單寧酸在不同pH緩沖液條件下的含量變化-最新文檔

1、單寧酸在不同pH緩沖液條件下的含量變化單寧酸( Tannic acid )是一種存在于多種天然藥用植物的 多元酚類化合物， 具有很強(qiáng)的生物和藥理活性， 是具有重要開發(fā) 價(jià)值的天然產(chǎn)物1。分子式C76H52O46能溶于乙醇、水、丙 酮，幾乎不溶于苯、乙醚、石油醚、氯仿等 2 。，是沒食子酸 酯及其衍生物與葡萄糖或多酚通過酯鍵相連形成的化合物，遇 酸、堿、酶能夠水解，水解時(shí)能生成雙沒食子酸酯，雙沒食子酸 酯能進(jìn)一步水解成沒食子酸和葡萄糖等小分子化合物 3-5 。單 寧酸存在于多種植物的樹皮和果實(shí)中，如中國五子、塔拉果莢、 石堅(jiān)石榴、漆樹葉、黃護(hù)、金縷梅樹、柿子、君遷子、葡萄、李 子、梨、山核桃、橘

2、子、桃子、山楂、茶葉等。單寧酸在醫(yī)學(xué)上 能用于收斂、 止血、 抗菌消炎、 止瀉、驅(qū)蟲、 抗多種病原體感染， 對(duì)化學(xué)誘變的皮膚、肺、前胃腫瘤有很好的抑制作用，能與細(xì)胞 外或組織外的鈣離子絡(luò)合 . 可抵抗平滑肌鈣誘導(dǎo)的收縮，發(fā)揮降 血壓作用 6 ，能夠阻礙鳥氨酸脫羧酶的誘導(dǎo)和過氧化物的產(chǎn)生， 提高老鼠體內(nèi)的抗氧化和抗癌效果 7 ，對(duì) HIV-RT 有一定抑制活 性8 ，還具有抗突變、抗脂質(zhì)過氧化、改善肝腎功能、降脂等 作用 9 。食品領(lǐng)域中能作酒類和飲料的澄清劑、穩(wěn)定劑以及食 品添加劑中的輔色、調(diào)味、賦形等 10-12 ，此外單寧酸在制革、 日化、冶金、染料、電子及輕工等領(lǐng)域中也應(yīng)用廣泛。沒食子酸

3、( Gallic acid )也是一種多酚類弱酸性化合物 化學(xué)式為 C7H6O，5 化學(xué)命名為 3 ，4，5- 三羥基苯甲酸 13 。通 常以糖苷鍵或酯鍵的形式與多元醇結(jié)合成水解單寧存在于植物 體和果實(shí)中，能溶于熱水、乙醇、乙醚、甘油和丙酮，難溶于冷 水，不溶于苯和氯仿。在堿性和中性條件下較不穩(wěn)定，而對(duì)強(qiáng)酸（1mol/L ）、強(qiáng)光、高溫較穩(wěn)定，在pH為26的磷酸鹽緩沖液 條件下能保持相對(duì)穩(wěn)定 14 。沒食子酸對(duì)肝臟、腎臟、心血管有 較強(qiáng)的親和力，具有抗突變、抗炎、抗氧化、抑菌、降血糖、心 血管保護(hù)等生物學(xué)效應(yīng)，其中對(duì)腫瘤、多種致癌、促癌物有突出 的抵抗作用 15-20 。單寧酸和沒食子酸作為一

4、種在醫(yī)藥等領(lǐng)域都具有重要作用 的多酚類鞣質(zhì)， 為合理地利用單寧酸等多酚類鞣質(zhì)， 本實(shí)驗(yàn)根據(jù) 單寧酸的化學(xué)性質(zhì)及沒食子酸的穩(wěn)定性，觀察單寧酸在不同 pH 緩沖溶液中水解后含量及其產(chǎn)物沒食子酸的含量變化情況。1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器1.1 實(shí)驗(yàn)藥品單寧酸樣品（購自成都邁斯克公司）；單寧酸 對(duì)照品（購自云南省藥檢所）；沒食子酸對(duì)照品（購于昆明中檢 所）；1.2 儀器與試劑 Agilent1200 型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；分析天平；電子天平；精密 pH測(cè)定儀計(jì)（O.OIpH）; HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋；移液管；燒杯；玻璃棒；容量瓶；0.45um微孔濾膜；1mL注射器；甲醇（色譜純）；磷酸（分析純

5、）；磷 酸氫二鈉（分析純）；丙酮（分析純）；純化水；2 實(shí)驗(yàn)方法2.1磷酸鹽緩沖液的配制 A液：取磷酸16.6 mL,加純化水 至1000 mL,搖勻。B液：稱取磷酸氫二鈉 71.63 g，加純化水 使溶解成1000 mL。取上述 A液72.5 mL與B液27.5 mL混合配 制，搖勻，即得pH=2.00的緩沖液。以pH=2的緩沖液為基本底 液，再用純化水將其稀釋成 pH為2、3、4、5、6的緩沖液。2.2 對(duì)照品溶液的制備取沒食子酸對(duì)照品適量,于分析天平 上精密稱定，加50%甲醇溶解配制定容成每1 mL含25卩g的溶 液,即得；取單寧酸對(duì)照品適量,于分析天平上精密稱定,用乙 醇：水：丙酮（6

6、9.9%: 29.8%: 0.3%）溶解定容成每1 mL含30 卩g的溶液，即得。2.3 供試品溶液的制備取單寧酸樣品適量,精密稱定樣品0.00500 g ,以乙醇：水：丙酮（ 69.9%： 29.8%： 0.3%）溶解, 配制定容成每1 mL含20卩g的溶液25 mL。取移液管分別吸取 制備好的單寧酸樣品溶液 1 mL,放入固定體積的不同pH的磷酸 鹽緩沖液中, 超聲使其溶解和混勻, 以恒溫水浴鍋控制水浴環(huán)境 溫度在25±0.5 C,讓單寧酸樣品溶液在恒溫條件下充分水解 1 h,對(duì)水解后的樣品液用微孔濾膜（0.45 um）進(jìn)行過濾后，即得 供試品溶液。2.4 色譜條件2.4.1單寧

7、酸色譜條件色譜柱 ZoRBAX SB-C18±（ 4.6 X 250 mm 5 um）;流動(dòng)相：甲醇-水（80： 20）;柱溫：室溫；檢測(cè)波長：275 nm；流速：0.5 mL/min ;進(jìn)樣量：2 uL21。242沒食子酸色譜條件色譜柱 ZoRBA>SB-C18柱（4.6 X 250 mm 5 um ;流動(dòng)相：甲醇和 0.2%磷酸（5: 95）;柱溫：25C； 檢測(cè)波長：273 nm；流速：1 mL/min ;進(jìn)樣量：10 uL。2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.5.1 單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制于分析天平上精密稱定定量的 單寧酸對(duì)照品，以乙醇：水：丙酮（ 69.9%： 29.8%： 0.

8、3%）溶解 定容配制成每1 mL含31卩g的溶液，按上述單寧酸色譜條件分 別取 1、3、5、7、9ul 不同體積進(jìn)樣，以單寧酸的峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=5261.5X-24.993 , R2=0.9987，結(jié)果表明：?jiǎn)螌幩岱迕娣e值與 質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為 0.132-0.396 ug 。2.5.2 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取沒食子酸對(duì)照品適量，于分析 天平上精密稱定，加50%甲醇溶解配制定容成每1 mL含33卩g 的溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣4、6、& 10、12卩L,以沒食子酸的峰面積（Y）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（X）進(jìn)線性回歸，得方程Y=174

9、0.2x-68.001 , R2=0.9964，結(jié)果表明：沒食子酸峰面積值 與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為 0.062-0.31 ug 。2.6 單寧酸和沒食子酸的含量測(cè)定分別取 2.3 項(xiàng)下方法制備 的供試品溶液， 按 2.4 色譜條件分別測(cè)定單寧酸、 沒食子酸在不 同pH的磷酸鹽緩沖液條件下的含量，用外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.1從圖中可以看出，在pH26的范圍內(nèi)，隨著pH值的增 大，單寧酸含量逐漸減少 （見圖 3），沒食子酸含量逐漸增加 （見 圖 4）。據(jù)此表明單寧在接近中性環(huán)境中更易水解產(chǎn)生沒食子酸。3.2 從表 1 中的數(shù)據(jù)中可以看出，當(dāng) pH 2 4 的范圍內(nèi)，單 寧酸含量下降速度快， pH 5 6 時(shí)單寧酸含量下降速度慢，而沒 食子酸含量在 pH24 范圍內(nèi)上升慢， 在 pH5 6 時(shí)含量上升快， 說明在 pH2 4 范圍極大部分的單寧并未轉(zhuǎn)化為沒食子酸，其有可能產(chǎn)生1, 2, 3, 4, 6-五-O-沒食子酰-B -D-匍萄糖（B -PGG、 雙沒食子酸酯、雙沒食子酸等其它的多酚化合物。說明 pH2 4 在不利于單寧酸酯鍵斷裂產(chǎn)生沒食子酸。3.3 通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析單寧酸和沒食子酸的含量變化，可以 初步認(rèn)為在溫和的pH條件下更有利于單寧的酯鍵或苷鍵斷裂產(chǎn) 生沒食子酸。4 結(jié)論單寧酸和沒食子酸存在于多種藥用植物中，