大氣中苯并檢出方法及檢出限

1、大氣中苯并(a)芘的測定方法苯并a芘是多環(huán)芳香烴類化合物，又名3，4苯并芘，簡稱Bap，分子式C20H12；分子量253.23；沸點(diǎn)475；熔點(diǎn)179；相對密度1.351。3，4苯并芘純品為無色或微黃色針狀結(jié)晶，在水中溶解度較小，易溶于苯、氯仿、乙醚、丙酮、環(huán)己烷、二甲苯等有機(jī)溶劑。在苯中溶解呈藍(lán)色或紫色熒光，在濃硫酸中呈桔紅色并伴有綠色熒光。3，4苯并芘是環(huán)境中普遍存在的對動物致癌性很強(qiáng)的一種物質(zhì)，主要是含碳燃料及有機(jī)物熱解過程中的產(chǎn)物。煤炭、石油等在無氧加熱裂解過程中產(chǎn)生的烷烴、烯烴，經(jīng)過脫氫、聚合，常可產(chǎn)生一定數(shù)量的3，4苯并芘。工廠煙氣中的懸浮顆粒物上吸附有3，4苯并芘，散布在大氣，一

2、部分降落到水面和陸地上，從而污染水源和土壤。煉焦、化工、染料等工廠排出的工業(yè)廢水中以及熏制食品、香煙煙霧中均含有3，4苯并芘。3，4苯并芘對動物具有局部和全身的致癌作用，對猴子反復(fù)皮下注射可在局部形成腫瘤，從氣管反復(fù)滴注可形成肺癌，在小鼠身上涂抹可使小鼠誘發(fā)皮膚癌。流行病學(xué)調(diào)查認(rèn)為人的肺癌與環(huán)境中3，4苯并芘的含量之間有著極為密切關(guān)系。雖然目前各國尚無公認(rèn)3，4苯并芘的最高容許濃度，但通過動物試驗(yàn)和現(xiàn)場調(diào)查提出了一些建議，例如：車間空氣中3，4苯并芘最高容許濃度為0.14g/m3；居民區(qū)大氣最高容許濃度為103g/m3。飄塵上有機(jī)物的組分異常復(fù)雜，僅其中多環(huán)芳烴(簡稱PAH)就有幾百種之多。測

3、定3，4苯并芘的方法很多，主要是將3，4苯并芘與其他多環(huán)芳烴分開，常用的有柱層、紙層、薄層、氣相色譜、高壓液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)機(jī)等一系列分離體系。其中以氣相色譜法分離PAH尤為重要。利用氣相色譜法分離迅速、效能高，再與薄層層析結(jié)合起來，可以迅速判斷提取物中某些PAH的存在。特別是用毛細(xì)管色譜與質(zhì)譜及核磁共振譜聯(lián)用，從城市懸浮顆粒物、煙草焦油及汽車廢氣中，可分離出100多種PAH，極大地發(fā)揮了氣相色譜的分離效能。用高壓液相色譜法分離PAH比氣相色譜法具有以下優(yōu)點(diǎn)：工作溫度低(80)對被分離的各組分可以完整地收集起來，再進(jìn)一步的用紫外或熒光光譜分析。色譜柱是十八烷基硅烷(ODS)化學(xué)鍵為固定相。被檢樣

4、品在注入分離柱前，最好先經(jīng)過薄層作初步分離，除去其中混雜的烷烴、烯烴、雜環(huán)等化合物，以減輕分離柱的負(fù)擔(dān)，此種方法可以和薄層層析聯(lián)用，是一種快速鑒定PAH較好的方法。柱層、紙層和薄層層析法，所需設(shè)備簡單、操作容易，易于掌握和推廣。但是，柱層析法和紙層析法所需時(shí)間長，分離效果較差，無法排除PAH異構(gòu)體之間的干擾，使之不能精確定量。為了改進(jìn)分離效果，可以先經(jīng)過柱層析，再在乙酰化紙上進(jìn)行分離。乙?；w維素薄層分離同分異構(gòu)體效果較其他薄層為好。采用兩種吸附劑(如氧化鋁和40%乙酸的乙?；w維素)混合制板，進(jìn)行雙向展開，第一向用正烷苯(91)，第二向用甲醇乙醚水(441)。這時(shí)可以將干擾3，4苯并芘的幾種

5、干擾物分離，進(jìn)行幾種主要PAH的定量測定。一、高效液相色譜法1(一)原理空氣中顆粒物中的多環(huán)芳烴被采集在玻璃纖維濾紙上，經(jīng)索氏提取或真空升華后，用高效液相色譜分離測定，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。(二)儀器(1)大流量采樣器見第十二章第一節(jié)總懸浮顆粒物大流量采樣稱量法。(2)索氏提取器容量60ml。(3)升華管見圖69。(4)真空升華裝置 見圖610。(5)濃縮器及濃縮瓶 見圖6-11(6)微量注射器 10l、20l，刻度應(yīng)校正。(7)離心機(jī) 4000rpm。(8)離心管 5ml，刻度應(yīng)校正。(9)高效液相色譜儀 附熒光檢測器或紫外檢測器。(三)試劑(1)玻璃纖維濾紙規(guī)格見第十二章第一節(jié)

6、總懸浮顆粒物。濾紙需作預(yù)處理，方法是將濾紙不重疊地放在高溫爐中，經(jīng)500灼燒30min，保存?zhèn)溆谩?2)色譜柱 內(nèi)徑4mm，長20cm不銹鋼柱，內(nèi)裝YWGCH型微粒硅膠粒子(10m)，塔板數(shù)為30000/m，柱壓不超過5MPa。(3)苯 重蒸餾。(4)甲醇 重蒸餾。(5)環(huán)己烷 重蒸餾。(6)堿性氧化鋁 200300目。(7)標(biāo)準(zhǔn)溶液 取一個(gè)10ml棕色容量瓶，準(zhǔn)確稱量，然后小心加入約10mg苯并a芘，再準(zhǔn)確稱量，兩次稱量之差即為苯并a芘質(zhì)量。加苯溶解并稀釋至刻度，計(jì)算每毫升溶液中苯并a芘的含量。然后再用甲醇稀釋成1.00ml含100g苯并a芘的貯備液。臨用時(shí)，用甲醇稀釋成1.00ml含2g苯

7、并a芘的標(biāo)準(zhǔn)溶液。貯于棕色容量瓶中，置冰箱中保存。(四)采樣采樣方法同第十二章第一節(jié)中“總懸浮顆粒物大流量采樣重量法”(五)分析步驟1.液相色譜儀測試條件分析時(shí)，應(yīng)根據(jù)液相色譜儀的型號和性能制定能測定苯并a芘的最佳測試條件。柱溫：室溫。流動相：(31)甲醇水。流動相溫度：40。流量：1ml/min。柱壓：4MPa。檢測器：紫外檢測器波長254nm。熒光檢測器激發(fā)波長 365nm。熒光檢測器發(fā)射波長 405nm。2.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定校正因子在作樣品測定的同時(shí)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或測定校正因子。(1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將液相色譜儀調(diào)至最佳測試條件，如用紫外檢測器，可用微量注射器分別吸量1.00ml含100g

8、苯并a芘標(biāo)準(zhǔn)溶液5、10、15、20l注入色譜儀；如用熒光檢測器，可用微量注射器分別吸量1.00m1含2g苯并a芘標(biāo)準(zhǔn)溶液2、4、6、8、10l注入色譜儀，得苯并a芘的色譜峰和保留時(shí)間。另取試劑空白溶液作零濃度點(diǎn)的測定，每個(gè)濃度重復(fù)三次測定，得峰面積或峰高的平均值。以苯并a芘的含量(ng)為橫坐標(biāo)，峰面積(mm2)或峰高(mm)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸線的斜率。以斜率倒數(shù)作為樣品測定的計(jì)算因子Bs(ng/mm2或ng/mm)。(2)測定校正因子在測定的線性范圍內(nèi)，可用單點(diǎn)校正法求校正因子。在樣品測定同時(shí)，取試劑空白溶液和與樣品提取溶液苯并a芘濃度相接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按液相色譜的最佳測試

9、條件進(jìn)行測定，得苯并a芘的色譜峰和保留時(shí)間。重復(fù)做三次，得峰面積或峰高的平均值。用下列公式計(jì)算校正因子：式中f校正因子，ng/mm2或ng/mm；cs標(biāo)準(zhǔn)溶液中苯并a芘含量，ng；As標(biāo)準(zhǔn)溶液平均峰面積或峰高，mm2或mm；A0試劑空白溶液平均峰面積或峰高mm2或mm。3.樣品測定(1)樣品提取 用索氏提取法或真空升華法。 索氏連續(xù)提取法：采樣后，取80100cm2的玻璃纖維濾紙，折疊后放進(jìn)索氏提取器，加40ml環(huán)己烷，于沸水浴中連續(xù)提取8h(每小時(shí)回流次數(shù)不少于10次)。將提取液移至濃縮器中，在7080水浴上減壓濃縮至0.51.0ml(不可蒸干)。將濃縮液轉(zhuǎn)移至5ml離心管內(nèi)，用少量環(huán)已烷洗

10、滌濃縮瓶，合并于離心管內(nèi)，使總體積控制在1.0ml。加入0.5g堿性氧化鋁，搖勻，離心5min，取上清液待測。真空升華提取法：采樣后，取80100cm2的玻璃纖維濾紙，卷成筒狀，放入升華管內(nèi)。勿使濾紙折疊或堵塞管口，旋緊磨口。接口處用少量石膏漿密封，石膏固化后，將升華管放在管狀電爐內(nèi)，連接氣路和真空泵，將管內(nèi)抽成真空，35min后，轉(zhuǎn)動三通活塞4，向管內(nèi)充氮?dú)?，再抽真空、再充氮?dú)猓绱酥貜?fù)三次，以除去管內(nèi)殘留的空氣。同時(shí)，將管狀爐升溫至300，升華40min。此時(shí)，可看到黃色的油狀物凝集在升華管的毛細(xì)管內(nèi)壁上，為防止升華物被抽走，可在毛細(xì)管一端外壁放一小塊紗布，裹以冰塊冷卻。待管狀電爐溫度下降

11、至室溫后，轉(zhuǎn)動三通活塞，使內(nèi)外氣壓平衡，關(guān)閉真空泵(避免真空泵的油進(jìn)入管道和真空規(guī)中)。取下升華管，旋開磨口，將毛細(xì)管的大口朝上，垂直地固定在鐵架上。用100l注射器吸取甲醇，注入毛細(xì)管內(nèi)壁，必要時(shí)可用金屬絲摩擦管壁，幫助溶解，如此重復(fù)多次沖洗內(nèi)壁，沖洗液收集于濃縮管中，將洗脫液濃縮至0.10.5ml，即為待測樣品。(2)樣品分析在液相色譜儀的最佳測試條件下，取120l樣品提取液(根據(jù)濃度大小決定進(jìn)樣量)注入色譜儀，得色譜峰，以保留時(shí)間確認(rèn)苯并a芘峰，測定峰面積(mm2)或峰高(mm)，重復(fù)做三次，得峰面積或峰高的平均值。在樣品測定的同時(shí)，取同樣規(guī)格及大小的未采樣濾紙，按相同的操作步驟作試劑空

12、白測定。(六)計(jì)算1.用繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線法式中c空氣中苯并a芘濃度，g/100m3；A樣品溶液峰面積或峰高，mm2或mm；A0試劑空白溶液峰面積或峰高，mm2或mm；Bs用標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的計(jì)算因子，ng/mm2或ng/mm；V1樣品提取溶液的總體積，ml；V2注入色譜儀中樣品溶液的體積，ml；S1濾紙總過濾面積，cm2；S2分析時(shí)所取濾紙的過濾面積，cm2；Es由實(shí)驗(yàn)室確定的苯并a芘平均提取效率；V0換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，m3。2.用單點(diǎn)校正法式中f用單點(diǎn)校正法得到的校正因子，ng/mm2或ng/mm；其他符號與上式相同。(七)說明(1)檢出限和測定范圍本法檢出限0.1ng(熒光檢

13、測器)、10ng(紫外檢測器)。用熒光檢測器測定范圍為0.220ng苯并a芘。如采樣體積為1440m3，取1/5濾紙樣品，制成溶液總體積為1ml，進(jìn)樣量為10l，則可測濃度范圍為0.0070.7g/100m3。(2)精密度對濃度為0.1717mg/L的溶液重復(fù)測定的相對標(biāo)準(zhǔn)差為9.5%3.1%。(3)干擾與排除樣品經(jīng)過預(yù)處理以及色譜柱分離，消除了大部分有機(jī)物的干擾。(4)真空升華法和連續(xù)提取法各具優(yōu)缺點(diǎn)。前法操作簡單、快速、節(jié)省溶劑，可同時(shí)提取一組樣品，但需要有一定的設(shè)備和條件，后法不需要特殊儀器設(shè)備，方法簡單，提取效率高，易推廣；缺點(diǎn)是使用溶劑多，需要增加濃縮這一步驟，提取時(shí)間太長。試驗(yàn)證明

14、，這兩種方法提取顆粒物中苯并a芘的回收率都很高，加入5g苯并a芘，真空升華法回收率為95%100%，索氏提取法為96%108%。(5)3，4苯并芘是致癌性物質(zhì)，操作人員要特別注意防護(hù)，防止污染。接觸3，4苯并芘溶液時(shí)，要帶醫(yī)用橡膠手套，并在專用實(shí)驗(yàn)臺上操作，標(biāo)準(zhǔn)溶液要注意保管。測定后的3，4苯并芘廢液應(yīng)集中起來，統(tǒng)一處理。所用過的玻璃儀器，必須用鉻酸鉀硫酸洗液浸泡4h以上，最好浸泡過夜后用水洗凈。(6)色譜條件的選擇流動相：用甲醇和水調(diào)節(jié)其不同比例，在每種比例下，變化流量，固定柱溫，用萘、聯(lián)苯、菲、蒽混合樣品測量在各種條件下的保留值、柱效和蒽菲的分離度，結(jié)果見表610。表610 流動相極性、流

15、量變化對多環(huán)芳烴保留值、柱效和分離度(菲、蒽)的影響續(xù)表流動相甲醇和水的比例影響分離組分的保留值、柱效和分離度。如增加甲醇，保留時(shí)間減少，柱效和分離度發(fā)生變化，這主要是由流動相極性變化所引起的。另外，流量對保留時(shí)間、柱效和分離度也有影響，如流量變大，則保留時(shí)間減小，柱效降低，分離度下降。因此，對于甲醇和水的比例以及流量均須嚴(yán)格控制恒定。柱溫：提高柱溫能縮短保留時(shí)間、增加塔板數(shù)(見表611)，這是由于溫度增高，溶劑粘度減少，增加了溶劑在固定相中的滲透性，所以加快了分離；但溫度過高，對低沸點(diǎn)溶劑(如甲醇)易形成氣泡析出，影響結(jié)果。表611 柱溫對保留值、柱效和分離度影響(7)標(biāo)準(zhǔn)和空氣樣品的色譜圖

16、標(biāo)準(zhǔn)和空氣樣品的色譜圖示于圖612、圖613、圖614，空氣樣品測量結(jié)果列于表612。表612 大氣飄塵中多環(huán)芳烴含量(ng/m3)從色譜圖上看到，二個(gè)環(huán)的僅知道萘和聯(lián)苯，三個(gè)環(huán)的有蒽、菲二個(gè)峰，這在氣相譜不易分開，而用液體色譜是可以分開的。四個(gè)環(huán)的芘和熒蒽基本能分開，和苯并a蒽是難分離的異構(gòu)體，此法雖能分開，但不理想。五個(gè)環(huán)的有苯并e芘、苯并a芘和苝是能分開的。儀器型號用北京分析儀器廠生產(chǎn)的SY01型高壓液體色譜儀UV254檢測器得到多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖615。二、紙層析熒光分光光度法1(一)原理采集在玻璃纖維濾紙上顆粒物中的多環(huán)芳烴，經(jīng)索氏提取或真空升華后，用苯洗脫濃縮，經(jīng)乙?；癁V紙層析分

17、離，分離出的苯并a芘在紫外光照射下呈藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)，用苯洗脫或斑點(diǎn)直接掃描，用熒光分光光度法定量。(二)儀器(1)層析缸 5L。(2)紫外燈 附365或254nm濾光片。(3)具塞比色管 10ml，刻度需校正。(4)熒光分光光度計(jì) 用10mm石英比色皿，在激發(fā)波長385nm和發(fā)射波長400410nm下測定熒光強(qiáng)度或附薄層掃描裝置，用于熒光斑點(diǎn)直接掃描測定熒光強(qiáng)度。其他儀器 同一法(415頁)。(三)試劑(1)玻璃纖維濾紙 同一法(415頁)。(2)苯 重蒸餾。(3)環(huán)己烷 重蒸餾。(4)二氯甲烷 重蒸餾。(5)無水乙醇 重蒸餾。(6)乙?；芤?按150ml苯、50ml乙酸酐和0.1ml硫酸的

18、比例混合配制。(7)層析濾紙 新華牌中速層析濾紙。(8)展開劑 無水乙醇十二氯乙烷，按(21)比例(體積比)配制。(9)乙?；癁V紙 將層析濾紙裁成長27cm、寬15cm。取20張卷成圓筒形，逐張浸入到盛有2000ml乙?；芤旱臒?，濾紙圓筒狀中空部分放入一個(gè)高10cm，內(nèi)徑6cm玻璃管(防止濾紙?jiān)跀嚢钑r(shí)被攪破)。將電動攪拌棒置于玻璃柱中心，在(5055)下緩慢攪拌6h，在攪拌浸泡過程中，溶液液面始終保持超出濾紙1cm，并在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。然后，靜置浸泡過夜。取出濾紙?jiān)谕L(fēng)櫥內(nèi)晾干，再將濾紙逐張放入無水乙醇中浸泡4h以上，取出晾至微干，夾入粗濾紙之間，用玻璃板壓平至干備用。經(jīng)乙?；幚磉^的濾紙

19、，對著光線觀察，質(zhì)地應(yīng)均勻，透明度一致。如質(zhì)地不均勻，透明度明、暗不一，則不能用于分析。乙?；癁V紙檢驗(yàn)方法：在乙?；癁V紙上分別點(diǎn)3，4苯并芘、芘、1，2苯并芘溶液和三種物質(zhì)的混合液，用乙醇和二氯甲烷(21)為展開劑，展開上升20cm后，在熒光燈下觀察，三種物質(zhì)均分開，3，4苯并芘的斑點(diǎn)Rf值小于0.10，此濾紙即可供分析使用。(10)標(biāo)準(zhǔn)溶液 貯備液的配制方法同一法，臨用時(shí)，用苯稀釋成1.00ml含2g苯并芘的標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯于棕色容量瓶中，并置冰箱中保存。(四)采樣采樣方法同第十二章第一節(jié)中總懸浮顆粒物大流量采樣重量法。(五)分析步驟1.樣品提取同一法(415頁)。2.紙層析分離將空氣總懸浮顆粒

20、物樣品的提取液定容后，作為紙層析點(diǎn)樣待測液。(1)點(diǎn)樣 在乙酰化濾紙一端距底邊5cm處，用鉛筆輕輕劃一橫線，在橫線上點(diǎn)6個(gè)樣：二個(gè)點(diǎn)樣品、二個(gè)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)(取10l標(biāo)準(zhǔn)溶液含0.02g苯并芘)、二個(gè)點(diǎn)試劑空白(均為平行雙樣)。各點(diǎn)間隔2cm。用微量注射器吸量樣品提取液，根據(jù)苯并芘濃度點(diǎn)樣1050l。在點(diǎn)樣過程中用吹風(fēng)機(jī)緩緩送風(fēng)，促使溶劑揮發(fā)，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不應(yīng)超過5mm，點(diǎn)樣速度應(yīng)緩慢。如需將全部樣品點(diǎn)樣時(shí)，可用玻璃毛細(xì)管點(diǎn)樣。溶液點(diǎn)完后，可用少量苯洗滌濃縮瓶，并將洗滌液全部點(diǎn)在斑點(diǎn)上。按相同操作步驟點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑空白溶液。(2)層析 在層析缸中加入適量展開劑，將點(diǎn)完樣的層析濾紙懸掛在層析缸中，下端

21、浸入展開劑約5mm，將層析缸用透明膠紙密封并避光，待溶劑前沿上升至離原點(diǎn)20cm處，取出濾紙，在通風(fēng)櫥中使展開劑自然晾干。然后在暗室內(nèi)，于365nm紫外光下觀察層析紙上苯并芘的亮紫色熒光斑點(diǎn)，并用鉛筆圈出苯并芘標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)及與其位置相對應(yīng)的樣品斑點(diǎn)和空白斑點(diǎn)。(3)洗脫 用光亮無銹的剪刀分別剪下層析濾紙上苯并芘標(biāo)準(zhǔn)、樣品和空白斑點(diǎn)，各放入5ml比色管中，各管準(zhǔn)確加入5.00ml苯，加蓋，于6070水浴中，不斷振搖，浸泡15min，使苯并芘轉(zhuǎn)移至苯液中。3.測定(1)洗脫液的熒光分光光度測定 將標(biāo)準(zhǔn)、樣品和空白斑點(diǎn)的苯洗脫上清液分別倒入10mm石英比色皿中，在激發(fā)狹縫10nm，激發(fā)波長385nm和發(fā)

22、射狹縫5nm，發(fā)射波長400，405和410nm的條件下，分別測定熒光強(qiáng)度(mm)。(2)苯并芘熒光斑點(diǎn)直接掃描定量用熒光分光光度計(jì)的薄層掃描儀時(shí)，將層析紙展開的一面朝下，用透明膠紙將其固定于玻璃板上，放入薄層層析掃描板框座架上，設(shè)定激發(fā)波長為385nm、入射狹縫10nm、入射狹縫5nm，發(fā)射波長為405nm，以標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)調(diào)節(jié)儀器的負(fù)高壓和記錄器靈敏度，使記錄筆的響應(yīng)值在1/2滿量程處。然后在發(fā)射波長400、405和410nm處，對標(biāo)準(zhǔn)，空白和樣品斑點(diǎn)逐一進(jìn)行直線或曲線移動掃描，測得每個(gè)斑點(diǎn)峰高或峰面積的積分值之和，即為該斑點(diǎn)的熒光強(qiáng)度(mm或mm2)。(六)計(jì)算1.熒光光度法測定洗脫液或斑點(diǎn)直

23、接掃描標(biāo)準(zhǔn)、空白和樣品的相對熒光強(qiáng)度：式中A相對熒光強(qiáng)度；A405于405nm發(fā)射波長處測定的熒光強(qiáng)度；A400于400nm發(fā)射波長處測定的熒光強(qiáng)度；A410于410nm發(fā)射波長處測定的熒光強(qiáng)度。2.空氣中苯并芘濃度式中c空氣中苯并芘濃度，g/100m3；A樣品斑點(diǎn)相對熒光強(qiáng)度，mm2或mm；A0試劑空白樣品相對熒光強(qiáng)度，mm2或mm；As標(biāo)準(zhǔn)樣品相對熒光強(qiáng)度，mm2或mm；W標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)苯并芘含量，g；B樣品洗脫定容體積，l；D點(diǎn)樣時(shí)所取洗脫液體積，l；S1樣品濾紙的總面積，cm2；S2分析時(shí)所取樣品濾紙的面積，cm2；Es由實(shí)驗(yàn)確定的苯并芘的平均提取效率；V0換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，m3。

24、(七)說明(1)紙層析法分離熒光光度法測定苯并芘，具有靈敏度高，操作簡便，樣品便于保存等優(yōu)點(diǎn)，是目前測定苯并芘普遍采用的方法之一，檢出限為2ng/5ml。(2)精密度和準(zhǔn)確度對0.58g苯并芘重復(fù)測定的相對標(biāo)準(zhǔn)差小于6%；對5g苯并芘的加標(biāo)回收率為95%108%。(3)精確量取10l混合樣品提取物各5份進(jìn)行紙層析法和薄層層析法比較，測定結(jié)果見表613，從表中結(jié)果可以看出兩種方法測定結(jié)果基本上是一致的。目視觀測紙層分離熒光點(diǎn)分界不清晰，不如薄層法。但制備乙?；癁V紙比較容易。表613 兩種分離方法測定飄塵中3，4苯并芘的比較三、薄層層析熒光或紫外分光光度法(一)原理采集在玻璃纖維濾紙上顆粒物中的3

25、，4苯并芘(Bap)，用充氮升華法或連續(xù)提取法提取，再經(jīng)醋酸纖維素薄層層析法分離，分離出的Bap斑點(diǎn)，用苯洗脫，以熒光分光光度法或紫外分光光度法定量。(二)儀器(1)薄層涂布器。(2)薄層層析儀。(3)離心機(jī) 4000rpm。(4)玻璃熔封鐵芯轉(zhuǎn)子 長6mm。(5)電熱式磁力攪拌器。(6)其他儀器同二法(425頁)。(三)試劑(1)玻璃纖維濾紙預(yù)處理同一法(415頁)，Bap的空白值不應(yīng)大于1ng。(2)無水乙醇 重蒸餾。(3)甲醇 重蒸餾。(4)乙醚 重蒸餾。(5)苯 使用前提純，提純方法：在分液漏斗中每次加少量濃硫酸，振搖，至濃硫酸層無色為止，再加水振搖數(shù)次，洗去硫酸。然后加入無水硫酸鈉脫

26、水，再蒸餾。(6)展開劑 甲醇+乙醚+水4+4+1(體積比)。(7)薄層板 以每塊板(200×200mm)平均需用4g乙酸纖維素，和15ml無水乙醇的比例調(diào)成糊狀，在涂布器上制板。涂布后，先在室溫下風(fēng)干，再于80干燥箱中活化30min。然后，放在干燥器內(nèi)，冷卻備用。(8)乙酸纖維素 160250目，結(jié)合酸的含量為26%30%。乙酸纖維素制備方法：量取682.5ml乙酸酐、300ml苯、7.5ml水依次放入2L燒杯中，混勻。置于冰水浴中，緩慢加入10ml高氯酸，攪勻(注意防止反應(yīng)劇烈濺出)。然后，在不斷攪拌下慢慢加入100g微晶纖維素(色層用)，在通風(fēng)櫥內(nèi)于3035水浴中放置2h，并不

27、斷攪拌，以保證乙?；磻?yīng)充分，并注意觀察溫度，以防溫度驟增。然后，再倒入大型離心管中，以4000rpm速度，離心35min，除去上層乙?；瘎┤芤?，沉淀物用無水乙醇洗滌三次，再離心，至pH6為止。最后將乙?；w維素置于通風(fēng)櫥中吹風(fēng)晾干。放置過夜，再放入干燥箱中，于80干燥1h，取出冷卻后，研磨，過160目篩，備用。(9)3，4苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液同一法(415頁)，臨用時(shí)配制成1.00ml含10gBap標(biāo)準(zhǔn)溶液。(四)采樣采樣方法同一法(415頁)。(五)分析步驟1.樣品提取同一法(415頁)。2.薄層分離(1)點(diǎn)樣取活化處理過的薄層板，將三邊各刮去5mm。在距離底邊2cm處，以15cm間隔，用毛細(xì)管

28、將樣品液全部(或一部分，視濃度而定)，在薄層板上作條狀點(diǎn)樣。斑點(diǎn)不大于15mm×3mm。用0.05ml苯洗管壁，洗液再點(diǎn)樣。如此反復(fù)，直至洗液無熒光為止。同時(shí)，以同樣方法，用微量注射器取10l苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1g)點(diǎn)樣，作為標(biāo)準(zhǔn)對照點(diǎn)。另外一個(gè)點(diǎn)不點(diǎn)樣品，作為展開劑空白點(diǎn)。如用紫外分光光度法測定時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)對照應(yīng)點(diǎn)0.5g苯并芘，并且不留展開劑空白點(diǎn)。(2)層析點(diǎn)樣后薄層板放入薄層層析儀中，加入15ml展開劑。待展開劑前沿上升至15cm處，取出薄層板，放在通風(fēng)櫥中，讓展開劑自然揮發(fā)，晾干。然后在暗室內(nèi)，于紫外線燈下觀察薄層板上熒光斑點(diǎn)。用針劃出苯并芘標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)和其相對應(yīng)位置的樣品斑點(diǎn)和空白點(diǎn)。(3)洗脫用光亮無銹的小刀仔細(xì)刮下標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)、樣品斑點(diǎn)和空白點(diǎn)。通過漏斗分別移入10ml比色管中，再加入5ml苯，并放入一個(gè)玻璃熔封鐵芯轉(zhuǎn)子。將比色管放在盛水的燒杯中，于電熱磁力攪拌器上加熱65，10min，進(jìn)行洗脫。然后，在離心機(jī)上，以4000rpm，離心2min。上清液分別轉(zhuǎn)移于10ml比色管中。再向原比色管中加5ml苯，重復(fù)洗脫一次，合并洗脫液，混勻，作為被測樣品。3.測定將標(biāo)準(zhǔn)管及樣品管和空白管中洗脫液均用苯定容至10ml，分別進(jìn)行熒光或紫外分光光度法測定，測定步驟同二法(425頁)。(六)計(jì)算同二法(425頁)。(