肝素的分離純化工藝

1、肝素的分離純化姓名：XX 專業(yè)：生物制藥1. 前言：肝素（ heparin） 是 1916年麥克倫（ Mclean） 在研究凝血問題時(shí)，從狗的 肝臟中發(fā)現(xiàn)的的，具有抗凝血活性。肝素是由動(dòng)物結(jié)締組織的肥大細(xì)胞產(chǎn)生 的,它廣泛存在于哺乳動(dòng)物的各種器官和組織中, 如腸粘膜、 十二指腸、 肺、 肝、心、胎盤和血液中，多與蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合體存在，這種復(fù)合體無抗凝 血活性，隨蛋白質(zhì)的去除而活性增。在體內(nèi)肝素可被肝臟產(chǎn)生的肝素酶滅活 而從尿排泄出去。無論在體內(nèi)還是體外，肝素的抗凝作用都很強(qiáng)，故臨床把 它作為抗凝劑廣泛使用。肝素是世界上迄今為止已知的分子結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的化合物, 短期內(nèi)無法人 工化學(xué)合成，目前只有

2、來源于豬小腸粘膜的肝素能夠用于臨床治療。2. 肝素的相關(guān)簡介2.1 理化性質(zhì) 肝素為白色或灰白色粉末 ,無臭無味,有吸濕性,鈉鹽易溶于水 ,不溶于乙醇、丙酮、二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑。它一種由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸脂。制劑分子量在120040000,抗血栓與抗凝血活性與分子量大小有關(guān)。2.2 藥用功能 治療各種疾病并發(fā)的播散性血管內(nèi)凝血早期。預(yù)防動(dòng)、靜脈血栓和肺栓塞。治療動(dòng)、 靜脈血栓和肺栓塞, 缺血性腦卒中, 不穩(wěn)定型心絞痛 （減輕癥狀、 預(yù)防心肌梗塞）,急性心肌梗塞（防止早期再梗塞和梗塞區(qū)延展,降低病死 率）。人工心肺、腹膜透析或血液透析時(shí)

3、作為抗凝血藥物。作為溶血栓療法的維持治療。用于輸血時(shí)預(yù)防血液凝固及血庫保存鮮血等體外抗凝劑。2.3 來源雜質(zhì)肝素原料藥的原料是肝素粗品，其提取只能源自健康生豬的小腸粘膜，由于含有大量雜質(zhì)蛋白、雜質(zhì)核酸、微生物等雜質(zhì)，需經(jīng)過物理和化學(xué)提取 分離過程，定向獲取天然結(jié)構(gòu)基團(tuán)完整的肝素，從而制成肝素原料藥。肝素鈉原料藥是標(biāo)準(zhǔn)肝素制劑的唯一有效成分和低分子肝素原料的生 產(chǎn)起點(diǎn)，目前肝素制劑只有按照注射給藥方式用于臨床，這使得肝素原料藥 需要有很高的純度，方可保證制劑的用藥安全。3. 該工藝的分離原理肝素在水溶液中帶很高的負(fù)電荷。先用鹽解或酶解法使肝素與雜蛋白分離出來， 然后采用離子交換樹脂來 提取純化肝

4、素，常用的是強(qiáng)堿陰離子樹脂或強(qiáng)堿低交聯(lián)度陰離子樹脂。在離子交換過程中，水中的陽離子（如 Na+、 Ca2+、 K+、 Mg2+、 Fe3+等）與陽離子交換樹脂上的 H+ 進(jìn)行交換，水中陽離子被轉(zhuǎn)移到樹脂上，而 樹脂上的H+交換到水中。水中的陰離子（如 Cl- 、 HC03、- 肝素等）與陰離子交換樹脂上的 0H-進(jìn)行交換，水中陰離子被轉(zhuǎn)移到樹脂上，而樹脂上的 0H- 交換到水中。而H+與0H-相結(jié)合生成水，從而達(dá)到脫鹽的目的。4. 肝素鈉工藝流程工藝路線：工藝步驟：1、鹽解：將刮好的新鮮腸粘膜,按腸粘膜和水的總重量,加入3%的 NaCl,攪拌均勻，再加燒堿液調(diào)PH值為9,緩慢升溫50-55度，

5、加溫時(shí)每10-20分鐘加水?dāng)嚢枰淮?，恒?2 小時(shí)，注意要間隔攪拌。恒溫結(jié)束后，要快速升溫到 96-98 度,恒溫 10分鐘,趁熱撈出上層的渣子。冷卻至50C以下，用30 目雙層紗布過濾,收集濾液。2、吸附、洗滌、洗脫 上述濾液中加入 2%的 C1 型 714樹脂,攪拌 8 小時(shí),靜置過夜；去上清液,樹脂用水沖洗,再去上清液,濾干,加入2 倍量的1.4mol/L NaCI溶液并攪拌2h,濾干。用2倍量的3.0mol/L NaCI溶液攪拌洗脫8h，濾干；再用1倍量的同樣洗脫液攪拌洗脫2h，濾干，合并洗脫液。3、沉淀 得到的洗脫液加人等量的 95%乙醇沉淀,過夜,取出上清液,收集沉淀,丙酮中脫水干燥,得肝素鈉粗品。4、溶解、脫色 將肝素鈉粗品用15倍的1%NaCl溶液溶解，用6mol/L HCl調(diào)pH至1.5左右，過濾收集清液，用 5moI/L NaCI調(diào)pH至11,按3嘲量加入過氧化氫（含量30% , 25C放置，開始時(shí)不斷調(diào)節(jié)pH維持在11,第2天再按1%量加入過氧化氫，調(diào)pH至11,共放置48h;然后過濾，收集濾液。5、沉淀、干