反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方小檗片中鹽酸小檗堿的含量(1)

1、反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方小檗片中鹽酸小檗堿的含量(1)        作者：鄧放， 劉圓， 劉超， 孟慶艷， 高澤文【關(guān)鍵詞】 鹽酸小檗堿；,復(fù)方小檗片；,含量測(cè)定；,反相高效液相色譜法摘要：目的采用反相高效液相色譜(RPHPLC)法測(cè)定復(fù)方小檗片中鹽酸小檗堿的含量。方法用Kromasil色譜柱（5m，250 mm×4.6 mm），流動(dòng)相乙腈水磷酸二氫鉀十二烷基磺酸鈉（500 ml500 ml3.0 g1.5 g），流速：1 mlmin-1，柱溫：40，檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm。結(jié)果在0.021 20.2

2、33 2 g之間，峰面積與進(jìn)樣量的線性關(guān)系為Y=3 513 092.99 X-15 938.76（r=0.999 9），平均回收率為97.22。測(cè)得3批片劑中鹽酸小檗堿的含量分別為0.772，0.748，0.749 mg/片。結(jié)論 所建方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于復(fù)方小檗片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。關(guān)鍵詞：鹽酸小檗堿； 復(fù)方小檗片； 含量測(cè)定； 反相高效液相色譜法Determination of Berberine Contained in Prescription of Berberine Pill by RPHPLCAbstract：ObjectiveTo establish an RP

3、HPLC method to determine berberine from prescription of berberine.MethodsThe column were Kromasil (5m，250 mm×4.6 mm),the mobile phase consisted of methyl cyanide:waterKDPSDS(500 ml500 ml3.0 mg1.5 mg),the flow rate was 1 ml/min and the UV detector was set at 345 nm.ResultsThe method displayed go

4、od linearity within the concentration ranges of 0.021 20.233 2g(r=0.999 9). The average recovery was 97.22%. The contents of three lots of prescription of berberine were 0.772, 0.748，0.749 mg/ pill.ConclusionThis method is simple,accurate,replicate and suitable for the determination of berberine in

5、prescription of berberine.Key words：Berberine; Prescription of berberine pill； Determination; RPHPLC     復(fù)方小檗片，由龍膽花、小檗皮、甘草等多味藥材組成,含有龍膽堿、龍膽苦苷、三萜皂苷類成分、生物堿及莨菪類成分等1。具清熱化痰，止咳平喘的功效，小檗堿是主要成分之一24。本實(shí)驗(yàn)利用HPLC法測(cè)定復(fù)方小檗片中鹽酸小檗堿的含量。1 儀器與試藥儀器：Waters2695Waters2996與SPD6AV紫外檢測(cè)儀；試劑：乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為

6、分析純。對(duì)照品：鹽酸小檗堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（07139906含量測(cè)定用）。2 方法與結(jié)果2.1 對(duì)照品及供試品溶液制備2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品2.12 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻,即得（每毫升含鹽酸小檗堿0.021 2 mg）。2.1.2 供試品溶液 5取復(fù)方小檗片10片，除去薄膜衣，研細(xì)，取0.72 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.2 色譜條件色譜柱：C1

7、8 250 mm×4.6 mm，5 m；流動(dòng)相：乙腈水磷酸二氫鉀十二烷基磺酸鈉（500 ml500 ml3.0 g1.5 g）；流速：1.0 ml/min；柱溫：40；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm。2.3 線性范圍的考察精密量取上述鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11 l注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖1)，測(cè)定其峰面積，結(jié)果見表1，并以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，得回歸方程。表1 鹽酸小檗堿線性關(guān)系考察結(jié)果（略）在所擬定的色譜條件下，鹽酸小檗堿在0.021 20.233 2g之間，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。2.4 空白實(shí)驗(yàn)取不含小檗皮的陰性片粉適量，按

8、供試品溶液制備方法制備空白對(duì)照溶液，進(jìn)樣10 l，記錄色譜圖(見圖1)，可見其它成分對(duì)鹽酸小檗堿的測(cè)定無干擾。圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品（a）、樣品（b）和空白溶液（c）的HPLC圖譜（略）2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取鹽酸小檗堿(0.021 2 mg/ml)對(duì)照品溶液10 l，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積值結(jié)果見表2。表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）鹽酸小檗堿的RSD為0.202，以上結(jié)果表明，精密度良好。2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品供試液于0，2，4，6 h及8 h，進(jìn)樣10 l，峰面積結(jié)果見表3。表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品供試液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，按上述色譜

9、條件測(cè)定，記錄色譜圖(見圖1)，并計(jì)算含量。結(jié)果見表4。表4 樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)定（略）RSD為0.482，上述實(shí)驗(yàn)表明，該方法重現(xiàn)性較好。2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的樣品約0.36 g，精密稱定，分別加入對(duì)照品溶液（0.021 2 mg/ml）24，30，36 ml，按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并按下列公式計(jì)算回收率。結(jié)果見表5。回收率= 測(cè)得量（mg）-樣品中鹽酸小檗堿量（mg）    加入對(duì)照品量（mg）×100%表5 鹽酸小檗堿加樣回收收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法加樣回收良好。2.9 供試品測(cè)定 3批供試品的測(cè)定結(jié)果見表6。表6 樣品中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定（略）3 討論由測(cè)定結(jié)果，結(jié)合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥第1冊(cè)，附一中對(duì)藏藥材小檗皮的規(guī)定：“為甘肅小檗皮Berberis Kansuensis Schncid.及同屬多種植物的干燥皮?！笨紤]到藥材因種間、產(chǎn)地以及收購時(shí)間等各方面的因素對(duì)其主要有效成分小檗堿的影響，暫定本品每片含鹽酸小檗堿的量不得少于0.6 mg。該