果蠅唾腺染色體的觀察(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上遺傳學(xué)實驗報告題目：果蠅唾腺染色體標(biāo)本的制備與觀察姓名： 學(xué)號： 班級： 時間： 一、 實驗?zāi)康模?. 練習(xí)剖取果蠅三齡幼蟲唾液腺的方法。2. 掌握制作果蠅唾腺染色體標(biāo)本的技術(shù)。3. 觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。二、 實驗原理：1881年D. Kostoff用壓片法首先在D. melanogaster 果蠅幼蟲的唾液腺細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)了特別巨大的染色體唾液腺染色體（salivary gland chromosome）。但到后來，EHeitz和HBauer（1933）以及TSParnter（1933）才指出它在細(xì)胞學(xué)上的意義。事實上，雙翅目昆蟲（如搖蚊、果蠅等）的幼蟲期都

2、具有很大的唾腺細(xì)胞，其中的染色體就是巨大的唾液腺染色體。這些巨大的唾液腺染色體具有許多重要特征，為遺傳學(xué)研究的許多方面，如染色體結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、基因差別表達(dá)等提供了獨(dú)特的研究材料。果蠅唾腺染色體的特點：1) 巨大染色體：這種染色體比普通染色體大得多，寬約5um，長約400um，其染色體連續(xù)進(jìn)行多次細(xì)胞內(nèi)復(fù)制卻不進(jìn)行細(xì)胞的分裂，染色體的各拷貝不分開，大約有1000-4000根染色體絲拷貝相當(dāng)于普通染色體的100150倍，因而又稱為巨大染色體。2) 多線染色體：果蠅的唾腺細(xì)胞停止在分裂間期（永久間期 ），染色體核蛋白纖維不斷復(fù)制，平行排列形成巨大而伸展的多線染色體唾腺染色體經(jīng)過多次復(fù)制而并不分開，

3、每條染色體大約有10004000根染色體絲的拷貝，所以又稱多線染色體(polytene chromosome)。3) 體聯(lián)會：類似有絲分裂中的同源染色體聯(lián)會。果蠅的體細(xì)胞中共有8條染色體，其中有3對常染色體，1對性染色體，唾腺細(xì)胞同源染色體之間相互配對（類似減數(shù)分裂前期I），形成一條染色體，我們稱為體細(xì)胞配對，因此在果蠅的唾腺細(xì)胞中只能看到四條巨大的染色體，染色體數(shù)只有體細(xì)胞的一半。4) 橫紋結(jié)構(gòu)：染色體上有橫紋結(jié)構(gòu)，這些橫紋的數(shù)目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征；可用于基因定位。5) Puff結(jié)構(gòu)：幼蟲的不同發(fā)育期，濃縮的染色質(zhì)纖維會成群解旋、松開，形成泡狀松散結(jié)構(gòu)，使相應(yīng)的基

4、因得以表達(dá)，這種泡狀結(jié)構(gòu)稱Puff結(jié)構(gòu)，亦稱染色體的疏松。果蠅染色體在科學(xué)研究中還有較重要的作用。1953年發(fā)現(xiàn)了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，當(dāng)時發(fā)現(xiàn)的DNA為B型DNA，螺旋結(jié)構(gòu)為右旋，每旋轉(zhuǎn)一圈為10個堿基（右旋結(jié)構(gòu)還包括A型C型等），后來人工合成了左旋的DNA（CGCGCG），這種DNA稱為Z型DNA，每旋轉(zhuǎn)一圈為12個堿基，那么在自然條件下的生物中是否存在Z型的DNA呢？研究發(fā)現(xiàn)部分蛋白可以特異結(jié)合左旋DNA，Z型DNA在注射到動物體內(nèi)后很快會誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，而B型DNA卻不易誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生，用人工合成的Z-DNA免疫動物誘導(dǎo)得到抗體，該抗體用熒光標(biāo)記以后對果蠅的唾腺染色體進(jìn)行雜交，發(fā)現(xiàn)部分區(qū)

5、域有強(qiáng)的熒光信號，證實了自然條件下Z-DNA的存在。三、 實驗材料、器具和藥品：1. 材料：大果蠅的三齡幼蟲。2. 器具： 雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙等。3. 藥品： 改良苯酚品紅溶液、生理鹽水、1mol/L鹽酸、蒸餾水。四、 實驗步驟：1. 分離唾腺：將幼蟲放在含有一滴生理鹽水的潔凈載玻片上。在解剖鏡下觀察：幼蟲頭部有黑色的口溝，尾端有一對黃色的后氣門。雙手各持一枚解剖針，用左手解剖針壓住幼蟲中部，用右手解剖針自幼蟲口溝后切斷頭部，體內(nèi)各器宮便從切口處擠出，一對唾腺也隨之而出。將唾腺以外的其他部分以及脂肪體去除備用。2. 解離：用吸水紙吸去生理鹽水，

6、然后加1滴1mol/L HCl溶液于腺體上，作用3min。3. 沖洗：用吸水紙吸去HCl ，滴加蒸餾水于腺體上進(jìn)行沖洗三次，每次1-2min。4. 染色：吸去蒸餾水，加1滴改良苯酚品紅溶液，染色20min。5. 壓片觀察：加蓋玻片以后用大拇指用力壓片?？梢陨晕⑤p搓一下，但是要向同一個方向，可能會使細(xì)胞分散的更好些。6. 觀察：顯微鏡下尋找分散較好唾腺染色體，觀察唾腺染色體的特點，并繪圖。五、 注意事項：1. 盡可能完整剖取唾腺，小心剝除脂肪。2. 沖洗染色時防止腺體丟失。3. 謹(jǐn)防腺體干涸，及時滴加HCl或染液。 六、 實驗結(jié)果：繪制觀察到的唾腺染色體的圖像。七、 實驗分析與討論：1. 為了順利找到唾腺，要把握好以下幾點：位于幼蟲體前約三分之一處；是囊狀結(jié)構(gòu)，常附著不透明的帶狀脂肪；唾腺細(xì)胞較大，輪廓清晰。2. 要將脂肪組織清除干凈，否則影響觀察。壓片時不能來回揉壓。3. 由于樣品難用肉眼觀察到，在各步操作過程中（如沖洗、吸水等）要小心謹(jǐn)慎，以免樣品丟失。4. 掌握好染色時間，時間過短則染色效果不明顯，時間過長則容易使背景染色，影響觀察。5. 觀察唾液腺染色體制片，尋找形態(tài)良好、分散適中的圖像仔