曲霉菌屬檢驗(yàn)技術(shù)

1、曲霉菌屬檢驗(yàn)技術(shù)曲霉菌是絲孢目叢梗孢科的真菌。廣泛分布于自然界，達(dá) 900余種，分為18個(gè)群，對工 業(yè)和醫(yī)藥的用途很大。釀酒造醬，生產(chǎn)有機(jī)酸及酶制劑， 抗生素等。曲霉菌是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常污染的真菌之一?？筛腥緞游?，也可在寄生的飼料、糧食中產(chǎn)生毒素，動物食后引致中毒。 人體對曲霉有極強(qiáng)免疫力， 只有在免疫功能降低時(shí)才能 致病，如使用免疫抑制劑、腎上腺皮質(zhì)激素，放療化療， 各種惡性腫瘤、糖尿病、AIDS等可誘發(fā)曲霉病。曲霉可侵犯許多部位， 呼吸系統(tǒng)曲霉病主要有三種： 過 敏型、曲霉球和肺炎。全身性曲霉病多發(fā)生敗血癥， 危 及生命。曲霉產(chǎn)生黃曲霉毒素、雜色曲霉毒素與原發(fā)性肝癌有關(guān)。黃曲霉、寄生曲霉、棕曲霉

2、、雜色曲霉等主要以所產(chǎn)毒素而致病。微生物特性 菌絲：有隔，多細(xì)胞性，有分枝足細(xì)胞（接觸培養(yǎng)基的部分，厚壁而膨大）分生孢子梗：從足細(xì)胞直立頂囊：孢子梗頂端膨大，半球形或橢圓形小梗：頂囊上，輻射狀，一層或二層桿狀分生孢子：小梗頂端，成串，球形或柱狀，黃、藍(lán)、棕黑八、分生孢子頭：菊花樣的頭狀結(jié)構(gòu)（頂囊，小梗，分生孢子）菌落：絨毛狀或絮狀開始為白色，后菌種不同顏色不同繁殖：多數(shù)：無性少數(shù)：有性1、煙曲霉（A. fumigatus ）煙曲霉廣泛分布于自然界， 在禽舍的地面、墊草、用具及空氣中經(jīng)?？煞蛛x出其孢子。孢子對外界理化因素的作用有較強(qiáng)的抵抗力，煮沸5min，可被殺死；般消毒液要經(jīng)13h才能殺死孢子

3、。對一般的抗生素均 不敏感，制霉菌素、兩性霉素 B、灰黃霉素及碘化鉀對本菌有抑制 作用。煙曲霉菌是曲霉菌屬致病性最強(qiáng)的霉菌。主要引起家禽的曲霉性肺炎及呼吸器官組織炎癥，并形成肉芽腫結(jié)節(jié)。也可感染哺乳動物和人。在混合感染病例中， 除煙曲霉外，亦可見黃曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉、青霉菌 及毛霉菌。本菌引起的霉菌病，世界各國均有報(bào)道。本菌在感染組織的過程中， 還產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)毒素， 可導(dǎo)致動物組織發(fā)生痙攣、麻痹，直至死亡。毒素的提取物對家兔 、豚鼠、小鼠和雞有毒性，兔和犬尤為敏感，但鴿卻有抵抗力，而鶴對本菌感染十分敏感。微生物檢驗(yàn)迸行微生物學(xué)檢查時(shí)要采取病料， 如肺部結(jié)節(jié)、鼻分泌 物、痰液或病損處刮取物

4、， 進(jìn)行切片或壓片，鏡檢，在 高倍鏡下觀察，可見分隔菌絲、分生孢子梗及孢子等結(jié) 構(gòu)。必要時(shí)進(jìn)行分離培養(yǎng)，有鑒別意義的主要特征是：頂囊由分生孢子梗逐漸膨大而形成，狀如燒瓶，小梗著生于頂囊的上半部，小梗單層，小梗和分生孢子鏈按與分生 孢子梗平行的方向升起，菌落呈暗綠色至黑褐色。2、黃曲霉(A. flavus )菌落：黃色頂囊：球形或近球形小梗：雙層，第一層長，布滿頂囊表面，放射狀孢子：球形或梨形，有小棘，成鏈排列黃曲霉毒素(Aflatoxin ，簡稱 AFT或AF)黃曲霉菌中有30%60喲菌株產(chǎn)生毒素，而寄生曲霉菌幾乎都能產(chǎn)生黃曲霉毒素。該毒素常見于霉變的花生、玉米等谷物，在魚粉、肉制品、咸干魚、

5、奶和肝臟中也可發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素對多種動物呈現(xiàn)毒性作用，但不同動物的敏感性不同，鴨、兔、貓、豬、犬較敏感，猴、豚鼠、小 鼠、羊敏感性較低。黃曲霉-奉素的種類和結(jié)枸墓本結(jié)構(gòu)是一個(gè)磁鼠咲喃和一介華L雜荼鄰萌（香豆素）。目前已發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素和I關(guān)彳匕令暢有B、B2.G“ B歸.、M比等二十種左右黃曲霉毒素的理化性質(zhì)：一般特性：幾乎是無色，B】的分子量為312, 熔點(diǎn)為268 - 269乜熒光特點(diǎn)：黃曲霉毒素在紫外線照射下可產(chǎn) 生熒光，B族毒素顯藍(lán)紫色熒光；G族毒素顯 黃綠色熒光溶解特性：難溶于水.己烷.石油瞇和乙易溶于氯仿、甲醇.丙酮.苯.乙睛等多種有機(jī)溶劑黃曲霉毒素的理化生質(zhì)：對熱穩(wěn)定，分解溫度約3

6、009中性和酸性溶液中扌知隱定，在強(qiáng)堿（pH9-10） 溶液中可被迅速分解5 %的次氮酸鈉溶液可瞬時(shí)破壞垂素有很高的儲藏穩(wěn)定性根據(jù)黃曲霉毒素的毒性作用，可將中毒分為三類，即急性或亞急性、慢性、致癌性。黃曲霉毒素的產(chǎn)毒條件:產(chǎn)毒微生物:黃曲 霉產(chǎn)毒菌株的 比例在6 0 - 9 4 %之間寄生曲霉的產(chǎn)奉菌株可達(dá)100%產(chǎn)毒的基質(zhì):玉米.花生容易滋長黃曲霉和被黃曲霉毒 素污染有時(shí)可在田間被黃曲霉毒素汚染毒素檢驗(yàn)在各種黃曲霉毒素中，B1的毒性和致癌性最強(qiáng)，其次是G1。黃曲霉污染物中，最常見的是黃曲霉毒素Bl，其含量最高。Ml是B1的代謝產(chǎn)物，用含黃曲霉毒素B1的飼料喂牛，奶?？煞置?M1入牛奶，危害人類健康。美國食品藥品管理局（FDA）對牛奶中的Ml檢測含量控制 <0.5mg/kg，而歐盟則為 < 0.05mg/kg 。毒素檢測 從可疑飼料提取毒素，飼喂I日齡鴨，可見肝壞死、出血及膽管上皮增生等3、雜色曲霉(A. versicolor )分生孢子頭呈粗糙的半球形、放射狀，分生孢子梗無色或微黃、壁厚、光滑頂囊半橢圓形至半球形，頂囊生有雙層小梗。分生孢子為球形、有小刺，呈鏈狀雜色曲霉素由雜色曲霉產(chǎn)生，是化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的一類毒素，其中雜色曲霉素W a為重要的一種，呈淡黃色針狀結(jié)晶。雜色曲霉素具有急性、慢性毒性及致癌性，主要損害肝、 腎。微