腫瘤的個(gè)體化醫(yī)療ppt課件

1、cobas EGFR基因突變檢測(cè)基因突變檢測(cè)腫瘤的個(gè)體化醫(yī)療（腫瘤的個(gè)體化醫(yī)療（PHCPHC）A tailored approach to improve treatment outcomes 能幫助指導(dǎo)醫(yī)生鑒別腫瘤患者特質(zhì)，使用合適能幫助指導(dǎo)醫(yī)生鑒別腫瘤患者特質(zhì)，使用合適的藥物進(jìn)行治療的藥物進(jìn)行治療伴隨診斷的目的伴隨診斷的目的腫瘤的個(gè)體化醫(yī)療（腫瘤的個(gè)體化醫(yī)療（PHCPHC）A tailored approach to improve treatment outcomes癌癥癌癥靶向藥靶向藥伴隨診斷伴隨診斷方法學(xué)方法學(xué)NSCLCTarceva (Roche)EGFR mutationsPCR

2、 乳腺癌Herceptin, Perjeta (Roche)HER2 expression/gene amplificationIHC, ISH胃癌Herceptin (Roche)HER2 expression/gene amplificationIHC, ISH黑色素瘤Zelboraf (Roche)BRAF mutationPCRcobascobas 腫瘤學(xué)基因突變檢測(cè)腫瘤學(xué)基因突變檢測(cè)用于檢測(cè)癌基因的DNA堿基變化cobascobas z z 480480產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹 cobascobas EGFR EGFR突變檢測(cè)介紹突變檢測(cè)介紹cobascobas EGFR EGFR的分析性能

3、的分析性能目錄19851991199319951998200520092011實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量PCRPCR儀發(fā)展儀發(fā)展簡(jiǎn)史簡(jiǎn)史羅氏不斷打破記錄將創(chuàng)新的PCR技術(shù)推向市場(chǎng) KaryKary Mullis Mullis 發(fā)明發(fā)明PCRPCR技術(shù)技術(shù)羅氏獲得全球羅氏獲得全球 PCR專利權(quán)專利權(quán) 羅氏分子系統(tǒng)羅氏分子系統(tǒng)發(fā)明實(shí)時(shí)定量發(fā)明實(shí)時(shí)定量PCR儀儀 LC480 II 上市上市 LC480 上市上市 cobas z 480上市上市 羅氏推出羅氏推出COBAS AmplicorPCR診斷行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)診斷行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)cobascobas z 480 z 480性能特點(diǎn)一性能特點(diǎn)一檢測(cè)結(jié)果可靠，讓您

4、對(duì)實(shí)驗(yàn)充滿信心溫度均一性達(dá)溫度均一性達(dá)+/-0.1+/-0.1，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠cobas z 480開創(chuàng)性的使用了Therma-BaseTM半導(dǎo)體熱循環(huán)技術(shù)，熱量通過(guò)蒸發(fā)和冷凝傳遞加快加熱和散熱的速度，解決了傳統(tǒng)半導(dǎo)體技術(shù)的邊緣效應(yīng)采用銀質(zhì)板座，導(dǎo)熱能力優(yōu)于其他金屬實(shí)現(xiàn)了完美的定量準(zhǔn)確性和重復(fù)性,并成功實(shí)現(xiàn)了最新基因掃描技術(shù)(HRM)羅氏獨(dú)特的羅氏獨(dú)特的Therma-Base結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)有有Therma-Base結(jié)構(gòu)的熱均一性明顯優(yōu)于沒有的結(jié)構(gòu)的熱均一性明顯優(yōu)于沒有的對(duì)對(duì)2倍濃度差異的分辨率明顯倍濃度差異的分辨率明顯用 SYBR Green I檢測(cè)病毒DNA模板2倍梯度稀釋，從

5、1.00E6到977拷貝/反應(yīng)優(yōu)異的靈敏度，重復(fù)性和分辨率優(yōu)異的靈敏度，重復(fù)性和分辨率可檢測(cè)單拷貝基因孔間檢測(cè)的重復(fù)性（CV）0.15%97%置信度區(qū)分1,000與2,000拷貝的差異cobascobas z 480 z 480性能特點(diǎn)一性能特點(diǎn)一檢測(cè)結(jié)果可靠，讓您對(duì)實(shí)驗(yàn)充滿信心cobas z 480檢測(cè)線性范圍寬廣檢測(cè)線性范圍寬廣質(zhì)粒DNA以10倍梯度稀釋，每個(gè)濃度9個(gè)重復(fù)，結(jié)果顯示cobas z 480具有寬廣的動(dòng)力學(xué)范圍最廣的檢測(cè)線性范圍最廣的檢測(cè)線性范圍 可檢測(cè)11010個(gè)拷貝cobascobas z 480 z 480性能特點(diǎn)一性能特點(diǎn)一檢測(cè)結(jié)果可靠，讓您對(duì)實(shí)驗(yàn)充滿信心cobasco

6、bas z 480 z 480性能性能特點(diǎn)特點(diǎn)二二快速高效，節(jié)約工作時(shí)間cobas z 480升降溫速度達(dá)4.4/秒，連續(xù)可調(diào)，是同類板式定量PCR中速度最快的，可在60分鐘內(nèi)完成40個(gè)PCR循環(huán)消除了加熱模塊的邊緣效應(yīng)，因此節(jié)省了ROX熒光校正的過(guò)程反應(yīng)時(shí)間的縮短保證反應(yīng)體系中Taq酶的穩(wěn)定性提高擴(kuò)增效率和檢測(cè)靈敏度提高工作效率cobascobas z 480 z 480性能特點(diǎn)性能特點(diǎn)三三同時(shí)滿足開放性通道UDF及IVD羅氏原裝試劑檢測(cè)cobas z 480 IVD工作流程工作流程無(wú)需人工分析 , 輸出結(jié)果, 而非數(shù)據(jù)。可配套羅氏原裝IVD試劑用戶自定義用戶自定義工作流程工作流程定性定量分

7、析，基因分型，溶解曲線分析等，幾乎適用于所有的檢測(cè)模式cobascobas z 480 z 480產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹 cobascobas EGFR EGFR突變檢測(cè)介紹突變檢測(cè)介紹cobascobas EGFR EGFR的分析性能的分析性能目錄肺癌與肺癌與EGFREGFR突變率的流行病學(xué)突變率的流行病學(xué)中國(guó)EGFR突變率遠(yuǎn)高于歐美國(guó)家排名第一的惡性腫瘤，中國(guó)每年新發(fā)70萬(wàn)NSCLC 死亡率高，中位生存期僅為3個(gè)月，五年存活率僅為15%- 缺乏早期診斷，70%晚期- 晚期對(duì)化療敏感性差，30%有效目前特羅凱和易瑞沙是一種EGFR酪氨酸酶抑制劑(TKIs)，是為肺癌患者延長(zhǎng)生存期的靶向治療藥物，患

8、者的耐受性和生活質(zhì)量都要高于傳統(tǒng)的化療TKITKI治療對(duì)治療對(duì)EGFREGFR突變的患者有效突變的患者有效中國(guó)EGFR突變率遠(yuǎn)高于歐美國(guó)家EGFR突變高發(fā)人群：東亞人群、女性、腺癌、不抽煙者 中國(guó)中國(guó)NSCLCNSCLC患者中患者中EGFREGFR突變率約突變率約40%40%！全球人群全球人群 ,%東亞人群東亞人群 ,%全部1930不吸煙者5460腺癌4249女性4658EGFREGFR在在NSCLCNSCLC的突變率的突變率大部分報(bào)告的突變點(diǎn)位于外顯子19和21ExonDistribution (%)184.01943.2207.62145.0Other0.3According to COS

9、MIC (v54)21Jnne PA and Johnson BE. Clin Cancer Res 2006;12:4416s4420s; 2COSMIC database (v54), http:/sanger.ac.uk, accessed August 2011. 19% EGFR mutation188.2% EGFR mutations in exons 19 and 21Wild-type EGFREGFR mutation in exons 1821 Other EGFR mutation檢測(cè)檢測(cè)EGFREGFR突變的臨床意義突變的臨床意義全球三大腫瘤突變會(huì)指南均強(qiáng)調(diào)檢測(cè)EGF

10、R突變19和21的重要性 “對(duì)于EGFR外顯子19和/或21突變陽(yáng)性的患者可以將TKI（厄洛替尼或吉非替尼）作為一線治療?！?011 ESMO（歐洲腫瘤內(nèi)科學(xué)會(huì)）指南 “為了使NSCLC患者得到最好的治療，EGFR突變檢測(cè)應(yīng)該作為治療前的常規(guī)，而TKI應(yīng)該成為EGFR突變患者的首選藥物。”2011 ASCO（美國(guó)腫瘤臨床學(xué)會(huì)）指南 “EGFR突變，尤其是外顯子19和21突變，與TKI療效有重要關(guān)系?！?010 NCCN（美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)）指南20112011 NCCNNCCN中文版推薦所有中文版推薦所有NSCLCNSCLC患者進(jìn)行檢測(cè)患者進(jìn)行檢測(cè)cobascobas EGFR EGFR突變

11、檢測(cè)的應(yīng)用突變檢測(cè)的應(yīng)用很好預(yù)測(cè)TKI藥物對(duì)NSCLC患者的療效III期和IV期非小細(xì)胞肺癌外顯子19缺失；21點(diǎn)突變；18點(diǎn)突變腫瘤對(duì)TKI敏感，患者使用TKI治療外顯子20沒有突變，繼續(xù)使用TKI治療外顯子20突變，提示TKI治療產(chǎn)生耐藥性，轉(zhuǎn)為非TKI治療沒有發(fā)現(xiàn)外顯子19，21，18點(diǎn)突變腫瘤對(duì)TKI不敏感，患者使用非TKI治療首個(gè)首個(gè)獲得美國(guó)獲得美國(guó)FDAFDA批準(zhǔn)批準(zhǔn)的的EGFREGFR突變檢測(cè)突變檢測(cè)! !cobas EGFRcobas EGFR突變檢測(cè)的特點(diǎn)突變檢測(cè)的特點(diǎn)全球突變覆蓋范圍最廣外顯子外顯子18Freq外顯子外顯子19Freq外顯子外顯子19Freq外顯子外顯子19

12、Freq外顯子外顯子20Freq外顯子外顯子21FreqG719A62390.8%Del622317.8%Del123870.3%Del135500.1%T790M62402.8%L858R622439.9%G719S62520.8%Del622510.2%Del62100.3%Del123860.1%S768I62410.7%L858R124290.1%G719C62530.6%Del123703.4%Del260380.2%Del135520.1%Ins123760.2%Del123822.5%Del135560.1%Del123850.1%Ins134280.2%Del123691.5%

13、Del124220.2%Del124160.1%Ins123780.1%Del123841.3%Del62200.1%Del184270.1%Ins123770.1%Del62550.8%Del135510.1%Del235710.1%Ins135580.1%Del123830.7%Del1236710% 腫瘤組織H&E 染色 & 確定腫瘤組織Step 1DNA樣本制備DNA 純化DNA 定量Step 2建立PCR反應(yīng)體系Step 3自動(dòng)化分析cobas z 480 Step 4標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告cobascobas 腫瘤學(xué)分子檢測(cè)腫瘤學(xué)分子檢測(cè)自動(dòng)分析結(jié)果，減少人為誤差EURTACEURTAC臨床研

14、究臨床研究 使用cobas EGFR檢測(cè)篩選突變的患者2012 ASCO（芝加哥 ）大會(huì)上，羅氏報(bào)告了EURTAC臨床研究中入組的患者使用cobas EGFR檢測(cè)后的臨床結(jié)局情況 。 采用cobas EGFR檢測(cè)確認(rèn)存在突變的患者，與將化療作為一線治療的人群相比，使用特羅凱治療的人群平均生存期明顯延長(zhǎng). (9.7個(gè)月 VS 5.4個(gè)月)EURTACEURTAC臨床研究臨床研究cobas檢測(cè)更加準(zhǔn)確、快速、可靠無(wú)效率方面，cobas EGFR檢測(cè)比sanger測(cè)序法更低（8.8% VS 15.6%）cobas EGFR檢測(cè)與焦磷酸測(cè)序的相關(guān)性很高（96.3%）cobas EGFR檢測(cè)24h內(nèi)出結(jié)

15、果，但sanger測(cè)序法3天后才出結(jié)果cobascobas z 480 z 480產(chǎn)品介紹產(chǎn)品介紹 cobascobas EGFR EGFR突變檢測(cè)介紹突變檢測(cè)介紹cobascobas EGFR EGFR的分析性能的分析性能目錄決定檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的因素決定檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的因素方法方法 眾多方法 優(yōu)點(diǎn) /缺點(diǎn)樣本樣本樣本制備時(shí)質(zhì)量和數(shù)量的不確定性- 腫瘤百分比- 突變百分比- 抑制劑實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室操作步驟的不一致會(huì)導(dǎo)致不同結(jié)果試劑試劑多種試劑, 質(zhì)量不一儀器與結(jié)果解讀儀器與結(jié)果解讀檢測(cè)平臺(tái)分析與報(bào)道IVDIVD檢測(cè)的基本要求檢測(cè)的基本要求cobas EGFR在試劑盒說(shuō)明書中報(bào)告了性能表現(xiàn)數(shù)據(jù)1coba

16、s EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011. 臨床驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)化程序?qū)FPET樣本的靈敏度重復(fù)性試劑穩(wěn)定性定義的限度和質(zhì)控符合符合IVD的要求的要求交叉反應(yīng)干擾試驗(yàn)cobascobas EGFR EGFR的分析性能的分析性能高靈敏度和可靠性cobas EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011.研究研究結(jié)果結(jié)果分析靈敏度(FFPET)可靠的檢出FF

17、PE樣本中5%的突變水平，和每反應(yīng)體系50ng DNA腫瘤組織含量10% 腫瘤細(xì)胞穩(wěn)健性假陰性率0%重復(fù)性98%1Robison K. Brief Bioinform 2010;11:524534; 2Koshiba M et al. Path Res Pract 1993;189:6672; 3cobas EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011.FFPEFFPE樣本的挑戰(zhàn)樣本的挑戰(zhàn)FFPE中的DNA被降解新鮮組織標(biāo)本FFPE樣本DNA被降解DNA 被降解和破壞低量的

18、可擴(kuò)增DNA檢測(cè)突變面臨挑戰(zhàn)福爾馬林固定石蠟包埋cobas EGFR Mutation Test在底突變水平FFPE中，被臨床證明的靈敏度cobascobas EGFR EGFR的高靈敏度的高靈敏度可檢測(cè)到FFPET樣本中5%的突變1cobas EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011.來(lái)自質(zhì)粒的完整DNA在DNA含量0.78 ng/孔時(shí)，即使突變率為5%，也可以準(zhǔn)確檢出來(lái)自FFPET樣品的被降解DNA在DNA含量為50 ng /孔時(shí)，即使突變率為5%，也可以準(zhǔn)確檢出C

19、onfidential交叉反應(yīng)性和干擾交叉反應(yīng)性和干擾cobas EGFR顯示對(duì)突變檢測(cè)無(wú)交叉反應(yīng)性和干擾肺相關(guān)微生物（肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌）1cobas EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011. 甘油三酯和血紅蛋白壞死組織 85%Confidential6個(gè)樣品個(gè)樣品2個(gè)試劑個(gè)試劑批次批次2個(gè)不同的個(gè)不同的分析儀分析儀4個(gè)檢驗(yàn)日個(gè)檢驗(yàn)日2個(gè)操作者個(gè)操作者cobascobas EGFR EGFR的的高重復(fù)性高重復(fù)性正確檢出率為98%（188/192）1cobas

20、EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011.受檢樣品受檢樣品192有效cobas 檢驗(yàn)結(jié)果188cobas 檢驗(yàn)失敗率4 （2%）cobascobas EGFR EGFR與與sangersanger測(cè)序比較測(cè)序比較cobas檢驗(yàn)敏感性高于sanger測(cè)序Sanger測(cè)序測(cè)序MDMND總計(jì)總計(jì)cobas 檢檢驗(yàn)批次驗(yàn)批次1MD69271MND37881總計(jì)總計(jì)7280152Sanger測(cè)序測(cè)序 +454測(cè)序測(cè)序MDMND總計(jì)總計(jì)cobas 檢檢驗(yàn)批次驗(yàn)批次1MD70171M

21、ND18081總計(jì)總計(jì)7181152Sanger測(cè)序獲得5個(gè)不一致的結(jié)果，3個(gè) 傾向于cobas 檢驗(yàn)Sanger測(cè)序報(bào)告為野生型的1個(gè)樣品由 454測(cè)序報(bào)告為突變型Sanger測(cè)序報(bào)告為突變型的2個(gè)樣品由 454測(cè)序報(bào)告為野生型MD：檢測(cè)出突變MND：未檢測(cè)出突變各各PCRPCR方法比較方法比較特性特性therascreen EGFR RGQ艾德艾德EGFR檢測(cè)檢測(cè)cobas EGFRcobas的差異化的差異化檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)ARMS PCRARMS PCRASA PCR實(shí)為同一種方法突變位點(diǎn)覆蓋突變位點(diǎn)覆蓋（EGFR）29種21種41種更高的突變覆蓋范圍，減少漏檢率，結(jié)果更可靠靈敏度靈敏度

22、Undefined細(xì)胞株：1%突變水平FFPET：沒有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證細(xì)胞株：1%突變水平FFPET：5%突變水平市面上唯一進(jìn)行FFPET驗(yàn)證的檢測(cè)，來(lái)自臨床最真實(shí)樣本的靈敏度和特異性，結(jié)果更可靠檢測(cè)結(jié)果處理檢測(cè)結(jié)果處理人工計(jì)算人工計(jì)算自動(dòng)打印結(jié)果輕松得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢測(cè)平臺(tái)和流程檢測(cè)平臺(tái)和流程Rotor-Gene Q和QIAamp FFPE試劑盒使用不同的儀器和基因提取試劑盒使用cobas z 480和 cobasFFPE提取試劑盒就有極佳的室間重復(fù)性，方便實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制等位基因特異性擴(kuò)增（ASA）-又稱擴(kuò)增阻礙突變系統(tǒng)(ARMS) 利用PCR引物的3端末位堿基必須與其模板DNA互補(bǔ)才能有效擴(kuò)增的原理，

23、設(shè)計(jì)等位基因特異性 PCR擴(kuò)增引物。ASA或ARMS的特點(diǎn)是：“僅是引物選擇靶序列階段”“只有在引物3堿基與模板配對(duì)時(shí)才能出現(xiàn)PCR擴(kuò)增帶，野生型的不擴(kuò)增”關(guān)于關(guān)于ARMSARMS方法方法ARMS和ASA為同一類方法廈門艾德廈門艾德不同的只是后期的熒光激發(fā)方式cobascobas 腫瘤突變檢測(cè)與艾德比較腫瘤突變檢測(cè)與艾德比較cobas靈敏度高于艾德試劑cobas比廈門艾德多檢測(cè)出20個(gè)位點(diǎn)，靈敏度有了很大的提升，因而：使更多的患者獲得及時(shí)而正確的治療為臨床提高用藥國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：cobas和艾德的符合率為93%結(jié)果通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證后，104例樣本中，cobas比艾德多檢出6個(gè)突

24、變1例20-Ins12376，艾德說(shuō)明書有，但沒檢測(cè)到1例20-Ins12378，艾德說(shuō)明書有，但沒檢測(cè)到1例20-Ins13558，艾德說(shuō)明書沒有該位點(diǎn)1例19-Del13556，艾德說(shuō)明書沒有該位點(diǎn)2例19-Del，艾德沒有檢測(cè)到外顯子外顯子18外顯子外顯子19外顯子外顯子19外顯子外顯子19外顯子外顯子20外顯子外顯子21G719A6239Del6223Del12387Del13550T790M6240L858R6224G719S6252Del6225Del6210Del12386S768I6241L858R12429G719C6253Del12370Del26038Del13552Ins12376Del12382Del