食品中大腸菌群計數(shù)第一法

1、食品微生物檢測技術課程-考核單項目食品衛(wèi)生指標菌的檢測任務食品中大腸菌群計數(shù)技能點食品中大腸菌群計數(shù)檢測標準（GB 4789.3-2016)及解讀食品中大腸菌群計數(shù)-第一法MPN計數(shù)及報告食品中大腸菌群計數(shù)-第一法檢測程序步驟考核目標熟練操作 強化理解適用范圍教學 行業(yè)培訓 分值100一、 理論題每題5分共計35分1什么是大腸菌群？2測定大腸菌群有什么意義？3大腸菌群的檢測依據(jù)是什么？ 4 大腸菌群時樣品如何稀釋？5什么是初發(fā)酵試驗？6什么是復發(fā)酵試驗？7簡述大腸菌群測定第一法的步驟。二、實操題8用第一法檢測某一樣品中的大腸菌群數(shù)（60分）三、拓展題9大腸菌群測定實驗時挑取菌落有哪些注意事項（

2、5分）參考答案1答：大腸菌群系指一群能在37發(fā)酵乳糖、產酸、產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。2答意義：該菌主要來自于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質量，推斷食品中有無污染腸道致病菌。食品中大腸菌群數(shù)是以mL（g）檢樣內大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示的。3答：食品中大腸菌群的檢測需依照中華人民共和國國家標準GB 4789.3-2016食品安全國家標準，食品微生物學檢驗，大腸菌群計數(shù)。嚴格執(zhí)行。4答：1）用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL，沿管壁緩緩注入 9 mL 磷酸鹽緩沖液 或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液

3、面），振搖試管或換用 1 支 1 mL 無菌 吸管反復吹打，使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。2）根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次，換用 1 支 1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過 15 min。5答：每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1 mL，則用雙料LST肉湯），36 1 培養(yǎng)24 h2 h，觀察倒管內是否有氣泡產生，24 h2 h產氣者進行復發(fā)酵試驗，如未產氣則繼續(xù)

4、培養(yǎng)至48 h2 h，產氣者進行復發(fā)酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。6答：用接種環(huán)從產氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36 1 培養(yǎng)48 h2 h，觀察產氣情況。產氣者，計為大腸菌群陽性管。7答：檢驗錢準備-樣品處理-稀釋初發(fā)酵復發(fā)酵報告。8操作要點：按照GB 4789.3-2016的第一法操作程序進行大腸菌群的測定。9答：挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率也有密切的關系。在實際工作中由于工作量大，通常只挑取一個菌落，但影響大腸菌群檢出率因素很多，如食品種類、菌落色澤和形態(tài)、細菌種類等，只挑取一個菌落，由于幾率問題，很難避免假陰性的出現(xiàn)，尤其當菌落不典型時。所以，挑取菌要挑取典型菌落，如無典型菌落則應當多挑取幾個，以免出現(xiàn)假陰性。項目考核內容分值考核記錄（以“”表示）主要扣分點記錄得分準備階段資料查閱情況3詳細不詳細制定方案階段小組討論3認真不認真初步形成操作方案5準確不準確整改方案4完整不完整確定方案3詳細不詳細執(zhí)行方案階段準備工作2準確不準確樣品處理8準確不準確樣品10倍系列稀釋8