LC_MS_MS法測定人血漿中羅紅霉素的血藥濃度

1、品在檢測時未發(fā)現(xiàn)此物。3. 5本法經(jīng)試驗(yàn), 表明靈敏度高, 準(zhǔn)確度好, 可作為為異福medicati onsJ .Chin J Chin Phar macol . (中國臨床藥理學(xué)雜志 , 1998, 14(4 :2392243.2Ch . P (2005 Vol (中國藥典2005年版. 二部 S .2005:2652267.雙釋膠囊的內(nèi)在質(zhì)量控制。REFERENCES1L IM. Pr ogress on the fixed 2doxe combinati ons of antitubercul ous收稿日期:2007212218LC /MS/MS法測定人血漿中羅紅霉素的血藥濃度何夕典,

2、 袁波, 徐海燕122(1. 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科, 沈陽2. 摘要:目的建立LC /MS/MSia C 18色譜柱, 流動相甲醇2水2甲酸(75-1250. 5 , 流速為0. 5mL m in 。:SI M , 血漿樣品用乙醚提取濃集, 進(jìn)行LC /MS/MS分析。結(jié)果本方法在0. 140. g 1(r 0. 9997 , 平均回收率87. 6%, 日內(nèi)和日間RS D <10%。結(jié)論本方法快速、準(zhǔn)確, 。關(guān)鍵詞:液質(zhì)聯(lián)用; 血藥濃度中圖分類號:R969. 11文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:100727693(2008 0520424203D eter m i n a ti on

3、 of the Concen tra ti on of Rox ithrom yc i n i n the Hu man Pl a s ma by LC /MS /MS1, 22HE Xi 2dian Y UAN Bo , XU Hai 2yan (1. The First A ffiliated Hospital of China M edical U niversity, Shenyang 110001, China; 2.School of Phar m acy, Shenyang Phar m aceutical U niversity, Shenyang 110016, China

4、ABSTRACT:OBJECT I VE To establish a LC /MS/MS method t o deter m ine the concentrati on of r oxithr omycin in the hu man p las ma . M ETHOD S The assay was conducted on the D ia monsil C 18colu mn with methanol 2water 2methane acid (75250. 5 as the mobile-1phase, running at a fl ow rate of 0. 5mL m

5、in . LC /MS/MS was perf or med in the selected i on monit oring (SI M mode . Theclarithr omycin was used as the internal standard . The p las ma samp les were extracted with diethyl ether and deter m ined by LC /MS/MS . RESUL TS The linear calibrati on curve was obtained in the concentrati on range

6、of 0. 140. 0g mL-1(r =0. 9997 , therecovery of within 2day RS D and bet w een 2day RS D were <10%.CO NCL US I O N The method is shown t o be convenient, accurate, rap id, and suitable for the deter m inati on of r oxithr omycin in the hu man p las ma and phar macokinetic studies of r oxithr omyci

7、n . KE Y WO R D S:LC /MS/MS;r oxithr omycin; p las ma drug concentrati on羅紅霉素(Roxithr omycin 是一種半合成大環(huán)內(nèi)酯類抗生素, 對革蘭陽性菌、部分革蘭陰性菌、厭氧菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等均有較強(qiáng)的抗菌作用。臨床證明, 羅紅霉素對治療呼吸道感染、泌尿生殖道感染、皮膚和軟組織感染方面效果顯著。羅紅霉素具有口服吸收好、對胃酸穩(wěn)定、生物利用度好、血和組織中含量高、不良反應(yīng)小、半衰期長等優(yōu)點(diǎn)。有關(guān)羅紅霉素的血藥濃度分析, 多采用微生物法1和高效液相色譜-電化學(xué)檢測器2中羅紅霉素的血藥濃度。1儀器與試劑1. 1儀

8、器TS Q Quantu m U ltra 液相色譜2三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀,電噴霧離子源(ESI 源 , Surveyor LC 泵, Surveyor 型自動進(jìn)樣器以及Xcalibur 1. 3數(shù)據(jù)采集軟件(美國Finnigan 公司 ;M icr os oft Excel 2000數(shù)據(jù)處理軟件(美國微軟公司 ; TG L 216C 型離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠 ; X W 280A 旋渦混合器(上, 而微生物法操作繁瑣、周期長, 電化學(xué)檢測器一般實(shí)驗(yàn)室難以具備。由于羅紅霉素結(jié)構(gòu)中無共軛基團(tuán), 只在紫外末端吸收, 用紫外檢測器檢測靈敏度低, 需預(yù)先對血樣進(jìn)行提取濃集, 文獻(xiàn)報道325的提取方法回

9、收率低, 操作繁瑣。本實(shí)驗(yàn)建立了LC /MS/MS法來測定人血漿海精科實(shí)業(yè)有限公司 。1. 2藥品及試劑羅紅霉素對照品(純度99. 6% , 內(nèi)標(biāo)克拉霉素(純度99. 8% 均購于中國生物制品檢定所; 甲醇為色譜純(山東禹作者簡介:何夕典, 男, 主管藥師Tel:(024 2325666626158E 2mail:G AO_M ing9778yahoo . com. cn 424Chin J MAP, 2008Oct ober, Vol . 25No . 5中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志2008年10月第25卷第5 期王試劑廠 ; 甲酸、乙醚和碳酸鈉為分析純(沈陽化學(xué)試劑廠 ; 空白血漿由沈陽中心血站提

10、供。2方法2. 1試驗(yàn)條件2. 1. 1色譜條件色譜柱為D ia monsil C 18柱(150mm ×4. 6mm, 5m ; 流動相為甲醇2水2甲酸(75250. 5 , 流速為0. 5mL m in-12. 3血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取空白血漿50L, 加羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50L , 配制成相當(dāng)于羅紅霉素血漿濃度為0. 1, 0. 4, 1. 0, 4. 0, 10. 0, 40. 0g mL 的樣品, 按“血漿樣-1品處理”依法操作, 每一濃度進(jìn)行雙樣本分析, 進(jìn)樣20L, 記錄色譜圖; 以待測物濃度為橫坐標(biāo), 待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo), 用加權(quán)最小二乘法6進(jìn)行回歸運(yùn)

11、算, 求-2得的直線回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線y =2. 748×10x -4. 666-3×10, r =0. 9997, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線, 羅紅霉素血漿濃度測定, 柱溫:室溫。2. 1. 2質(zhì)譜條件ESI 離子源; 源噴霧電壓為4. 0k V; 加熱毛細(xì)管溫度為300; 鞘氣(N 2 壓力25A rb; 輔助氣(N 2 壓力5A rb; 碰撞氣(A r 壓力1. 2mTorr; 羅紅霉素和克拉霉素的碰撞誘導(dǎo)解離(C I D 電壓都為25e V; 正離子方式檢測; 掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(SR M , 用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m /z 837. 5(m /z 679. 3羅紅

12、霉素 和m /z 748. 5(m /z158. 1(克拉霉素 ; 掃描時間為0. 3s 。2. 2樣品的處理方法2. 2. 1樣品的預(yù)處理方法的線性范圍為0. 140. 0g mL -1。2. 4方法專屬性與檢測限離子化方式下, 主要生成+準(zhǔn), 為m /z 837. 5和m /z748. +H 進(jìn)行產(chǎn)物離子掃+m /z 679. 3和m /z 158. 1, 將。分別取6名受試者的空白血漿50L, 除不加內(nèi)標(biāo)外, 按“血漿樣品的處理”依法操作, 進(jìn)行LC /MS/MS 分析, 獲得空白血漿樣品的色譜圖, 如圖1A; 將一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液加入空白血漿中, 依同法操作, 得色譜圖, 如

13、圖1B, 其中羅紅霉素的保留時間約為4. 7m in, 內(nèi)標(biāo)克拉霉素的保留時間約為4. 2m in; 取健康受試者給藥后收集的血漿樣品, 依同法操作, 得色譜圖, 如圖1C 。結(jié)果表明, 空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測物及內(nèi)標(biāo)物的測定。最低檢測限為0. 06g mL -1 。血2mL, 上下震蕩, -15m in, 分離上層血漿, 貯存。2. 2. 2血漿樣品的處理向50L 血漿中分別加入50L 內(nèi)標(biāo)溶液(克拉霉素10g mL -1 和0. 05mol L -1Na 2C O 330L, 混勻; 加1mL 提取溶劑乙醚, 渦流混合1m in, 往復(fù)振蕩10m in (180次m in-1, 離

14、心5m in (4000r m in-1, 分取上層有機(jī)相于另一試管中, 于40空氣流下吹干, 殘留物加入1mL 流動相溶解, 渦流混合, 取20L 進(jìn)行LC /MS/MS分析。圖1測定血漿中羅紅霉素和內(nèi)標(biāo)克拉霉素的質(zhì)譜圖A -空白血漿; B -空白血漿加入羅紅霉素至0. 4000g mL -1和內(nèi)標(biāo)克拉霉素至80. 00g mL -1; C -受試者口服含200mg 羅紅霉素參比制劑后2. 5h 血漿樣品(峰I 為羅紅霉素, 峰II 為克拉霉素F i g 1Chr omat ogram s of r oxithr omycin and internal standard clarithr o

15、mycinA -blank p las ma; B -blank p las ma with r oxithr omycin 0. 4000g mL -1and internal standard clarithr omycin 80. 00g mL -1; C -healthy volunteer p las ma sa mp le 2. 5h after a oral dose of 200mg r oxithr omycin (I :r oxithr omycin; II :clarithr omycin 2. 5血漿樣品提取回收率取空白血漿50L, 按“血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下的方法配

16、制羅紅霉素低、中、高三個濃度(分別為0. 1, 4. 0, 32. 0g mL -1 的質(zhì)量控制(QC 樣品, 6樣本, 連續(xù)測定3d, 并與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時進(jìn)行, 計算QC 樣品的測得濃度, 與配制濃度對照, 求得本法的準(zhǔn)確度與精密度, 數(shù)據(jù)見表1。日內(nèi)精密-2-3度標(biāo)準(zhǔn)曲線y =3. 694×10x -7. 682×10, r =0. 9995; 日取空白血漿50L, 按“血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下的方法制備羅紅霉素低、中、高三個濃度點(diǎn)(0. 1, 4. 0, 32. 0g mL -1 的樣品, 每一濃度進(jìn)行6樣本分析。同時另取空白血漿50L, 除不加標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和內(nèi)標(biāo)外,

17、按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下操作, 向提取的上清液中加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)各50L, 渦流混合, 40空氣流下吹干。殘留物以1mL 流動相溶解, 進(jìn)樣分析, 獲得相應(yīng)峰面積(3次測定的平均值 。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算提取回收率。羅紅霉素在0. 1, 4. 0, 32. 0g mL -1三個濃度的血漿樣品提取回收率分別為85. 1%、87. 3%和90. 5%。2. 6精密度試驗(yàn)間精密度標(biāo)準(zhǔn)曲線y =5. 129×10-2x -3. 782×10-3, r =0. 9996。2. 7穩(wěn)定性的考察本實(shí)驗(yàn)考察了羅紅霉素血漿樣品經(jīng)液2液萃取處理后室溫放置24h 的

18、穩(wěn)定性, 血漿樣品室溫放置2h 的穩(wěn)定性, 血漿樣品-20放置30d 及血漿樣品經(jīng)歷3次冷凍(解凍循425中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志2008年10月第25卷第5期Chin J MAP, 2008Oct ober, Vol . 25No . 5表1人血漿中羅紅霉素的準(zhǔn)確度與精密度Tab 1Accuracy and p recisi on of Roxithr omycin in hu man p las ma 加入量-10. 104. 0032. 0限為0. 06g mL -1。標(biāo)準(zhǔn)曲線在0. 140. 0g mL -1內(nèi)線性關(guān)系良好(r =0. 9997 。故此法有較高的靈敏度和專屬性, 能夠滿足生

19、物樣品測定的要求。采用LC /MS/MS 法測定羅紅霉素的含量, 有檢測時間短、靈敏度高、重復(fù)性好及血漿預(yù)處理方法簡單、易操作的優(yōu)點(diǎn), 在實(shí)際的臨床藥動學(xué)研究和血藥濃度檢測工作中有廣泛的應(yīng)用前景。REFERENCES1WANG H, ZHANG Q Y, SH I A M. Detecti on of Roxithr omycin content in human bl ood p las ma by HP LC J .Anti 2infecti on Phar macy, 2005, 2(1 :252DA I HU C omycin and Its Related J .2002, 22(3

20、 :1852188. H REN J M. Detecti on of Roxithr omycin in human bl ood p las ma by RE 2HP LC J .Journal of He Bei medical University, 2005, 26(5 :3532354. 4TI A N L, Z HONG D F . Detecti on of Roxithr omycin in human bl ood p las ma by HP LC 2EC J .Chin Phar m J (中國藥學(xué)雜志 , 1999, 34(7 :480483. 5TI A N J,

21、HU C Q. D iscussi on of Roxithr omycin and its related substances by high 2s peed column HP LC J .Chin J Phar m Anal (藥物分析雜志 , 2003, 23(6 :4342438.測得值-10. 10±0. 013. 88±0. 1331. 20±1. 8日內(nèi)精密度6. 73. 45. 7測得值-10. 10±0. 0063. 98±0. 0931. 40±2. 1日間精密度6. 42. 26. 7環(huán)的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性考察時

22、, 取空白血漿50L, 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下的方法配制羅紅霉素低、高兩個濃度的血漿樣品(羅紅霉素濃度分別為0. 1和32. 0g mL-1, 每一種濃度水平進(jìn)行3樣本分析, 采用LC /MS/MS法測定。數(shù)據(jù)表明:處理后的血漿樣品室溫放置24h 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在±7. 9%之內(nèi) , 血漿樣品室溫放置2h 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在±5. 2%之內(nèi) , 血漿樣品-20放置30d 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在±6. 9%之內(nèi) 紅霉素血漿樣品經(jīng)過3次冷凍(3. 7%之內(nèi) 。3討論的預(yù)處理方法, 簡單易操作, 使用樣品量少。選用克拉霉素作為內(nèi)標(biāo), 其中羅紅霉素的保留時間約為4. 7m in

23、, 內(nèi)標(biāo)克拉霉素的保留時間約為4. 2m in; 結(jié)果表明, 空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測物及內(nèi)標(biāo)物的測定。本方法提取回收率均大于85%, 日內(nèi)及日間精密度(RS D 均小于10%, 最低檢測收稿日期:2007207212高效毛細(xì)管電泳法測定育亨賓樹皮中育亨賓的含量李開俊, 陳琴華71006111, 2, 張卓, 朱軍, 張曉川211(1. 鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬東風(fēng)總醫(yī)院, 湖北十堰442008; 2. 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 西安摘要:目的建立高效毛細(xì)管電泳(HPCE 測定育亨賓樹皮中育亨賓含量的方法。方法運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳方法, 熔融石-1英毛細(xì)管(75m I D ×50cm , 緩沖液為20mmol L 磷酸鹽緩沖液(PH =3. 0 , 檢測波長:270n m, 分離電壓:15k V, 柱溫25, 用0. 45m 微孔濾膜過濾后進(jìn)樣, 壓力進(jìn)樣:50mbar ×5s 。結(jié)果方法最低檢測濃度為0. 1g mL -1, 線性范圍1200g mL -1, r =0. 9991, 線性關(guān)系良好。精