2019年沙門氏菌檢驗

1、沙門氏菌檢驗中血清學(xué)試驗常見問題、發(fā)布日期：2012-09-24 來源：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司瀏覽次數(shù)：135核心提示：沙門氏菌檢驗中血清學(xué)試驗常見問題團血清學(xué)鑒定是沙門氏菌檢驗中的重要鑒定方法，包括菌體抗原（O鑒定、鞭毛抗原（H）鑒定和Vi抗原鑒定。由于血清學(xué)試驗涉及的內(nèi)容很多，所以我們在此給大家列出幾個常見問題，以供大家在日常工作中參考。1、沙門氏菌判定時以生化試驗結(jié)果為主還是血清學(xué)試驗結(jié)果為主？我們在判定時應(yīng)該以生化試驗結(jié)果為主，在生化試驗的基礎(chǔ)上進行血清學(xué)判定。有的試驗人員會直接用多價血清進行試驗， 不進行生化試驗，這是絕對不可取的。因為血清學(xué)的原理是 抗原抗體結(jié)合，非沙門氏菌的微生

2、物也有可能帶有沙門的類似抗原的。所以我們做鑒定的時候，必須先進行生化試驗，在生化試驗的基礎(chǔ)上進行血清學(xué)鑒定。2、血清學(xué)試驗要做到什么程度？如果我們只需要鑒定某個菌株是否屬于沙門氏菌，那只需要做O多價和H多價血清就可以了。如果需要鑒定某個菌株具體是什么沙門氏菌，比如是否為鼠傷寒沙門氏菌或是否為腸炎沙門氏菌，那就需要進行血清學(xué)分型試驗，從多價血清一直做到 O抗原和H抗原的單因子，然后參照GB 4789.4-2010沙門氏菌檢驗標(biāo)準中附錄 B的表格查找對應(yīng)的沙門菌名。3、 O多價血清不凝集，就一定是O抗原陰性么？我們在做O多價血清時，如果沒有凝集并不能直接判定為陰性，因為我們還要考慮Vi抗原的影響。

3、Vi抗原屬于K抗原群，是會阻隔O抗原和相應(yīng)抗體的結(jié)合，所以有Vi抗原存在時， O多價血清是不會凝集的。GB 4789.4-2010沙門氏菌檢驗標(biāo)準中提到已知具有Vi抗原的菌型有：傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌和都柏林沙門氏菌。因此，我們必須去除Vi抗原的影響。具體方法是將待檢菌做成濃菌液，放入100C沸水中煮沸15-60分鐘，目的是破壞Vi抗原，然后再挑取菌液做 O多價血清。如果還是不凝集，才能判定為陰性。血漿凝固酶實驗的操作說明堅I 程k|發(fā)布日期：2012-09-24 來源：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司瀏覽次數(shù)：99核心提示：CM304凍干血漿用于金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實驗的操作說明團北京

4、陸橋CM304凍干血漿，用于金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實驗，操作說明如下： 在Baird-Parker平板上挑取可疑待測單菌落，或?qū)⒖梢删臃N營養(yǎng)瓊脂平板上純化，轉(zhuǎn)接至含5mlBHI液體培養(yǎng)基的試管中，36± 1C培養(yǎng) 18-24h ;BHI 吸取0.5ml無菌水到CM304凍干血漿西林瓶中，搖勻使之溶解均勻，再加入上述新鮮培養(yǎng)物0.2-0.3ml，混合均勻后放置 36± 1C培養(yǎng)。 間隔每0.5h觀察一次結(jié)果，直至 6h結(jié)束，若出現(xiàn)凝固（凝固體積大于原體積一半）即待測菌血漿凝固酶為陽性，否則為陰性。注意：測試時須同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的新鮮肉湯培養(yǎng)物作為

5、對照（建議陽性菌株可選擇金黃色葡萄球菌標(biāo)準菌ATCC6538陰性菌株可選擇表皮葡萄球菌或白色葡萄球菌標(biāo)準菌）。無菌取樣技術(shù)、*發(fā)布日期：2010-09-01瀏覽次數(shù)：4888核心提示:本單元講述了無菌取樣操作， 在討論無菌取樣的原因和采集方法之前,須要理解“無菌的”的這一術(shù)語，&d遵1本單元講述了無菌取樣操作，在討論無菌取樣的原因和采集方法之前，必須 要理解“無菌的”的這一術(shù)語，“無菌”一般用于取樣中，意味著取樣過程中， 避免操作引起污染。一個無菌樣品的采集，應(yīng)該通過這樣一種方式，即：在收集 過程中，本身應(yīng)避免污染，然后放入消毒容器中。無菌樣品的采集基本是為了支持、針對工廠的衛(wèi)生條件狀

6、況的檢查結(jié)果。一、檢驗前的準備工作：1. 包裝無菌取樣的工具：擁有正確的采取產(chǎn)品或加工過程的無菌取樣器械工具是至關(guān)重要的的。 除非 使用合適的采集工具，否則樣品的完整性會被懷疑，甚至樣品毫無意義。為了避 免沒有合適的取樣工具，建議建立一個無菌取樣的分析清單，來收集取樣工具。如果可能盛樣品的容器在最初進入加工區(qū)之前應(yīng)當(dāng)被預(yù)先標(biāo)識， 象樣品號、取樣 日期、取樣人等。這樣可以使在不同的工廠條件下的樣品取樣更為方便一些。 附 加樣品號碼一般在樣品采集中被正式確定下來，因此不用預(yù)先標(biāo)明。人員的工具設(shè)施，象工作服、發(fā)網(wǎng)或消毒處理過的清潔的鞋靴必須具備有助 于證明采集者沒有污染到食物產(chǎn)品或樣品。2. 生產(chǎn)線

7、樣品 In-Line Samples :生產(chǎn)線樣品一般是指原材料，原料生產(chǎn)用水、包裝材料或其他任何使用在生 產(chǎn)線的材料。生產(chǎn)線樣品的采集一般用來確定細菌污染源是否來自于原材料或加工序中 的某些地方。3. 環(huán)境樣品：環(huán)境樣品用細菌拭子，（注：細菌拭子樣品不能給出/測出微生物的定時結(jié) 果，因為樣品非常小，顯著微生物會經(jīng)常丟失），棉拭子的取樣部位一般來自于 食品接觸面，地板噴濺物。墻壁、頂部管道和檢驗中考察的其他潛在污染源程序，并且記錄可能的聯(lián)系，在環(huán)境樣品來源和食物產(chǎn)品的污染方面， 可以使樣品具有 意義，并且是提倡這樣做的，例如：地面噴濺水：工人從有地面污水的地方走過后又回到加工區(qū)域嗎？墻壁：墻壁

8、上面和在制品上面有昆害蟲嗎？天花板：冷凝物或噴漆有無掉落到產(chǎn)品上或被發(fā)現(xiàn)與產(chǎn)品相接觸？4. 某些準備干冰：（有的稱為 gel backs ）如果使樣品在貯運過程中保持冷卻，一些種類的制冷劑是必需的。檢查觀看 干冰袋子是否有接觸，如果泄漏可能污染樣品，你也可以用濕冰，濕冰可以由工 廠提供，然而取樣前必須清楚這一點，如果想保持樣品冷凍，干冰應(yīng)在檢驗前獲 得。盒子或制冷皿：檢驗員需要貯藏、運輸他們的樣品，如果樣品不需冷凍，那么用一個盒子即 可，但如果樣品需要冷卻，一個標(biāo)準的制冷皿或保溫箱是必須使用的， 一般來講 制冷皿隨帶著一個塑料袋，樣品可以放還袋子里，制冷劑象干冰，等可以放置在 袋外，這樣樣品被

9、冰污染的可能性就被避免了。滅菌容器：從塑料袋到滅菌的加侖漆桶，可以用于有銳利邊面的產(chǎn)品如蟹、蝦等。取樣工具：取樣工具包括：茶匙、角匙、尖嘴鉗、fovceps tongs量筒和燒杯，工具的 類型一般由取樣產(chǎn)品來決定所有取樣設(shè)施和容器的滅菌日期應(yīng)當(dāng)被檢查、 滅菌時間應(yīng)當(dāng)在儀器設(shè)施的標(biāo) 簽和包裝上標(biāo)明，一些儀器設(shè)施可以在當(dāng)?shù)貙嶒炇覝缇幚砘蛸徺I滅菌儀器，在當(dāng)?shù)貙嶒炇覝缇膬x器設(shè)施一般可以保持至少兩個月，過期后設(shè)施必須重新滅 菌。滅菌手套：滅菌手套在采樣中并非必須啟用，如果一個產(chǎn)品在樣品收集過程中必須被接 觸，那么最好讓工廠生產(chǎn)線的工人來做（加工處理產(chǎn)品的工人），將樣品放入收 集容器中，既然工人在生產(chǎn)

10、過程中處理接觸產(chǎn)品， 那么我們就不能認為他們對產(chǎn) 品又有附加的污染。當(dāng)用手套時必須用一種避免污染的方式戴上，手套的大小必須適合工作的需 要。無菌棉拭子：一般用于拭取儀器設(shè)施和工廠環(huán)境區(qū)域，使用棉拭子一般有一個正確的程 序，打開棉拭子剝掉表皮，然后必須小心的放在試管頭上，注意不要沾染棉拭子 的外端；下一步擦拭要取樣的部位，象案板頭或頂部管道，然后從試管頭上小心 翼翼地將拭子放入一一將其全部堆入直到試管中部。滅菌全包裝袋：袋子必須購買滅菌的，使用時只需撕掉封頭，用提供的地方張開袋子，將樣 品放入，然后將袋子頂端卷起，用線繩扎實牢；底部應(yīng)當(dāng)折疊兩次，以便線繩不 會穿透塑料袋，導(dǎo)致樣品泄露。當(dāng)樣品收集

11、時，樣品采集時的條件例如產(chǎn)品的溫度、 地點等，連同扦樣樣品 號嘜頭，一并記錄入檢驗員的注釋說明中，取樣的樣品可以從樣品號、采集日期、 附加樣品號，最初調(diào)查人和其他鑒別信息事區(qū)分。當(dāng)采集無菌樣品時，一條最重要的規(guī)則是：千萬別污染樣品。這需要樣品采集人非常小心地采集所有附加樣品，確保不違反這條規(guī)則。二、取樣方案微生物檢驗的特點是一個以小份樣品的檢測結(jié)果來說明一大批食品衛(wèi)生質(zhì) 量，因此，用于分析的樣品的代表性至關(guān)重要，也即樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對 結(jié)果判定產(chǎn)生重大影響。要保證樣品的代表性首先要有一套科學(xué)的抽樣方案，其次使用正確的抽樣技術(shù)，并在樣品的保存和運輸過程中保持樣品的原有狀態(tài)。一般說來，進出口

12、貿(mào)易合同對食品抽樣量有明確規(guī)定的，按合同規(guī)定抽樣； 進出口貿(mào)易合同沒有具體抽樣規(guī)定的， 可根據(jù)檢驗的目的，產(chǎn)品及被抽樣品批的 性質(zhì)和分析方法的性質(zhì)確定抽樣方案。目前最為流行的抽樣方案為icmsF推薦的 抽樣方案和隨機抽樣方案，有時也可參照同一產(chǎn)品的品質(zhì)檢驗抽樣數(shù)量抽樣，或按單位包裝件數(shù)N的開平方值抽樣。無論采取何種方法抽樣，每批貨物的抽樣數(shù) 量不得少于5件。對于需要檢驗沙門氏菌的食品，抽樣數(shù)量應(yīng)適當(dāng)增加，最低不 少于8件。ICMSFjt薦的抽樣方案ICMSF的采樣設(shè)想及其基本方法用于分析所抽樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對結(jié)果會產(chǎn)生很大影響。在某些情況 下用于分析的樣品可能代表所抽“一批” （lot

13、）樣品的真實情況，這適合于可 充分混合的液體，如牛奶和水。在“多批” （Lots或“batchers ”）食品的情況下就不能如此抽樣，因為“一批”容易包含在微生物的質(zhì)量上差異很大的多個單元。因此在選擇抽樣方案 之前，必須考慮諸多因素（ICMSF 1986）,包括：檢驗?zāi)康漠a(chǎn)品及被抽樣品的性質(zhì)分析方法ICMSF提出的采樣基本原則，是根據(jù)（1）各種微生物本身對人的危害程度 各有不同。（2）食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況：降低危害度； 危害度未變；增加危害度，來設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。目前，加 拿大、以色列等很多國家已采用此法作為國家標(biāo)準。在進行詳細敘述之前，先解釋四個代號：n系指一

14、批產(chǎn)品采樣個數(shù)。c:系指該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過合格菌數(shù) 限量的最大允許數(shù)。m系指合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開。M系指附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的 不可接受數(shù)之間的界限。1. ICMSF的采樣方法有些實驗室在每批產(chǎn)品中，僅采一個檢樣進行檢驗，該批產(chǎn)品是否合格，全 憑這個檢樣來決定。ICMSF方法與此不同，它是從統(tǒng)計學(xué)原理來考慮，對一批產(chǎn) 品，檢查多少檢樣，才能夠有代表性，才能客觀地反映出該產(chǎn)品的質(zhì)量而設(shè)定的。 ICMSF方法中包括二級法及三級法兩種。二級法只設(shè)有n c及m值，三級法則有n、c、m及M值。M即附加條件后判定合

15、格的菌數(shù)限量。（1）二級抽樣方案。自然界中材料的分布曲線一般是正態(tài)分布，以其一點 作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標(biāo)準m值，超過m值的，則為不合格品。 檢查在檢樣是否有超過m值的，來判定該批是否合格。以生食海產(chǎn)品魚為例n=5,c=0, m=10, n=5即抽樣5個，c=0即意味著在該批檢樣中，未見到有超過 m值 的檢樣，此批貨物為合格品。(2) 三級抽樣方案。設(shè)有微生物標(biāo)準 m及M值兩個限量如同二級法，超過 m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值, 如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過 M值者，則為不合格。例如：冷凍生 蝦的細菌數(shù)標(biāo)準n=5，c=3，m=l

16、0，M=l0,其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個檢樣, 經(jīng)檢樣結(jié)果，允許w 3個檢樣的菌數(shù)是在 m�M值之間，如果有3個以上檢樣 的菌數(shù)是在m�M值之間或一個檢樣菌數(shù)超過 M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合 格品。(3) . ICMSF寸食品中微生物的危害度分類與抽樣方案說明為了強調(diào)抽樣與檢樣之間的關(guān)系，ICMSF已經(jīng)闡述了把嚴格的抽樣計劃與食 品危害程度相聯(lián)系的概念(ICMSF 1986)。在中等或嚴重危害的情況下使用二 級抽樣方案，對健康危害低的則建議使用三級抽樣方案。ICMSF是將微生物的危害度、食品的特性及處理條件三者綜合在一起進行食 品中微生物危害度分類的。這個設(shè)想是

17、很科學(xué)的，符合實際情況的，對生產(chǎn)廠及 消費者來說都是比較合理的。下面結(jié)合表 1加以說明。表1、ICMSF按微生物的危害度及食品處理進行情況分類危害程度對象微生物級別食品經(jīng)不同處理后的危害度減少(加熱)無變化(冷 凍品立刻進 食)增加危害度(未 加熱吃到吃前還 有一段時間)1.食品的保藏細困數(shù)例1例2例3n=5 c=3n=5 c=2n=5 c=1二2.輕度間接指大腸困群例4例5例6級標(biāo)菌方大腸桿菌n=5 c=3n=5 c=2n=5 c=1案金黃色葡萄球菌（指標(biāo)菌）3.中度程度局 部傳播金黃色葡萄球菌例7例8例9蠟樣芽抱桿菌n=7 c=2n=5 c=1n=10 c=1產(chǎn)氣夾膜梭困1.中度程度廣沙門

18、氏菌副溶血例10例11例12-泛傳播性弧困致病性大 腸桿菌n=5 c=0n=10 c=0n=20 c=3級方案2.嚴重程度肉毒梭菌例13例14例15霍亂弧菌n=15 c=0n=30 c=10n=60 c=0傷寒沙門氏菌副傷寒沙門氏菌注：表中“減少”系指食品經(jīng)加熱殺死污染的細菌。“無變化”系指微生物數(shù)不增減例如冷凍食品或干燥食品。“增加”系指將食品保存在不良環(huán)境中使微生物易于繁殖和產(chǎn)毒。根據(jù)上表15種情況的舉例，1-3可用三級法，4-5可用二級法來判定是否合考慮到以上15種情況，分別設(shè)定不同的取檢樣數(shù)及檢樣污染數(shù)，在 1-9例 種檢樣需采5個（n=5），而污染檢樣數(shù)設(shè)定為c=3, 2, 1。在1

19、0-15例用二級 法則不得檢出該致病菌c=0。例如冷凍食品，細菌數(shù)按例2，大腸菌按例5，金 黃色葡萄球菌按例8,沙門氏菌按例11的二級法判定。對食品處理應(yīng)酌情考慮，例如生肉火腿中的金黃色葡萄球菌， 被腐敗菌所抑 制，不易發(fā)生食物中毒，適用例7和例&烹調(diào)加工后的熟肉，對腐敗菌沒有抵 抗力，則易發(fā)生食物中毒，適用例 9。加熱鹽腌的火腿，水分活性為0.86以下, 金黃色葡萄球菌有增殖的可能性，因此適用例 9。沙門氏菌水活性在0、94以下 不能繁殖，適用例11,如上所述，應(yīng)根據(jù)各種食品的危害度進行設(shè)定。ICMSF方法是以二級法、三級法和抽樣的概念為基礎(chǔ)，再將微生物的知識加 進來，則可以提出各種

20、食品的微生物標(biāo)準。如表 2。為了安全，冷凍生蝦加熱吃，減少危害度適用例 1、4、10。冷凍加工蝦， 為了不加熱就食，在解凍中有增強危害度的可能性，適用例3、6、9、12,對象微生物特別指定金黃色葡萄球菌腸毒素， 兩者雖菌數(shù)限量是相同的，但情況有所 不同，分別適用c=3, c=1，因此不依靠菌數(shù)限量，而用合格率來控制。表2、ICMSF下的微生物標(biāo)準食品名稱檢杳項目例級別nc困數(shù)限量/gmM冷凍生蝦細困數(shù)1353106107大腸困群43534400金黃色葡萄球菌435310332X 10副溶血性弧菌10250102I I冷凍烹調(diào)細困數(shù)3351106107蝦大腸菌群63514400金黃色葡萄球菌93

21、511032X 103副溶血性弧菌12250102（4）.隨機抽樣方案在現(xiàn)場抽樣時，可利用隨機抽樣表進行隨機抽樣。隨機抽樣表系用計算機隨 機編制而成，包括一萬個數(shù)字。其使用方法如下：a. 先將一批產(chǎn)品的各單位產(chǎn)品（如箱、包、盒等）按順序編號。如將一批600包的產(chǎn)品編為1、2600。b. 隨意在表上點出一個數(shù)。查看該數(shù)字所在的行和列。如點在第48行、第10列的數(shù)字上。c. 根據(jù)單位產(chǎn)品編號的最大位數(shù)（如 A1，最大為三位數(shù)），查出所在行的 連續(xù)列數(shù)字（如A2所點數(shù)為第48行、第10、11和12列，其數(shù)字為245）,則 編號與該數(shù)相同的那一份單位產(chǎn)品，即為一件應(yīng)抽取的樣品。d. 繼續(xù)查下一行的相同

22、連續(xù)列數(shù)字（如按 A3即第49行的第10、11和12 列的數(shù)字，為608）。該數(shù)字所代表的單位產(chǎn)品為另一件應(yīng)抽取的樣品e.依次按A4所述方法查下去。當(dāng)遇到所查數(shù)超過最大編號數(shù)量(如第 50 行的第10、11和12列的數(shù)字為931、大于600)則舍去此數(shù)，繼續(xù)查下一行相 同列數(shù)，直到完成應(yīng)抽樣品件數(shù)為止。三、抽樣方法確定了抽樣方案以后，抽樣方法對抽樣方案的有效執(zhí)行和保證樣品的有效性 代表性至關(guān)重要。抽樣必須遵循無菌操作程序，抽樣工具如整套不銹鋼勺子、鑷 子、剪刀等應(yīng)當(dāng)高壓滅菌，防止一切可能的外來污染。容器必需清潔、干燥、防 漏、廣口、滅菌，大小適合盛放檢樣。抽樣全過程中，應(yīng)采取必要的措施防止食

23、品中固有微生物的數(shù)量和生長能力發(fā)生變化。 確定檢驗批，應(yīng)注意產(chǎn)品的均質(zhì)性 和來源，確保檢樣的代表性。常見的抽樣方法有：1 直接食用的小包裝食品：盡可能取原包裝，直到檢驗前不要開封，以防污染。2.統(tǒng)裝或大容器包裝的液體食品：(1) .抽樣前搖動或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達到均質(zhì)；(2) .抽樣時應(yīng)先將抽樣用具浸入液體內(nèi)略加漂洗，然后再取所需量的樣 品，裝人滅菌盛樣容器的量，不應(yīng)超過其容量的四分之三，以便于檢驗前將樣品 搖勻；(3) .取完樣品后，應(yīng)用消毒的溫度計插入液體內(nèi)測量食品的溫度，并作 記錄。盡可能不用水銀溫度計測量，以防溫度計破碎后水銀污染食品；(4) .如為非冷藏易腐食品，應(yīng)迅速將所抽樣品冷卻至0-4 Co3 統(tǒng)裝或大容器包裝的固體和固體食品:(1) .每份樣品應(yīng)用滅菌抽樣器由幾個不同部位采取，一起放入一個滅菌 容器