膽結(jié)石患者血清結(jié)合膽汁酸測定的臨床研究

1、膽結(jié)石患者血清結(jié)合膽汁酸測定的臨床研究摘要：目的：探討血清結(jié)合膽汁酸對于膽結(jié)石的治療及早期預防的價值。方法：應用高效液相色譜法（HPLC），定量測定20例膽結(jié)石病人和15例正常對照者血清中七種結(jié)合膽汁酸含量。結(jié)果：膽結(jié)石組血清總結(jié)合膽汁酸量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均較對照組高（P0.050.01）。而且CA/CDCA比值及DCA%也顯著高于正常對照組（P0.05）。結(jié)論：膽結(jié)石的形成與膽汁酸代謝紊亂密切相關(guān)，CA/CDCA比值及DCA%升高，可作為膽結(jié)石形成的危險信號。關(guān)鍵詞：膽結(jié)石；膽汁酸；高效液相色譜法分類號：R657.4+2文獻標識碼：A文章編號：1001-90

2、57(2000)01-0034-02Clinic study of serum conjugated bile acid in patient with gallstonAbstract：Objective：To study the value of serum conjugated bile acid on therapy and early prevention of patient with gallstone.Method：Seven kinds of serum conjugated bile acid in 20 patients with gallstone and 15 nor

3、mal controls were measured by HPLC.Results：The levels of serum conjugated bile acid and GCA,TCA,GDCA,TDCA,TCDCA in patients were significantly higher than those in controls (P0.050.01).The ratio of CA/CDCA and percentage of DCA were increased sharply (P0.05)。Conclusion：The formation of gallstone was

4、 related to alteration of bile acid matabolism.lncreasing of CA/CDCA and DCA% may be dangerous signals of gallstone.Key words：Gallstone；Bile acid；HPLC隨著生活水平的提高及飲食習慣的改變，目前膽石癥已成為一種常見病。有資料表明，膽結(jié)石的發(fā)病率呈上升趨勢。膽汁酸代謝紊亂與膽結(jié)石的形成有密切關(guān)系，我們應用反相高效液相色譜法檢測血清結(jié)合膽汁酸，了解膽結(jié)石的成因，預測膽汁成份，為臨床預防膽結(jié)石及溶石治療提供依據(jù)。對象與方法一、對象：(1)對照組：健康體檢者

5、15例，排除肝膽腸及其他器質(zhì)性疾病。男性6例，女性9例；年齡51歲74歲，平均年齡(62.536.90)歲。(2)膽結(jié)石組：B超示膽囊結(jié)石患者20例，排除肝膽腸及其他器質(zhì)性疾病。男性7例，女性13例；年齡35歲76歲，平均年齡(57.9012.83)歲。二、方法：清晨空腹抽血3ml，分離血清。(1)作出標準色譜圖，出峰順序依此為：TCA-TCDCA-TDCA-TLCA-GCA-GCDCA-GDCA。(2)標本預處理。(3)高效液相色譜法進樣檢測。三、數(shù)據(jù)處理用外標法計算。統(tǒng)計學處理用均數(shù)標準差(s)表示，結(jié)果用t檢驗。結(jié)果血清總結(jié)合膽汁酸含量及GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA含量

6、檢測結(jié)果見附表。膽結(jié)石組均較正常對照組高(P0.050.01)，而TCDCA、GCDCA、TLCA、G/T值與正常對照比較無顯著性差異(P0.05)，CA/CDCA比值及DCA%也顯著高于對照組(P0.05)。附表兩組血清總結(jié)合膽汁酸含量及七種結(jié)合膽汁酸含量結(jié)果比較(s)組別 GCA GCDCA GDCA TCA TCDCA TDCA 對照組(15例) 1.490.69 2.020.92 0.750.34 1.290.48 2.510.59 1.170.48 膽結(jié)石組(20例) 2.802.08* 2.291.64 2.692.37* 3.713.27* 3.932.69 2.821.97*

7、組別 TLCA TOTAGL G/T CA/CDCA DCA% 對照組(15例) 0.600.21 9.911.38 0.830.30 0.620.24 18.585.66 膽結(jié)石組(20例) 0.721.01 18.969.90* 0.770.53 1.651.76* 26.6610.94* 注：G/T為(GCA+GCDCA+GDCA)/(TCA+TCDCA+TDCA+TLCA)；CA/CDCA為(GCA+TCA)/(GCDCA+TCDCA)；DCA%為(GDCA+TDCA)/TOTAL100%。與對照組比較*P0.05，*P0.01。討論膽汁酸是膽汁的主要成分，在人體中主要有膽酸、鵝脫氧膽

8、酸、脫氧膽酸、石膽酸組成。而大部分膽汁酸通過肽鍵與甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合成甘氨膽酸(G)或?；悄懰?T)。膽汁酸參與微膠粒的形成，從而使不溶于水的膽固醇和非結(jié)合膽紅素溶于膽汁，各種原因引起的膽汁中膽汁酸含量下降，使膽固醇和膽紅素的溶解度降低，使膽固醇結(jié)晶和非結(jié)合膽紅素顆粒在成核因子共同作用下形成膽固醇結(jié)石和膽紅素結(jié)石。膽汁酸由肝細胞通過主動轉(zhuǎn)運分泌入膽汁，進入小腸后95%98%的膽汁酸在回腸末段重吸收，經(jīng)門靜脈返回肝臟，形成膽汁酸的腸肝循環(huán)。經(jīng)門靜脈回流的膽汁酸80%以上被肝細胞的竇膜有效攝取，僅少量未被攝取膽汁酸進入外周的血液循環(huán)。外周血的結(jié)合膽汁酸能反映腸肝循環(huán)的動態(tài)平衡，并且血清和膽汁中的膽

9、汁酸呈相對應的關(guān)系。膽結(jié)石患者由于肝臟膽汁酸合成酶7-羥化酶活性降低，膽汁酸的合成減少，使得膽汁酸池體積縮小。此外，膽囊內(nèi)的膽汁淤滯，膽囊的形態(tài)和功能發(fā)生變化，膽囊將膽汁中的膽汁酸吸收入血。而膽汁酸池體積大小與膽汁酸的循環(huán)率呈負相關(guān)，循環(huán)率增加，使膽汁酸 的丟失增多，從而更降低了膽汁酸池的體積，易于形成膽結(jié)石。本研究發(fā)現(xiàn)，膽結(jié)石組血清七種結(jié)合膽汁酸總量顯著增高（P0.01）。說明膽結(jié)石患者存在著明顯的膽汁酸池體積縮小，從而使膽固醇、磷脂、膽汁酸三者的比例失調(diào)，膽汁膽固醇過飽和、析出，形成膽結(jié)石。此外，膽結(jié)石組的GCA、TCA、GDCA、TDCA、TCDCA量均較對照組高。而TCDCA、GCDC

10、A、TLCA與對照組比較無顯著性差異。顯示膽結(jié)石患者還存在著膽汁酸成份的改變。結(jié)合CDCA量在總量中比例明顯下降，致使CA/CDCA比例升高，而CDCA能抑制膽固醇合成限速酶（HMG-CoA）的活性，使膽固醇合成減少；反之，則增加膽汁的成石性。也有研究更重視DCA的成石性，它的親水性比CD和CACA更弱，無論是5小時的短期替代或3周4周的長期口服，能引起更多的膽固醇分泌。大樣本相關(guān)分析證實，DCA的相對濃度與膽固醇飽和指數(shù)（CSI）呈正相關(guān)，CDCA與CSI呈負相關(guān)4。本研究發(fā)現(xiàn)GDCA、TDCA值較對照組顯著增高(P0.01)，DCA%較對照組顯著增高(P0.05)。結(jié)合DCA增多可引起肝臟

11、分泌過飽和膽固醇膽汁，主要是由于它的疏水因素以及DCA比其它膽汁酸有更強的極性，導致膽固醇從小管濾出；另一方面，DCA可抑制CDCA的合成以及替代CDCA的吸收，使CDCA量下降。有研究表明，結(jié)合DCA能抑制膽汁酸的合成，主要是抑制膽汁酸合成酶7-羥化酶活性5。因此，結(jié)合DCA通過抑制膽汁酸的合成，使得膽汁酸池體積縮小，影響CSI，作用結(jié)石的成核過程，促進粘蛋白分泌增加和使膽囊運動過緩，使膽結(jié)石易于形成。通過測定血清結(jié)合膽汁酸濃度了解膽結(jié)石時膽汁酸代謝的變化，而血清結(jié)合DCA濃度增高是膽汁成石性的表現(xiàn)，是膽石形成的危險信號。此外，通過快速、簡便的測定血清結(jié)合膽汁酸濃度，可用于溶石治療的生化監(jiān)測

12、，為治療期間的用藥劑量及療效提供依據(jù)。測定血清結(jié)合膽汁酸對于膽結(jié)石的治療及早期預防有臨床應用價值。參考文獻：1 Sealic S,Nilsell k,Barbara L,et al.HPLC Assay of Conjugated Bile Acids in Human Fluids Using on-Line Sample Pretreatment on a Standard Isocratic Chromatograph.Clin Chim Acta,1994,224(2)181-188.2 Vescina MC,Dial EJ,Romero JJ,et al.Evalution of F

13、aecal Bile Acid Profiles by HPLC after Using Disposable Solid-phase Columns.J Pharm Biomed Anal,1993,11(11-12)1331-1339.3 Roda A,Laokso M,Suhoren M,et al.HPLC Study of the Impurities Present in Different Ursodeoxycholic Acid Preparations:Comparative Evaluation of Four Detections.J Pharm Biomed Anal,1993,11(8)751-780.4 Donald M.1992 Aspen Bile Acid/Cholesterol/Lipoprotein Conference.Report of a Conference.J Lipid Res,1993,34(5)680-6