免疫學(xué)檢驗(yàn)總結(jié)表格(共9頁(yè))

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上第一部分：基本理論抗原抗體反應(yīng)抗原抗原的兩種特性：免疫原性、免疫反應(yīng)性共同抗原、交叉反應(yīng)、異嗜性抗原、超抗原等抗原的分類(lèi)依據(jù)性能：完全抗原、不完全抗原依據(jù)抗體產(chǎn)生是否要T cell刺激：胸腺依賴(lài)性抗原（TD-Ag）、 胸腺非依賴(lài)性抗原（TI-Ag）絲裂原刀豆蛋白A（ConA）T細(xì)胞有絲分裂原植物凝集素T細(xì)胞有絲分裂原美洲商陸絲裂原T細(xì)胞和B細(xì)胞有絲分裂原脂多糖（LPS）B細(xì)胞有絲分裂原葡萄球菌A蛋白（SPA）B細(xì)胞有絲分裂原抗體結(jié)構(gòu)與功能：略IgG單體分子、血清和細(xì)胞外液中含量最高IgM五聚體、分子量最大、不能透過(guò)胎盤(pán)、宮內(nèi)感染指標(biāo)IgA有兩種類(lèi)型（血清型和分泌型）、

2、對(duì)新生兒早期抗感染十分重要IgD單體分子、膜結(jié)合型IgD是Bcell分化成熟的標(biāo)志IgE單體分子、含量最少、特異性過(guò)敏和寄生蟲(chóng)感染中有意義抗原抗體反應(yīng)原理結(jié)合力、親和力與親合力抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)特異性；比例問(wèn)題：等價(jià)帶、前帶、后帶；可逆性影響因素反應(yīng)物抗原理化性質(zhì)、抗原表位等抗體來(lái)源：R型血清和H型血清特異性與親和力反應(yīng)條件電解質(zhì)、酸堿度、溫度、比例抗原抗體的制備免疫原的制備顆粒性免疫原的制備較簡(jiǎn)單、分離或純培養(yǎng)可溶性抗原的制備粗抗原制備：搗碎組織、破碎細(xì)胞、粗提取分離與純化、濃縮與保存人工免疫原的制備將半抗原與載體結(jié)合，常用蛋白質(zhì)作為載體合成肽抗原的制備合成肽屬于半抗原的一種，所以·

3、····基因工程抗原的制備獲得目的抗原的基因編碼，然后擴(kuò)增純化抗體的制備多克隆抗體制備使用免疫原免疫動(dòng)物獲得抗體、又叫抗血清；弗氏完全佐劑（CFA，石蠟油+羊毛脂+卡介苗）和弗氏不完全佐劑（IFA，石蠟油+羊毛脂）大致過(guò)程：獲取、鑒定、純化、保存單克隆抗體（McAb）制備原理：雜交瘤技術(shù)等親本細(xì)胞的選擇與融合：無(wú)菌取脾HAT培養(yǎng)基的選擇作用陽(yáng)性克隆選擇與克隆化制備單克隆抗體：在小鼠腹腔誘生出腫瘤并產(chǎn)生含McAb的腹水鑒定、保存、應(yīng)用基因工程抗體的制備抗原抗體的純化離心分離差速離心粗分離；會(huì)有共沉；分離分子量相差大的物質(zhì)；動(dòng)力學(xué)方法密度梯度離心用于分離密度

4、相近大小不同；常用介質(zhì)為蔗糖、甘油；離心分離的物質(zhì)密度一定要大于密度梯度介質(zhì)的最大密度；有共沉等密度梯度分離大小相同密度不同的物質(zhì)；介質(zhì)常用銫鹽；銫鹽對(duì)鋁有腐蝕，防止濺出；不會(huì)有共沉沉淀分離鹽析法原理：鹽的存在減弱了蛋白分子周?chē)乃?，?dǎo)致蛋白發(fā)生聚集而沉降有機(jī)溶劑沉淀優(yōu)：分辨率高、溶劑易除；缺：有毒、可能會(huì)是蛋白失活非離子聚合物沉淀常用聚乙二醇離子交換層析凝膠層析常用凝膠：葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、Superdex親和層析利用欲分離物質(zhì)和它們的特異性配體間具有特異性親和力電泳有支持體紙電泳醋酸纖維薄膜薄層電泳（薄膜或薄板）非凝膠性支持體區(qū)帶電泳（淀粉、纖維素粉、硅膠等）凝膠支

5、持體區(qū)帶電泳（淀粉液、聚丙烯酰胺凝膠）無(wú)支持體Tiselius移界電泳顯微電泳等點(diǎn)聚焦電泳等速電泳密度梯度電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳區(qū)別第二部分：免疫檢驗(yàn)技術(shù)1. 沉淀反應(yīng)可溶性抗原；多克隆抗體更適合；R型血清首選液相沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：定性絮狀沉淀試驗(yàn)抗體稀釋法、棋盤(pán)格法（找出Ag、Ab最佳比例）凝膠沉淀試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)定量試驗(yàn)；兩個(gè)曲線雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(定性)沉淀線數(shù)目：抗原或抗體不純；沉淀線彎向分子量大的；沉淀線靠近濃度低的；可以測(cè)定效價(jià)(半定量)免疫電泳對(duì)流免疫CIEP雙擴(kuò)+電泳；Ag向正極泳動(dòng)、Ab向負(fù)極泳動(dòng)火箭電泳單擴(kuò)+電泳；定量免疫電泳先蛋白區(qū)帶電泳、再

6、雙擴(kuò)免疫濁度測(cè)定（定量）透射濁度測(cè)定、散射濁度測(cè)定免疫速率抑制濁度測(cè)定用一定量的已知半抗原-載體與限量特異性抗體反應(yīng)，測(cè)定生成的半抗原-載體-抗體所造成的散色速率2. 凝集反應(yīng)顆粒性抗原或帶有可溶性抗原的載體定性試驗(yàn)直接凝集試驗(yàn)玻片凝集定性；多用于紅細(xì)胞ABO血型試管凝集半定量、多用于Ab；外斐試驗(yàn)、肥達(dá)試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)將抗原與某一載體結(jié)合；常用載體：人O型RBC、SRBC、SPA等間接凝集試驗(yàn)正向間接凝集試驗(yàn)用抗原致敏顆粒檢測(cè)抗體反向間接凝集試驗(yàn)用已知抗體檢測(cè)抗原間接凝集抑制試驗(yàn)用已知抗原致敏顆粒和相應(yīng)抗體，檢測(cè)樣本中是否有與致敏顆粒相同的抗原，有正向和反向間接血凝試驗(yàn)載體顆粒為紅細(xì)胞其它凝

7、集試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）是抗球蛋白參與的間接血凝試驗(yàn)直接Coombs檢測(cè)已粘附在RBC的不完全抗體；新生兒溶血、自身免疫溶血性貧血間接Coombs血清中游離抗體；多用于檢測(cè)母體Rh(D)協(xié)同凝集試驗(yàn)載體顆粒為SPA的間接凝集試驗(yàn)冷凝集試驗(yàn)檢測(cè)冷凝集素的方法，04最明顯自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)主要試劑為抗人O型紅細(xì)胞MCAb，可以與各型RBC結(jié)合卻不引起凝集；樣本為全血特點(diǎn)是排除由于紅細(xì)胞凝集可能引起的假陽(yáng)性3. 補(bǔ)體試驗(yàn)系統(tǒng)：緩沖液PBS補(bǔ)體SRBC溶血素補(bǔ)體測(cè)定試驗(yàn)血清總補(bǔ)體活性(CH50)測(cè)定活化經(jīng)典途徑；為么要50%溶血作為終點(diǎn)測(cè)定；意義旁路活化途徑(AP-H50)測(cè)定EGTA螯

8、合Ca2+，封閉Cl，阻斷經(jīng)典途徑補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)分為直接(不溶血為陽(yáng)性)和間接(溶血為陽(yáng)性)兩類(lèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果要對(duì)照眾多對(duì)照實(shí)驗(yàn)觀察4. 酶免疫技術(shù)(E)定量或定性固相載體最常用聚苯乙烯酶和底物最常用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)；還有-半乳糖胺酶分類(lèi)雙抗體(原)夾心檢測(cè)抗原最常用；只適用于二價(jià)或二價(jià)以上大分子抗原雙位點(diǎn)一步法雙抗夾心時(shí)，待測(cè)樣品和酶標(biāo)物一起加入間接法檢測(cè)抗體最常用競(jìng)爭(zhēng)法既可測(cè)抗原，又可測(cè)抗體；參考管和待測(cè)管對(duì)照觀察5. 熒光免疫技術(shù)(F)*陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和熒光強(qiáng)度可以作為定量或半定量指標(biāo)常用熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素(FITC)最常用、最廣泛；黃色或橙黃色粉末；激發(fā)后發(fā)出黃綠

9、色四乙基羅丹明(RB200)橘紅色粉末；激發(fā)后為橘紅色熒光四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)紫紅色粉末，激發(fā)后有橙紅色熒光；猝滅速度慢藻蛋白類(lèi)藻紅蛋白PE(此類(lèi)最常用)、藻青蛋白PC、別藻青蛋白APC；多呈現(xiàn)橙色或紅色物質(zhì)熒光顯微技術(shù)光源短波光；波長(zhǎng)連續(xù)或不連續(xù)；濾板隔熱濾板、激發(fā)濾板、吸收濾板；光路透射光或落射光分類(lèi)直接染色法熒光標(biāo)記抗原(抗體)直接檢測(cè)抗體(抗原)間接染色法酶聯(lián)免疫+熒光標(biāo)記補(bǔ)體結(jié)合免疫熒光Ag,Ab結(jié)合激活補(bǔ)體；熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體的抗體；雙標(biāo)記染色標(biāo)記不同抗體檢測(cè)同一樣品流式熒光免疫技術(shù)定量分析或純化；流式細(xì)胞儀與熒光免疫結(jié)合6. 放射免疫技術(shù)(R)*精確測(cè)定各種微量物質(zhì)放

10、射免疫分析(RIA)原理：標(biāo)記抗原(可以為半抗原)Ab*和非標(biāo)記抗原Ab對(duì)特異性抗體Ag(一定量)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)計(jì)數(shù)儀射(131I,125I)線用晶體閃爍計(jì)數(shù)儀射線(57Cr,60Co)用液體閃爍計(jì)數(shù)儀免疫放射分析(IMRA)原理以過(guò)量標(biāo)記的抗體與待測(cè)抗原進(jìn)行非競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合反應(yīng)，時(shí)間段，靈敏度較RIA高，操作較簡(jiǎn)單分類(lèi)單位點(diǎn)IRMA直接用放射標(biāo)記物質(zhì)檢測(cè)另一個(gè)雙位點(diǎn)IRMA同時(shí)與待測(cè)抗原的兩個(gè)抗原位點(diǎn)結(jié)合；靈敏度高間接IRMA雙抗夾心結(jié)合間接法再結(jié)合IRMARIA與IRMA的比較 P1697. 金免疫技術(shù)快速診斷膠體金特性膠體特性電解質(zhì)可以使之水化膜破壞而聚集沉淀呈色性和光吸收顆粒直徑520

11、nm：葡萄酒紅色；顆粒直徑2040nm：深紅色；顆粒直徑60nm：藍(lán)紫色等分類(lèi)斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)(DIGFA)（可以定性）將特異性抗原或抗體固定在硝酸纖維素膜上，其下面有吸水材料，形成滲濾裝置；陽(yáng)性有紅色出現(xiàn)有間接法和雙抗夾心法斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)雙抗夾心法較大分子抗原；質(zhì)控線紅色且T區(qū)顯紅為陽(yáng)性競(jìng)爭(zhēng)法小分子抗原或半抗原；質(zhì)控線紅色且T區(qū)顯紅為陰性8. 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)高靈敏高特異性發(fā)光原理分子或原子中的電子吸收能量躍遷后回到基態(tài)會(huì)發(fā)出光子，從而發(fā)光化學(xué)發(fā)光常溫下，伴隨化學(xué)反應(yīng)過(guò)程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象發(fā)光標(biāo)記物直接參與發(fā)光反應(yīng)的標(biāo)記物標(biāo)記物本身就是化學(xué)發(fā)光中的能量轉(zhuǎn)移載體，發(fā)光底物；如魯米諾

12、類(lèi)、吖啶酯類(lèi)、苯酚類(lèi)以催化反應(yīng)或能量傳遞參與發(fā)光的酶標(biāo)記物即作催化劑，又參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)HRP對(duì)魯米諾和H2O2起催化作用ALP以能量傳遞參與氧化反應(yīng)的非酶標(biāo)記物不直接參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；三聯(lián)吡啶釕具體技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)以化學(xué)發(fā)光物質(zhì)(如吖啶酯)直接標(biāo)記Ag或Ab，發(fā)生免疫反應(yīng)后，直接引發(fā)化學(xué)發(fā)光進(jìn)行檢測(cè)化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)(CLEIA)采用催化某一發(fā)光反應(yīng)的酶標(biāo)記Ag或Ab，形成酶標(biāo)記抗原-抗體化合物；加入了催化發(fā)光的酶，使發(fā)光速度加快生物發(fā)光免疫分析(BLIA)利用生物發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記Ag或Ab微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析順磁性微粒子為載體、用ALP標(biāo)記；以AMPPD作為發(fā)光劑電化學(xué)發(fā)光免

13、疫分析三聯(lián)吡啶釕是電化學(xué)發(fā)光免疫分析用的發(fā)光劑；檢測(cè)廣泛；持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)；信號(hào)強(qiáng)；靈敏度高等第三部分：具體物質(zhì)的檢測(cè)免疫細(xì)胞的檢測(cè)細(xì)胞分離法外周血WBC的分離自然沉降法和高分子聚合物沉降法外周血單個(gè)核細(xì)胞分離密度梯度離心法；淋巴細(xì)胞分離玻璃器皿吸附；媳婦過(guò)濾；磁鐵吸引淋巴細(xì)胞亞群的分離純化E玫瑰花結(jié)分離：T細(xì)胞能結(jié)合SRBC結(jié)合尼龍分離：T細(xì)胞表面絨毛短少，B則多長(zhǎng)、易吸附在在尼龍毛上親和板結(jié)合法：?jiǎn)慰古c不同亞群的淋巴細(xì)胞結(jié)合在板上不易被洗掉流式細(xì)胞儀分選法磁性激活細(xì)胞分離器分離法：用于T細(xì)胞亞群分離T細(xì)胞檢測(cè)表面標(biāo)志檢測(cè)用間接免疫熒光、酶免疫技術(shù)等檢測(cè)T細(xì)胞表面的表面標(biāo)志，如CD分子和MHC等T

14、細(xì)胞受體檢測(cè)E受體檢測(cè)人T細(xì)胞有SRBC抗體，可形成玫瑰花環(huán)IL-2受體檢測(cè)雙抗體夾心、ELISA等T細(xì)胞功能檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)3H-TdR摻入法MTT比色法T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)形態(tài)學(xué)檢查51Cr釋放法CTL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡檢測(cè)法抑制性T細(xì)胞功能檢測(cè)利用ConA誘導(dǎo)Ts細(xì)胞，比較誘導(dǎo)與未經(jīng)誘導(dǎo)的T對(duì)B抗體產(chǎn)生的抑制，評(píng)價(jià)T市功能B細(xì)胞檢測(cè)表面抗原檢測(cè)檢測(cè)CD19、CD20、CD22等B細(xì)胞受體檢測(cè)SmIg標(biāo)志的檢測(cè)花環(huán)形成試驗(yàn)檢測(cè)B細(xì)胞表面的Fc受體B細(xì)胞功能檢測(cè)體內(nèi)檢測(cè)免疫球蛋白測(cè)定血清中血型抗體的測(cè)定體外檢測(cè)反向溶血空斑形成實(shí)驗(yàn)等自然殺傷細(xì)胞的檢測(cè)、吞噬細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞因子及其受體的檢測(cè)（具

15、體細(xì)胞因子檢測(cè)見(jiàn)課本）生物學(xué)測(cè)定法細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的細(xì)胞增殖和增殖抑制試驗(yàn)3H-TdR摻入法MTT法染料染色法直接計(jì)數(shù)法：直接計(jì)數(shù)活細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)細(xì)胞因子介導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)4小時(shí)51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法3H-TdR釋放法細(xì)胞因子抗病毒活性的檢測(cè)方法趨化活性得到測(cè)定免疫學(xué)測(cè)定ELISA雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法Western印跡單個(gè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的測(cè)定反向反向溶血空斑實(shí)驗(yàn)RHPA酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)ELISPOT細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的測(cè)定分子生物學(xué)方法Southern印跡Northern印跡RT-PCR基因芯片人類(lèi)白細(xì)胞抗原分型檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)分型微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)：原理、陽(yáng)陰性細(xì)胞學(xué)分型雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

16、；單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基因分型限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-RFLP特異性寡核苷酸探針-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSOP序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSP單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng) PCR-SSCP基于基因測(cè)序的HLA分型 基因芯片超敏反應(yīng)及其檢驗(yàn)超敏類(lèi)型型發(fā)作快、消退快；有明顯的個(gè)體和遺傳傾向；不引起嚴(yán)重的組織細(xì)胞損傷；主要由于IgE的產(chǎn)生和介導(dǎo)過(guò)敏性休克、呼吸道過(guò)敏、消化道過(guò)敏、皮膚過(guò)敏型細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型；有IgG和IgM等其他介導(dǎo)，然后再補(bǔ)體和吞噬細(xì)胞的作用下引起細(xì)胞溶解或組織損傷輸血反應(yīng)；新生兒溶血反應(yīng)；自身免疫溶血性貧血；肺-腎炎綜合征；藥物過(guò)敏引起的血細(xì)

17、胞減少；甲狀腺功能亢進(jìn)型抗原抗體(IgM、IgG或IgA)形成免疫復(fù)合物IC并沉積于全身多處實(shí)驗(yàn)性局部過(guò)敏；人類(lèi)局部ICD；血清??；急性免疫復(fù)合物性腎小球；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎型由T細(xì)胞與抗原作用后，引起單個(gè)核細(xì)胞侵潤(rùn)；遲發(fā)型，屬于細(xì)胞免疫應(yīng)答傳染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)(結(jié)核病、病毒和某些真菌感染)；接觸性皮炎超敏反應(yīng)免疫學(xué)檢驗(yàn)(皮膚試驗(yàn)假陽(yáng)性和假陰性原因*)變應(yīng)原皮膚試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)I型；青霉素和破傷風(fēng)；需稀釋挑刺實(shí)驗(yàn)I型；刺破皮膚不出血，滴加抗原；可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)抗原斑貼試驗(yàn)型；實(shí)驗(yàn)抗原貼皮膚，敏感度低，假陽(yáng)性少血清總IgE檢測(cè)放射免疫吸；附酶聯(lián)免疫；化學(xué)發(fā)光特異性IgE測(cè)定放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)；酶聯(lián)免疫測(cè)定；化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫復(fù)合物檢測(cè)補(bǔ)體相關(guān)測(cè)定法C1q結(jié)合試驗(yàn)液相法固相法C1q偏離實(shí)驗(yàn)抗補(bǔ)體實(shí)驗(yàn)?zāi)z固素結(jié)合試驗(yàn)抗球蛋白測(cè)定mRF固相抑制試驗(yàn)mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Raji細(xì)胞試驗(yàn)免疫預(yù)防與計(jì)劃免疫1.特異性與非特異性的大條2.滅活疫苗和減毒疫苗的特征比較3.人工被動(dòng)免疫疫苗的種類(lèi)4.新型疫苗5.兒童免疫程序兩個(gè)沒(méi)地方寫(xiě)HAT培養(yǎng)基選擇作用HAT成分H：次黃嘌呤，和T提供核酸合成的前體A：氨基蝶呤葉酸拮抗物，即阻斷DNA合成主要途徑T：胸腺嘧啶核苷酸，和H提供核酸合成的前體選擇作用由于A的存在，阻斷DNA合成的