熒光分光光度法測定人血漿中左氧氟沙星的濃度

1、    熒光分光光度法測定人血漿中左氧氟沙星的濃度        摘要目的：建立熒光分光光度法測定人血漿中左氧氟沙星濃度。方法：以三氯乙酸沉淀蛋白，分離后加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH4.0)測熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長294 nm，發(fā)射波長496 nm。結(jié)果：左氧氟沙星濃度在0.15.0 g.ml-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=24.916X1.297，r=0.9994。平均回收率為98.52%，RSD為3.12%。結(jié)論：該方法簡便、快速。關(guān)鍵詞熒光分光光度法；左氧氟沙星；血

2、漿濃度中分類號：R969.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1006-0103(2000)02-0103-02 DETERMINATION OF LEVOFLOXACIN CONCENTRATION IN HUMANPLASMA BY SPECTROFLUOROMETRYWU Dong-fang,SUN Yan-rong,ZHANG Ru-hong，CAI Hong-sheng(The First Affiliated Hospital,Hubei Medical University, Wuhan 430060 China)Astract OBJECTIVE：A spectrofluorometry

3、 was used for determination of levofloxcin concentration in human plasma.METHODS：Human plasma protein was precipitated with trichloroacetic acid and fluoroscent intensity of levofloxacin was measured in acetic acid-sodium acetate buffer(pH4.0).Its ex and em was 294nm and 496 nm ,respectively.RESULTS

4、：Linear relationship was found in the range from 0.1 to 5.0 g*ml-1CONCLUSION:The method is simple,rapid and accurate.Key words Spectrofluorometry；Levofloxacin；Human plasma concentrationCLC number:R969.1Document code:BArticle ID:1006-0103(2000)02-0103-02左氧氟沙星(levofloxacin,LVFX)是氧氟沙星的左旋光學(xué)異構(gòu)體，對革蘭氏陽性菌及包

5、括綠膿桿菌在內(nèi)的革蘭氏陰性菌具有廣譜和高效抗菌活性，其抗菌活性是氧氟沙星的兩倍1。目前，測定LVFX血藥濃度的方法有微生物法和高效液相色譜熒光法2，3，但操作繁瑣，測定時間長。因此，建立了熒光分光光度法測定LVFX血漿濃度。1儀器與試藥RF-5000熒光分光光度計(日本島津)；PHS-25型酸度計(上海分析儀器廠無錫分廠)；80-2型離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠)。LVFX(含量100.1%，日本第一制藥株式會社)；LVFX貯備液(取干燥至恒重的LVFX 20 mg，加0.01 mol.L-1HCl溶解，并定容至50 ml)；LVFX應(yīng)用液(精密量取貯備液1.25 ml，加水定容至50 ml,1

6、0 g.ml-1);三氯乙酸、醋酸、醋酸鈉為分析純。2方法與結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)條件選擇.ml-1的LVFX 0.2 ml，加10%三氯乙酸0.2 ml，混勻，離心10分鐘(3 000 r.min-1)。取上清液0.2 ml，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH4.0)2.8 ml，在RF-5 000熒光分光度計狹縫10 nm.(10 nm)-1上進(jìn)行激發(fā)光譜與發(fā)射光譜掃描，結(jié)果見1。LVFX的激發(fā)波長與發(fā)射波長分別為294 nm和496 nm，且血漿成分無干擾。1左氧氟沙星激發(fā)光譜 (A)和發(fā)射光譜 (B)C，D為空白血漿2.1.2pH對熒光強(qiáng)度的影響取血漿濃度為4 g.ml-1的LVFX血漿0.2 ml，

7、按“2.1.1”項(xiàng)方法處理，在激發(fā)波長294 nm，發(fā)射波長496 nm處測定熒光強(qiáng)度。結(jié)果LVFX在pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液中熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，且pH45范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度變化不大。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取LVFX應(yīng)用液適量，加空白血漿，配制成濃度為0.1，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 g.ml-1的標(biāo)準(zhǔn)血漿。取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿0.2 ml，加10%三氯乙酸0.2 ml混勻，離心10分鐘(3 000 r.min-1)。吸取上清液0.2 ml，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH4.0)2.8 ml，混勻，測熒光強(qiáng)度。同時取空白血漿同法操作，作空白校正。以熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)，LVFX血

8、漿濃度為橫座標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程為：Y=24.916X1.297，r=0.9994。血漿濃度在0.15.0 g.ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，由信噪比求得最低檢出濃度為0.1 g.ml-1。2.3LVFX血漿的回收率分別吸取LVFX應(yīng)用液適量，加空白血漿，配制成不同濃度的LVFX，按“2.2”項(xiàng)下操作，測熒光強(qiáng)度。按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出實(shí)測濃度，并計算回收率，結(jié)果見表1。表1血漿中左氧氟沙星的回收率(n=4)Table 1Recovery of LVFX in plasma(n=4)加入量Added g.ml-1測定量Measuredg.ml-1回收率Recovery%平均回收率Average rec

9、overy%0.50.508101.601.00.95595.502.01.92496.1798.524.04.031100.792.4精密度試驗(yàn)取不同濃度的LVFX標(biāo)準(zhǔn)血漿，按“2.2”項(xiàng)下方法操作，于一日內(nèi)或連續(xù)數(shù)日測定，計算日內(nèi)及日間變異系數(shù)，結(jié)果見表2。 表2血漿中左氧氟沙的精密度(n=3)Table 2Precision of LVFX in plasma(n=3)LVFX的濃度Concentrationof LVFXg.ml-1日內(nèi)Within-day日間Beween-dayg.ml-1RSD%±gvml-1RSD%0.50.5030.790.5100.741.00.95

10、10.570.9460.902.01.9270.141.9210.514.04.0290.804.0140.612.5血漿中LVFX濃度的測定準(zhǔn)確吸取血漿0.2 ml，按“2.2”項(xiàng)下方法操作，測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血漿濃度。5名患者口服LVFX300 mg后，1小時血漿濃度分別為4.132、3.021、3.460、3.723 g.ml-1。 3討論3.1所建立的方法與高效液相色譜法及微生物法相比，具有操作簡便，分離快速等優(yōu)點(diǎn)，適用于LVFX的快速分離。3.2pH對LVFX熒光強(qiáng)度影響較大，對不同pH值的醋酸-醋酸鈉緩沖液實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在室溫條件下，pH在4.05.0間熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，且

11、變化較小。隨著pH值的增大或減小，其熒光強(qiáng)度均隨之降低，因此，選用pH4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液。作者簡介：吳東方，男，碩士，副教授。吳東方（湖北醫(yī)科大學(xué)附一醫(yī)院，湖北 武漢 430060）孫艷蓉（湖北醫(yī)科大學(xué)附一醫(yī)院，湖北 武漢 430060）張如鴻（湖北醫(yī)科大學(xué)附一醫(yī)院，湖北 武漢 430060）蔡鴻生（湖北醫(yī)科大學(xué)附一醫(yī)院，湖北 武漢 430060）參考文獻(xiàn)1Nobuki Aoki,Toshimaru Usuda,Yutaka Koda， et al. Clinical pharmacology and efficacy of levofloxacin in elderly patientsJ.Jap J Antibiot,1992,45(5)5302Kenichi Tanaka,Masanori Iwamoto,Shigefumi Maesaki,et al.Laboratory and clinical studies on levofloxacinJ.Jap J Antibiot,1992,45(5)5483Good