紫杉醇埋植劑對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療作用

1、紫杉醇埋植劑對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療作用 【摘要】 目的:對比研究紫杉醇注射液和紫杉醇埋植劑對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療作用。方法：將小鼠隨機分為無治療組、空白埋植劑組、紫杉醇注射液組和紫杉醇埋植劑組。治療12 d，各組一半小鼠取淋巴結(jié)稱質(zhì)量并行組織學病理檢查，另一半取淋巴結(jié)制成無菌勻漿，接種于正常小鼠的腹腔，進行生存分析。結(jié)果：無治療組小鼠淋巴結(jié)質(zhì)量為（96.916.4）mg，空白埋植劑組為（95.413.6）mg，紫杉醇注射液組為（78.414.2）mg，紫杉醇埋植劑組為（32.39.4）mg。無治療組半數(shù)生存期為15 d，空白埋植劑組為15.5 d，紫杉醇注射液組為2

2、3.5 d，紫杉醇埋植劑組為28 d。結(jié)論：紫杉醇埋植劑對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤有較好的療效。 【關(guān)鍵詞】 紫杉醇 埋植劑 淋巴道轉(zhuǎn)移 化學治療 腫瘤 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤常見轉(zhuǎn)移途徑，但常規(guī)劑型的化療藥物給藥后不易轉(zhuǎn)運至淋巴結(jié)，治療效果常常不理想，并且易導致嚴重的全身不良反應。紫杉醇是具有獨特抗腫瘤活性的化療新藥，用紫杉醇類藥物治療卵巢癌和乳腺癌療效獨特，但紫杉醇對淋巴結(jié)沒有選擇性。埋植劑是一種抗癌藥物的新劑型，選擇有淋巴特異性的載體，可以顯著提高淋巴結(jié)的藥物濃度，從而提高抗癌藥物對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的療效。作者就紫杉醇注射液和紫杉醇埋植劑對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療結(jié)果進行對比研究，探討紫

3、杉醇埋植劑的淋巴導向性及其對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的療效。 1 材料和方法 1.1 實驗動物 H22肝癌腹水型荷瘤小鼠購于中國醫(yī)學科學院藥物研究所（北京）。昆明種小鼠購于東南大學醫(yī)學院實驗動物中心，雌雄各半，質(zhì)量2022 g，由東南大學醫(yī)學院實驗動物中心飼養(yǎng)、管理，各組動物分籠飼養(yǎng)，飲水和飼料來源相同。 1.2 藥物及試劑 紫杉醇埋植劑由江蘇省藥物研究所提供，為無菌干制劑，以聚乙二醇為基質(zhì)，活性炭為載體，每克含紫杉醇10 mg。藥物體外溶出參數(shù)：t50%為8.5 h，t90%為26.5 h。紫杉醇由中國醫(yī)學科學院藥物研究所協(xié)和藥廠提供。 1.3 動物實驗 1.3.1 動物模型的制備

4、 抽取H22肝癌腹水型荷瘤小鼠的腹水接種于昆明種小鼠腹腔，連續(xù)接種7代，使瘤細胞在昆明種小鼠體內(nèi)穩(wěn)定。選接種后7 d的腹水型荷瘤昆明種小鼠，抽取乳白色黏稠腹水，稀釋后調(diào)整瘤細胞數(shù)為2.5108 ml-1。將瘤細胞懸液接種于小鼠左后肢爪墊皮下組織，接種容積為0.04 ml，接種完成后剩余的瘤細胞懸液在光鏡下計數(shù)，活瘤細胞數(shù)95%。共接種80只小鼠，經(jīng)病理證實為小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 1.3.2 治療實驗一 選取合格小鼠動物模型40只，隨機分成4組：A組，無治療組；B組，空白埋植劑組，無紫杉醇，其他成分相同，制備工藝相同，瘤床部位埋植給藥，每只10 mg；C組，紫杉醇注射液組，尾靜脈注射，

5、紫杉醇用量5 mgkg-1；D組，紫杉醇埋植劑組，瘤床部位埋植給藥，每只10 mg（紫杉醇用量5 mgkg-1）。治療12 d后處死全部動物，取左腹股溝淋巴結(jié)稱質(zhì)量。 1.3.3 治療實驗二 選取合格小鼠動物模型40只，按上述分組和給藥方案，治療12 d后處死全部動物，無菌條件下取出左側(cè)腹股溝淋巴結(jié)，用玻璃勻漿器制成勻漿。另選取正常雄性昆明小鼠40只，體質(zhì)量2022 g，分成4組，分別將上述4組制成的勻漿接種在正常小鼠的腹腔內(nèi)，觀察60 d，記錄受體小鼠的生存時間。 1.4 統(tǒng)計學處理 應用SAS 8.0統(tǒng)計軟件，用對數(shù)秩檢驗方法檢驗統(tǒng)計學意義，計算每組小鼠半數(shù)生存期，并繪制生存曲線圖。 2

6、結(jié) 果 2.1 治療實驗一 治療后，無治療組小鼠左腹股溝轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)質(zhì)量為（96.916.4）mg，空白埋植劑組為（95.413.6）mg，紫杉醇注射液組為（78.414.2）mg，紫杉醇埋植劑組為（32.39.40）mg。方差分析顯示，F(xiàn)=19.62，P0.001。結(jié)果表明，紫杉醇埋植劑組及紫杉醇注射液組與無治療組相比均有顯著性差異（P0.05），空白埋植劑組與無治療組相比無顯著性差異（P0.05）。紫杉醇埋植劑組與紫杉醇注射液組相比也有顯著性差異（P0.05），前者淋巴結(jié)平均質(zhì)量要小于后者。實驗過程中，小鼠局部和全身未見明顯的毒副反應發(fā)生。 2.2 治療實驗二 不同治療組經(jīng)過治療后的淋巴結(jié)勻

7、漿接種于正常小鼠腹腔，無治療組半數(shù)生存期為15 d，空白埋植劑組為15.5 d，紫杉醇注射液組為23.5 d，紫杉醇埋植劑為28 d。各組小鼠的生存曲線見圖1。結(jié)果表明，紫杉醇埋植劑組半數(shù)生存時間明顯延長，通過對數(shù)秩檢驗（logrank test），其生存曲線相對于無治療組、空白埋植劑組有顯著差異（P0.05），與紫杉醇注射液組相比也有顯著差異（P0.05）。之后，從生存曲線圖目測判斷、半數(shù)生存期比較來檢驗各組效應的大小，無治療組和空白埋植劑組的生存曲線交錯延伸，生存時間最大值僅20 d，而紫杉醇埋植劑組和這兩組的生存曲線明顯分離，其生存時間明顯延長，最大值在35 d，且紫杉醇注射液組的生存曲

8、線與紫杉醇埋植劑組差別亦較明顯，證實紫杉醇埋植劑組的治療效果與其他各組有顯著差異。 3 討 論 為了提高化療藥物對腫瘤細胞的選擇性，20世紀80年代出現(xiàn)了一些治療惡性腫瘤的新思路，即針對腫瘤“靶”而設計的導向治療，這給腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的化療提供一條新的思路。所謂腫瘤的導向治療是指借助高度特異性的親腫瘤物質(zhì)作為載體，以有細胞毒性的物質(zhì)，如化學物質(zhì)等作為彈頭，依靠載體的特異性和對腫瘤的親合力，將彈頭物質(zhì)盡量集中于腫瘤細胞，籍此發(fā)揮穩(wěn)定的殺傷作用而對宿主毒性甚小的治療方法1。其導向載體分為抗體類和非抗體類，非抗體類包括脂質(zhì)體和微球等。目前，腫瘤的導向治療已取得了許多進展23。 埋植劑是一種新的藥物劑型

9、，和其它常規(guī)的給藥方法相比，埋植給藥系統(tǒng)有其獨特的優(yōu)點。第一，緩釋作用。其釋藥期可長達數(shù)月甚至數(shù)年，避免了頻繁用藥的麻煩。第二，恒釋作用。系統(tǒng)中藥物常呈恒速釋放，可較平穩(wěn)地維持血藥濃度，達到長期維持有效治療目的。第三，還可以避免首過效應，提高生物利用度。這種給藥系統(tǒng)在避孕技術(shù)中的應用較為成熟，其中以Norplant為代表在臨床應用中取得了較為理想的效果。在治療腫瘤方面，人們對埋植劑治療局部腫瘤進行了較多的探索68，而對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療尚未見報道。 我們使用的紫杉醇埋植劑是以聚乙二醇為基質(zhì)、活性炭為載體制備，對比研究紫杉醇注射液和紫杉醇埋植劑對小鼠H22肝癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療作用。結(jié)果顯

10、示，不論是從淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤的質(zhì)量，還是從組織病理學中腫瘤細胞侵犯淋巴結(jié)的范圍來比較，紫杉醇埋植劑對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療較之空白對照組均有顯著性的差異，與其他治療組相比也明顯好于后者。而經(jīng)過治療后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤制成勻漿后接種正常小鼠的生存分析更是從統(tǒng)計學意義、生存曲線圖目測判斷和半數(shù)生存期比較等方面證明了紫杉醇埋植劑較其它劑型的優(yōu)越性。紫杉醇埋植劑具有良好的淋巴導向性和緩釋性，與活性炭載體有關(guān)?；钚蕴烤哂辛己玫牧馨蛯蛐院秃軓姷奈叫砸驯蛔C實910，利用活性炭這一特性將紫杉醇導入淋巴結(jié)，而活性炭微粒吸附的抗癌藥物濃度與其周圍的抗癌藥物濃度之間具有動態(tài)平衡，這一特性使局部癌組織中的抗癌藥物長期

11、維持較高濃度，而血藥濃度卻很低，有利于殺死腫瘤細胞，而較少損傷正常組織。 紫杉醇埋植劑利用其載體的導向作用，將大量的抗癌藥選擇性地導入淋巴系統(tǒng)，既可提高區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)的藥物濃度，延長其作用時間，又使進入血液循環(huán)的藥物減少，降低毒副作用。它解決了常規(guī)劑型的化療藥物不易被轉(zhuǎn)運至淋巴結(jié)的問題，為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療提供了新的途徑。將紫杉醇埋植劑埋植于已切除原發(fā)灶的部位，可有效地防治腫瘤的局部復發(fā)和其所引流淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，方法簡單易行，從實驗過程來看小鼠局部和全身無明顯的毒副反應發(fā)生，是一種安全可靠的治療方法，因此其發(fā)展前景令人鼓舞?！緟⒖嘉墨I】 1湯釗猷.現(xiàn)代腫瘤學M.2版.上海：上海醫(yī)科大學出版社，

12、2000：533.SHARMA A，MAYHEW E，BOLCSAK L，et al.Activity of paclitaxel liposome formulations against human ovarian tumor xenograftsJ.Int J Cancer，1997，71(1)：103107.方瑾，王蕓慶，宋今丹.大腸癌免疫脂質(zhì)體導向紫杉醇的實驗研究J.中國免疫學雜志，1998，14(3)：198200.陸彬.藥物新劑型與新技術(shù)M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：502503.杜明昆，邵慶翔，周曉飛，等.長期使用Norplant皮下埋植劑婦女血清左炔諾孕酮水平的測定J.

13、中華產(chǎn)科雜志，1999，34(6)：363365.VOGELHUBER W，SPRUB T，BERNHARDT G，et al.Efficacy of BCNU and paclitaxel loaded subcutaneous implants in the interstitisl chemotherapy of U87MG human glioblastoma xenograftsJ.Int J Pharm，2002，238(12)：111121.FUNG L K，EWEND M G，SILLS A，et al.Pharmacokinetics of interstitial deli

14、very of carmustine，4hydroxycyclophosphamide and paclitaxel from a biodegradable polymer implant in the monkey brainJ.Cancer Res，1998，58(4)：672684.PARK E S，MANIAR M，SHAH J C，et al.Biodegradable polyanhydride devices of cefazolin sodium，bupivacaine，and taxol for local drug delivery：preparation and kinetics snd mechanism of in vitro releaseJ.J Control Rel，1998，52(12)：179189.SALALURA C，TAKAKHASHI T，SAWAI K，et al.Enhancement of therapeu