm2所介導(dǎo)的迅速泛素化與降解。p53誘導(dǎo)Hdm2蛋白的表達(dá)，從而兩者之間建立了負(fù)反響調(diào)控機(jī)制。p53-Hdm2二者之間相互作用的調(diào)控機(jī)制以及其她的哪些蛋白也存在于p53的這種負(fù)反響抑制中還沒有被完全地研究。在本章中，我們主要展示了在沒有外界壓力的細(xì)胞中,p53-Hdm2的相互作用被 Siva1蛋白所加強(qiáng)。Siva1蛋白，與Hdm2相類似的就是,它也就是p53靶基因的產(chǎn)物。Siva1既可以與p53結(jié)合,也可以與Hdm2結(jié)合，與二 者結(jié)合的區(qū)域就是不同的，從而加強(qiáng)了 Hdm2介導(dǎo)的p53的泛素化與降解。此外,Siva1抑 制了 p53所介導(dǎo)的基因表達(dá)，細(xì)胞凋亡與細(xì)胞的遷移。Sival的功能可能與它自身可以形成 同源二聚體有關(guān),因?yàn)镾ival的一個(gè)剪切突變體 Siva2,它不能形成二聚體而且喪失了降解 p53的功能。在小鼠成瘤試驗(yàn)中,過量表達(dá)的Sival可以抑制p53介導(dǎo)的腫瘤抑制功能,而 下調(diào)Sival的表達(dá)那么增加了 p5