ICHQB分析方法驗(yàn)證

1、Q2B分析方法驗(yàn)證方法學(xué)簡介ICH 指南“關(guān)于分析方法驗(yàn)證的術(shù)語”闡述了分析方法驗(yàn)證中應(yīng)考慮的項(xiàng)目，本文件是 對(duì) Q2A 的補(bǔ)充，其目的是對(duì)每一種分析方法的各種驗(yàn)證項(xiàng)目提供指導(dǎo)和建議。在某些情況 下（如專屬性），為了確保原料藥和制劑的質(zhì)量，應(yīng)對(duì)一些綜合起來的分析方法的總體能力 進(jìn)行研究。另外，文件對(duì)在新藥申請(qǐng)中必須要遞交的資料作了指導(dǎo)。所有驗(yàn)證中收集的相關(guān)數(shù)據(jù)和驗(yàn)證項(xiàng)目的計(jì)算公式都應(yīng)遞交并進(jìn)行適當(dāng)?shù)挠懻?。本指南未提到的方法?也可應(yīng)用和采納。 申報(bào)者的責(zé)任應(yīng)是選擇最適合他們產(chǎn)品的驗(yàn)證 方法和方案。但要切記，分析方法驗(yàn)證的主要目的是證明其適合于預(yù)期目的。對(duì)于生物技 術(shù)產(chǎn)品和生物制品，由于它們的復(fù)

2、雜特性，在某些情況下，其分析方法的驗(yàn)證可能與本文 中提到的方法不同。在整個(gè)方法學(xué)驗(yàn)證研究過程中， 必須使用已完全鑒定并標(biāo)示純度的參考物質(zhì)， 其純度要 求取決于預(yù)期用途。與Q2A 樣，為清楚起見，本文在各獨(dú)立的章節(jié)中考慮了不同的驗(yàn)證項(xiàng)目，這些章節(jié)的 排列反映了建立和評(píng)估一種分析方法的過程。事實(shí)上在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)， 一些適當(dāng)?shù)尿?yàn)證項(xiàng)目通?？梢酝瑫r(shí)考慮， 以對(duì)分析方法的能 力提供合理、全面的了解，如專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度和精密度。1 專屬性在鑒別檢查、雜質(zhì)和含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證中應(yīng)進(jìn)行專屬性研究，證明專屬性的方法 取決于分析方法的預(yù)期目的。，在此情況般一種分析方法不太可能對(duì)某一特定的被分析物具有

3、專屬性（完全鑒定）下，建議采用兩種或兩種以上的分析方法以達(dá)到能鑒定的水平。11 鑒別合適的鑒別試驗(yàn)應(yīng)能區(qū)別出可能存在結(jié)構(gòu)相似的化合物。可以通過與已知參考物質(zhì)比較，從含有被分析物的樣品中得到的正結(jié)果和不含被分析物的樣品中得到的負(fù)結(jié)果來確定。此外，鑒別試驗(yàn)也可以取與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)的物質(zhì)來試驗(yàn)而得不到正反應(yīng)來證實(shí)。在考慮可能會(huì)造成干擾的前提下，應(yīng)根據(jù)合理科學(xué)的判斷來選擇可能存在的干擾物。12 含量和雜質(zhì)測(cè)定在色譜方法中， 應(yīng)用典型的色譜圖來證明專屬性， 并在圖上恰當(dāng)?shù)貥?biāo)出每一種成分， 其 他分離技術(shù)也應(yīng)如此。在色譜方法中， 應(yīng)在一定程度上考察關(guān)鍵性的分離。 對(duì)關(guān)鍵性分離， 可用兩個(gè)洗脫程度 最

4、接近的化合物的分離度來證明具有專屬性。當(dāng)用非專屬性方法測(cè)定含量， 可用其他輔助性的分析方法來證實(shí)整個(gè)方法的專屬性， 例 如：用滴定法來測(cè)定放行原料藥的含量，可結(jié)合用合適的雜質(zhì)檢查方法。下述方法均適用于含量和雜質(zhì)測(cè)定： 121 可以得到雜質(zhì)的情況對(duì)含量測(cè)定來說， 專屬性應(yīng)包括提供被分析物在雜質(zhì)和 （或） 輔料存在時(shí)能被區(qū)分的證 明，實(shí)際操作中可以在純物質(zhì)（原料或制劑）中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，與未加雜質(zhì)或 輔料的樣品測(cè)定結(jié)果比較，以證明其含量測(cè)定結(jié)果不受這些物質(zhì)的影響。對(duì)雜質(zhì)檢查來說，通過加入含有一定量雜質(zhì)的原料藥或制劑，證明各雜質(zhì)之間能分離， 并也能與樣品矩陣中其他組分分離。122 無法得到雜

5、質(zhì)的情況如果雜質(zhì)或降解物的對(duì)照品不能得到， 專屬性可以通過將含一定量的雜質(zhì)或降解物的樣 品測(cè)定結(jié)果與另一種成熟的方法測(cè)定結(jié)果比較，如藥典方法或經(jīng)驗(yàn)證的其他方法（獨(dú)立的 方法）進(jìn)行比較來證實(shí)。必要時(shí)，應(yīng)包括放置在強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件下，即光、熱、濕、酸 堿水解及氧化條件下的樣品的測(cè)定。對(duì)于含量測(cè)定，需要比較兩種方法的結(jié)果。對(duì)于雜質(zhì)檢查，要比較雜質(zhì)檔案。峰純度檢驗(yàn)是很有用的，它顯示被測(cè)物色譜峰是單個(gè)還是多個(gè)成分（如二極管陣列、 質(zhì)譜）。2線性線性是在分析方法的范圍內(nèi) （見章節(jié) 3）對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)?？捎盟ㄗh的分析方法，直 接對(duì)原料藥（用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液稀釋）和（或）對(duì)分別稱取制劑組分的混合物進(jìn)行測(cè)定，以

6、研究其線性。后者應(yīng)在方法的范圍內(nèi)進(jìn)行研究。線性關(guān)系應(yīng)以信號(hào)對(duì)被分析物的濃度或含量做圖，根據(jù)圖形是否呈線性進(jìn)行評(píng)價(jià)。如 果有線性關(guān)系，可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果，如通過最小二乘法進(jìn)行線性回歸計(jì)算。在某些情況下為使分析含量和樣品濃度呈線性關(guān)系，在回歸分析前應(yīng)對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué) 轉(zhuǎn)換。由線性回歸評(píng)估所測(cè)得的數(shù)據(jù)本身又有助于精確地評(píng)價(jià)線性的程度。遞交資料中應(yīng)含相關(guān)系數(shù)、y軸上的截距、回歸曲線的斜率、剩余方差，還應(yīng)包括數(shù)據(jù) 圖表。另外，分析實(shí)際數(shù)據(jù)點(diǎn)與回歸曲線的偏差也有助于對(duì)線性作評(píng)價(jià)。一些分析方法，如免疫測(cè)定法，在任何轉(zhuǎn)換后，均不能證明呈線性，在這種情況下， 分析的響應(yīng)值應(yīng)用樣品中被分析物的濃度（

7、數(shù)量）的適當(dāng)函數(shù)來表示。為建立線性，建議至少用 5 個(gè)濃度。若用其他方法則應(yīng)證明其合理性。3 范圍特定的范圍一般是從線性研究中得到的，它依賴于分析方法的應(yīng)用目的。確定范圍的 方法是：樣品中含有被分析物的量在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)或在范圍末端，該分析方法均 能獲得良好的線性、精密度和準(zhǔn)確度。以下是應(yīng)考慮的最小規(guī)定范圍：80%120%；對(duì)原料藥或成品藥（制劑）的含量測(cè)定；一般應(yīng)在測(cè)試濃度的對(duì)含量均勻度檢查：應(yīng)至少在測(cè)試濃度的70%130%之內(nèi)，超出此范圍，應(yīng)有正當(dāng)理 由，主要是根據(jù)劑型的特點(diǎn)（如定量吸入劑） 對(duì)于溶出度試驗(yàn)，應(yīng)為規(guī)定范圍的± 20%，例如：如果是控釋制劑，規(guī)定 1 小時(shí)后達(dá)

8、到 20%， 24 小時(shí)達(dá)到 90%，它的驗(yàn)證范圍應(yīng)為標(biāo)示量的 0！110%；對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，應(yīng)為雜質(zhì)的報(bào)告水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120%。對(duì)已知有異常功效的、有 毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì)，其檢測(cè)限度和定量限度應(yīng)與該雜質(zhì)必須被控制的水 平相當(dāng)。注意：在研制階段進(jìn)行雜質(zhì)檢查方法驗(yàn)證時(shí)，有必要根據(jù)建議（可能）的 限度來考慮范圍；如果用一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定和純度檢查，且僅使用100%的標(biāo)準(zhǔn)品，線性范圍 應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告水平（見相應(yīng) ICH 指南“新原料藥中的雜質(zhì)”和“新制劑中的雜質(zhì)”中“批雜質(zhì)含量的報(bào)告”章節(jié)）至含量指標(biāo)的120%。4 準(zhǔn)確度應(yīng)在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)建立準(zhǔn)確度。41 含量 411 原料

9、藥列幾種方法可用于測(cè)定準(zhǔn)確度：a)b)用該分析方法去測(cè)定已知純度的被分析物（如參照物質(zhì)） 將建議采用的分析方法的結(jié)果與另一種已完全驗(yàn)證的分析方法的結(jié)果比較，后者的準(zhǔn)確度是規(guī)定的和（或）是已定義的（獨(dú)立的方法，見節(jié)）c)準(zhǔn)確度可以在精密度、線性和專屬性建立后推論而得。412 制劑a)b)列幾種方法可用于測(cè)定準(zhǔn)確度：用該分析方法去測(cè)定按處方量制成的混合物， 其中已加入了已知量的待測(cè)定的原料藥；在不能獲得制劑所有組分的情況下， 可以接受的方法是可以將已知量的被分析物加入到制劑中，或者將測(cè)得結(jié)果與另一種已完全驗(yàn)證的分析方法的結(jié)果比較，后 者的準(zhǔn)確度是已知的（獨(dú)立的方法，見節(jié)）c） 準(zhǔn)確度可以在精密度、

10、線性和專屬性建立后推論而得。42 雜質(zhì)（定量）準(zhǔn)確度應(yīng)使用在樣品中（原料藥 / 制劑）加入已知量雜質(zhì)的方式來評(píng)價(jià)。在不能獲得含有某些雜質(zhì)和 （或） 降解產(chǎn)物的樣品的情況下， 可以考慮與其它獨(dú)立的方 法（見節(jié)）測(cè)得的結(jié)果比較?？梢允褂迷纤幍捻憫?yīng)因子。應(yīng)明確如何測(cè)定單個(gè)或總的雜質(zhì)， 如：相對(duì)于主要被分析物所占的重量百分比或面積百 分比。43 數(shù)據(jù)要求準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)需要對(duì)至少能涵蓋所規(guī)定的線性范圍的 3 種濃度，至少測(cè)定 9 次（如按完 整分析步驟對(duì) 3 種濃度分別測(cè)定 3 次）。準(zhǔn)確度可通過在樣品中加入已知量的被分析物測(cè)得的百分回收率或平均值與真實(shí)值的 差異及其置信區(qū)間來報(bào)告。5 精密度含量測(cè)定和

11、雜質(zhì)定量測(cè)定的驗(yàn)證均包括對(duì)精密度的研究。51 重復(fù)性重復(fù)性應(yīng)使用以下方法之一評(píng)定：a） 在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)至少測(cè)定 9次（如 3種濃度/ 每種濃度重復(fù)測(cè)定 3次）；b） 在 100%的測(cè)試濃度，至少測(cè)定 6 次。52 中間精密度中間精密度的考察程度應(yīng)根據(jù)方法使用的環(huán)境而定， 申請(qǐng)者應(yīng)確定隨機(jī)事件對(duì)分析方法 精密度的影響。需研究的典型變化包括：日期、分析人員、儀器等，沒有必要逐個(gè)考察每 個(gè)因素。鼓勵(lì)使用試驗(yàn)設(shè)計(jì)（矩陣法）重現(xiàn)性通過試驗(yàn)室之間的試驗(yàn)來評(píng)價(jià)，如果方法需要標(biāo)準(zhǔn)化，如收載到藥典中的方法，53 重現(xiàn)性則應(yīng)考慮重現(xiàn)性。這些資料不是上市申請(qǐng)文檔的一部分。54 數(shù)據(jù)要求在每一種精密度研究中都

12、必須報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間。6檢測(cè)限根據(jù)分析方法是否采用非儀器分析還是儀器分析，可用幾種方法來確定檢測(cè)限，除了面所列的方法外其他的方法也可能被接受。61 根據(jù)信噪比并以能準(zhǔn)確測(cè)得被分析直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測(cè)限的測(cè)定是通過對(duì)一系列已知濃度分析物的樣品進(jìn)行分析， 物的最小水平來建立。62 根據(jù)信噪比確定被該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。信噪比的測(cè)定是通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)試信號(hào)， 分析物可被可靠地檢測(cè)的最小濃度，當(dāng)信噪比在 3： 1或 2： 1時(shí)的檢測(cè)限通常是可接受的。63 根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率檢測(cè)限

13、（DL）表示為:式中：C：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差S :校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來估算，C的值可由多種途徑估算。如: 631 根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差通過幾份空白樣品的分析， 并計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差， 以測(cè)定出分析背景響應(yīng)值的大 小。通過對(duì)含有DL范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來研究其標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差632 根據(jù)校正曲線或回歸線的 y 軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可作為標(biāo)準(zhǔn)差。64 數(shù)據(jù)要求必須同時(shí)提供檢測(cè)限和測(cè)定檢測(cè)限的方法。如果DL是根據(jù)直觀評(píng)估或信噪比得來的, 提供相關(guān)證明的色譜圖是可接受的。如通過計(jì)算或外推法得到檢測(cè)限的估算值，可對(duì)一系列接近或等于檢測(cè)限樣品的逐個(gè) 分析來驗(yàn)證這一估算值

14、。7 定量限根據(jù)檢測(cè)方法是用非儀器分析還是儀器分析，可用幾種方法來測(cè)定定量限，除了下面 列出的方法外，其他方法也是可接受的。71 根據(jù)直觀評(píng)價(jià)確定的能被定直觀評(píng)價(jià)既可用于非儀器的分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限的測(cè)定一般通過對(duì)一系列含有已知濃度被分析物的樣品進(jìn)行分析， 量測(cè)定的最小量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)有可接受的準(zhǔn)確度和精密度。72 根據(jù)信噪比來確該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。信噪比的測(cè)定是通過比較含有已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)定信號(hào)，定被測(cè)物能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度。典型信噪比為10： 1。73 根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率定量限度 （QL）表示為:式中：C：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

15、S :校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來估算，C值的估算可由多種途徑得到。如:通過幾份空白樣品的分析， 并計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差， 以測(cè)定出分析背景響應(yīng)值的大731 根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差小。732 根據(jù)校正曲線校正曲線的研究應(yīng)通過對(duì)幾份含有 QL水平被分析物的樣品的測(cè)試來進(jìn)行?；貧w線的剩 余標(biāo)準(zhǔn)偏差或回收線的 y 軸截距標(biāo)準(zhǔn)偏差都可作為標(biāo)準(zhǔn)偏差。74 數(shù)據(jù)要求應(yīng)提供定量限及其測(cè)定方法?？赏ㄟ^分析一系列接近或等于定量限的樣品來驗(yàn)證這一限度。8 耐用性在方法的開發(fā)階段應(yīng)對(duì)耐用性進(jìn)行評(píng)估，它取決于所研究的分析方法的類型，表明在 方法參數(shù)范圍內(nèi)故意的變化下分析方法的可靠性。如果測(cè)量結(jié)果表明對(duì)分析條件的變化是敏感的，那么該分析條件就應(yīng)適當(dāng)控制或在方，以確法中預(yù)先聲明。耐用性評(píng)估的結(jié)果建立了一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)（如分離度試驗(yàn)） 保在任何時(shí)候使用該分析方法都是有效的。典型變化的例子：分析溶液的穩(wěn)定性， 提取時(shí)間。在