土壤微生物量碳氮測定方法(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上1.23.1 土壤微生物碳的測定TOC-VCPH有機(jī)碳分析儀一、方法原理 土壤有機(jī)碳的測量方法主要有兩種，即氯仿熏蒸培養(yǎng)法和氯仿熏蒸直接浸提法。1氯仿熏蒸培養(yǎng)法1：土壤經(jīng)氯仿熏蒸后再進(jìn)行培養(yǎng)，測定培養(yǎng)時間內(nèi)熏蒸與未熏蒸處理所釋放CO2之差來計算土壤生物量碳。2氯仿熏蒸直接浸提法2：土壤經(jīng)氯仿熏蒸后直接浸提進(jìn)行，測定浸提液中的碳含量，以熏蒸和不熏蒸土壤中總碳的差值為基礎(chǔ)計算土壤微生物含碳量。直接提取法與氯仿熏蒸培養(yǎng)法相比，直接提取法具有簡單、快速、測定結(jié)果的重復(fù)性較好等優(yōu)點(diǎn)。直接提取法測定土壤微生物量的碳的方法日趨成熟?，F(xiàn)在氯仿熏蒸K2SO4提取法已成為國內(nèi)外最常用的測

2、定土壤微生物碳的方法。本實(shí)驗(yàn)以氯仿熏蒸直接浸提法為例介紹土壤微生物量碳氮的浸提與測定。二、主要儀器振蕩機(jī)、真空干燥器、真空泵、TOC-VCPH有機(jī)碳分析儀。二、試劑1氯仿（去乙醇）：普通氯仿一般含有乙醇作為穩(wěn)定劑，使用前要去除乙醇。將氯仿按照12（v/v）的比例與蒸餾水一起放入分液漏斗中，充分振動，慢慢放出底部氯仿，重復(fù)3次。得到的無乙醇氯仿加入無水CaCl2，以除去氯仿中的水分。20.5 mol·L-1 K2SO4浸提液：43.57 g分析純K2SO4 定溶至1 L。四、操作步驟稱取過2 mm篩的新鮮土樣12.5 g六份，置于小燒杯中。將其中三份小燒杯放入真空干燥器中，干燥器底部放

3、3個燒杯，其中一個放氯仿，燒杯內(nèi)放少許玻璃珠（防爆），另一個放水（保持濕度），再放一杯稀NaOH。抽真空時，使氯仿劇烈沸騰3-5 min，關(guān)掉真空干燥器閥門，在暗室放置24 h。熏蒸結(jié)束后，打開干燥器閥門，取出氯仿，在通風(fēng)廚中使氯仿全部散盡。另三份土壤放入另一干燥器中，但不放氯仿。將熏蒸的土樣全部轉(zhuǎn)移至150 mL三角瓶中，加入50 mL 0.5 mol·L-1 K2SO4 (土水比為1:4)，振蕩30 min，過濾。未熏蒸土樣操作相同，同時做空白。五、結(jié)果計算土壤微生物量碳 =（熏蒸土壤有機(jī)碳-未熏蒸土壤有機(jī)碳）/0.45 式中：0.45將熏蒸提取法提取液的有機(jī)碳增量換算成土壤微生

4、物生物量碳所采用的轉(zhuǎn)換系數(shù)（kEc)。一般量容法采用的 kEc值為0.38，儀器分析法 kEc 取值 0.45。六、注意事項(xiàng)1氯仿致癌，操作時應(yīng)在通風(fēng)廚中進(jìn)行。2打開真空干燥器時，要聽聲音，如沒空氣進(jìn)去的聲音，試驗(yàn)需重做。3應(yīng)注意試劑的廠家，有些廠家的K2SO4試劑不宜浸提土壤微生物量碳。4浸提液應(yīng)立即用TOC-VCPH有機(jī)碳分析儀測定或在 -18下保存。1.23.2 土壤微生物量氮的測定一、方法原理土壤微生物態(tài)氮是土樣在CHCl3熏蒸后直接浸提氮含量，并進(jìn)行測定，以熏蒸和不熏蒸土壤中總氮的差值為基礎(chǔ)計算土壤微生物量氮。二、主要儀器振蕩機(jī)、真空干燥器、真空泵、高壓鍋、紫外可見分光光度計、凱氏定

5、氮儀、連續(xù)流動分析儀。三、試劑1氯仿（去乙醇）。20.5 mol·L-1 K2SO4浸提液。3氧化劑溶液：將6 g NaOH和30 g K2S2O8用水溶解后定容至1 L。四、操作步驟土壤微生物量氮的測定采用氯仿熏蒸-K2SO4 提取法。在真空干燥器中用氯仿蒸汽熏蒸 24 h，用反復(fù)抽真空方法除去殘存氯仿后, 再用0.5 mol·L-1 K2SO4 浸提液浸提后振蕩30 min，立即過濾，濾出的浸提液測定微生物量氮。測定方法主要有以下3種：1氧化法取10 mL土壤浸提液置于25 mL帶塞的刻度試管中，加入等體積的氧化劑溶液，立即加塞，固定好以防加熱氧化時塞子沖出。充分混勻后

6、加入高壓鍋中進(jìn)行氧化至少0.5 h，取出冷卻至室溫，在波長220和275 nm下進(jìn)行比色。 2凱氏法浸提液采用凱氏消煮蒸餾法，測定浸提液全氮。分別吸取25 mL的K2SO4浸提液于 50 mL開氏瓶中，加入5 mL 濃HSO4，以防銨的損失。在水浴中加熱至體積約12 mL。然后加入3 g混合加速劑( K2SO4Cu2SO4 =101)和 8 mL濃H2SO4，搖勻，在 370 消煮至液體變清(約3 h)，冷卻后，將消煮液轉(zhuǎn)入凱氏瓶中在定氮儀上蒸餾定氮。3. 流動分析儀法土壤熏蒸后，用K2SO4浸提液后，震蕩、過濾、用連續(xù)流動分析儀測定濾液中的銨態(tài)氮。氯仿熏蒸后，死亡微生物的部分氮素會以 NH4

7、+-N 形式釋放而被0.5 mol·L-1 K2SO4浸提出來；而未熏蒸的0.5 mol·L-1 K2SO4浸提的NH4+-N中不包括這部分。NH3+-N 中不包括這部分。因此熏蒸與不熏蒸的銨態(tài)氮之差，是熏蒸所造成的氮增量。五、結(jié)果計算1氧化法土壤微生物量氮 =（熏蒸土壤微生物量氮-未熏蒸土壤微生物量氮）/ 0.452凱氏法土壤微生物量氮 =（熏蒸土壤微生物量氮-未熏蒸土壤微生物量氮）× 0.53土壤微生物量氮 =（熏蒸土壤微生物量氮-未熏蒸土壤微生物量氮）× 0.483流動分析儀法土壤微生物量氮 =（熏蒸土壤微生物量氮-未熏蒸土壤微生物量氮）/0.25微生物體氮的礦化系數(shù) K 為0.25，即礦化出來的微生物體氮僅是微生物體總氮的0.25倍。六、