胃癌細胞rasp21表達與DNA含量及核形態(tài)計量參數(shù)關(guān)系的分析

1、    胃癌細胞rasp21表達與DNA含量及核形態(tài)計量參數(shù)關(guān)系的分析        摘要目的：檢測54例胃癌切除標本的癌組織中rasp21表達、癌細胞核形態(tài)參數(shù)和DNA含量及倍體分布類型。方法：采用組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)和自動像分析方法。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)胃癌細胞p21表達水平隨著DNA含量不斷增多、倍體成倍增加而逐漸下降。表明rasp21過度表達主要出現(xiàn)在細胞表型發(fā)生明顯轉(zhuǎn)化之前。結(jié)論：胃癌細胞p21的表達水平與癌細胞核形態(tài)參數(shù)、癌腫大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)。關(guān)鍵詞胃癌rasp

2、21DNA含量細胞核形態(tài)計量參數(shù) Relationship between Expression of ras p21 and the DNA Content and Nuclear Morphometric Parameters in Gastric CarcinomaWang ZhaoSong GuangfangChang Ying et al(Beijing Friendship Hospital,Capital Medical University,Beijing)AbstractThe expression of ras p21, nuclear morphometric param

3、eters and DNA content in gastric carcinoma tissues were examined by histochemical automatic image analysis techniqueIt was found that the expression level of p21 in gastric cancer cells decreased with the increase of their DNA content and ploidy.It suggested that overexpression of ras p21 in gastric

4、 cancer might be initiated before the cytophenotypic transformationIn addion, it was found that expression level of p21 had no relationship with the nuclear morphometric parameter, tumor size or node metastasis of gastric cancerKey WordsGastric carcinomap21DNA contentNuclear morphometric parameter原癌

5、基因ras的激活和(或)其產(chǎn)物p21蛋白的過量表達與胃癌發(fā)生有關(guān)1。在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，細胞核的形態(tài)、DNA含量和倍體類型都有變化。本研究通過對54例胃癌組織p21表達水平、細胞核形態(tài)6種計量參數(shù)和DNA含量及倍體分布類型的檢測，探討胃癌細胞生物學(xué)行為的客觀規(guī)律。1材料與方法1.1材料標本隨機選自1994年1997年本院54例胃癌手術(shù)切除標本。1.2切片制備標本用10福爾馬林液固定，石蠟包埋，作厚度為4m的連續(xù)切片，分別作HE染色、Feulgen染色及抗p21的ABC法免疫組織化學(xué)染色。1.3p21免疫組織化學(xué)檢測抗p21單克隆抗體NCCRAS001為丹麥DAKO公司生產(chǎn)，ABC試劑購于

6、美國VECTOR公司。每張免疫組織化學(xué)切片均用常規(guī)ABC法(p21單抗稀釋度1:20)，同時設(shè)有陰性對照。陰性對照組除用磷酸緩沖液代替p21單抗外，其余步驟均同實驗組。1.4DNA倍體測定用德國KONTRON公司生產(chǎn)的IBAS全自動像分析系統(tǒng)測量Feulgen染色切片中細胞核DNA相對含量。以細胞絕對頻數(shù)為縱坐標,以DNA含量為橫坐標,繪出DNA含量直方。1.5細胞核形態(tài)測量在測量細胞核DNA含量的同時,測量胃癌細胞核的面積、周長、平均直徑、長軸、短軸及凹凸度等六種形態(tài)參數(shù)。2結(jié)果2.1形態(tài)學(xué)觀察54例胃癌標本中，高分化腺癌17例,低分化腺癌20例,粘液腺癌9例,未分化癌8例。肉眼形態(tài)以潰瘍型

7、居多(39例)。癌塊最大直徑在1.512cm之間,其中26例發(fā)現(xiàn)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。2.2胃癌組織p21的表達p21免疫組化染色切片中未著色者為染色陰性,胞漿內(nèi)和(或)細胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒者為染色陽性3(1)。陰性對照組免疫組化染色切片均無棕黃色顆粒著色。54例胃癌標本中p21陽性率為55.6。1粘液腺癌rasp21的ABC免疫組化染色×4562.3DNA含量和DNA倍體分布類型根據(jù)Feulgen染色切片(2)上DNA含量的直方形式,將54個標本分為以下3種DNA倍體分布類型4。型:在二倍體或近二倍體區(qū)域內(nèi)有一明確峰值;型:主要峰值位于四倍體部位;型:呈多峰形式或廣泛彌散分布，但無明顯

8、峰值出現(xiàn)。54例胃癌組織DNA倍體分布類型以型為主24例(44.5),型18例(33.3),型最少為12例(22.2)。2胃癌細胞Feulgen染色2.4p21表達與DNA倍體的關(guān)系結(jié)果見表1。表1p21表達與DNA倍體關(guān)系p21表達DNA倍體分布類型合計陽性1011930陰性271524合計12182454陽性率()83.361.137.555.62=7.14P<0.052.5p21表達與細胞核形態(tài)參數(shù)關(guān)系54例胃癌的6種核形態(tài)參數(shù)經(jīng)計算機直接算出其平均值:面積46.28±10.95m2,周長28.91±4.72m,平均直徑8.74±1.46m,長軸11.

9、01±1.92m,短軸6.05±0.98m,凹凸度1.19±0.091,每組核形態(tài)參數(shù)以其平均值再分為2組,分別比較它們與p21表達之間的關(guān)系(表2)。表2p21表達與細胞核形態(tài)參數(shù)的關(guān)系分組p21表達2陽性陰性面積(m2)46.2820123.23>46.28913周長(m)28.9120103.38>28.911014平均直徑(m)8.7415172.40>8374157長軸(m)11.0121150.34>11.0199短軸(m)6.0514151.34>6.05169凹凸度1.191782.92>1.191316P均&g

10、t;0.052.6p21表達與癌腫大小的關(guān)系胃癌標本按癌塊大小,分成最大直徑3cm或>3cm兩組,對比其與p21表達的關(guān)系,結(jié)果見表3。表3p21表達與癌塊大小的關(guān)系癌塊大小p21表達合計陽性陰性3cm13821>3cm171633合計3024542=1.69P>0.052.7p21表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系54例胃癌標本中有26例發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,有或無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織p21表達情況見表4。表4p21表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系轉(zhuǎn)移情況p21表達合計陽性陰性無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19928有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移111526合計3024542=2.60P>0.053討論本研究發(fā)現(xiàn)胃癌細胞p21表達水

11、平隨著DNA含量的不斷增多而逐漸下降。原癌基因ras的活化和過度表達主要出現(xiàn)在DNA倍體分布類型為型和型的癌組織(即DNA含量尚未出現(xiàn)成倍增加時),當(dāng)癌細胞DNA含量成倍增加時(型為主者),p21的表達水平則明顯下降,3組p21表達有顯著性差異。同樣情況也見于膀胱癌4。鑒于癌前異型增殖p21表達水平較胃癌為高,Czerniak對21例早期胃癌和癌旁粘膜p21表達的檢測也發(fā)現(xiàn)癌前病變p21表達水平比早期胃癌要高5。而且,在癌細胞中,p21的表達又隨著倍體的成倍增加而逐漸下降。在細胞表型轉(zhuǎn)化過程中,p21的過度表達對啟動表型轉(zhuǎn)化至關(guān)重要,但對維持已轉(zhuǎn)化了的表型特征則是無關(guān)緊要的。這可為認識細胞癌變

12、過程提供重要的分子生物學(xué)信息。胃癌細胞p21過度表達與細胞核各種形態(tài)參數(shù)的關(guān)系,經(jīng)卡方檢驗表明,兩者之間并無明顯的相關(guān)性。說明p21表達水平與細胞核形態(tài)無直接聯(lián)系,只是與DNA含量有一定關(guān)聯(lián)。Hamilton通過對46例胃癌標本的核形和DNA含量分析后，認為核的大小與DNA含量無顯著相關(guān)性,而可能與細胞增殖周期,異染色質(zhì)含量的變化及常染色質(zhì)的轉(zhuǎn)錄活動相關(guān)6。此外,本研究還發(fā)現(xiàn)p21的表達與胃癌的癌塊大小和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。作者單位：王昭常瑛熊梅(首都醫(yī)科大學(xué)北京友誼醫(yī)院內(nèi)三科北京市100050)宋光放(同濟醫(yī)科大學(xué)病理系)馬心怡(北京垂楊柳醫(yī)院內(nèi)科)參考文獻1

13、Katz MESignal transduction from multiple ras effectorsCurr Opin Genet Dev,1997;7(1):792Carneiro FImmunohistochemical analysis of ras oncogene p21 product in human gastric carcinomas and their adjacent mucosas.Pathol Res Pract,1992;188:2633Konishi N.Comparison of ras activation in prostate carcinoma in Japanese and American men.Prostate,1997;1:534Velthoven VRImage cytometry determination of ploidy level,proliferative activity,and nuclear size in a series of 314 transitional bladder cell carcinomaHum Pathol,1995;26(1):35Czerniak BExpression of ras oncogene p21 protein in earl