生化實驗六 過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定_第1頁
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1、南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院11級拔尖班張茜 111070094過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定生命科學(xué)學(xué)院 11級拔尖班111070094 張茜一、 實驗?zāi)康?. 了解米氏常數(shù)的測定方法2. 學(xué)習(xí)提取生物組織中的酶二、 實驗原理1. 實驗中的反應(yīng)H2 O2 被過氧化氫酶分解出 H2O 和 O2 , 未分解的 H2O2 用 KMnO4 在酸性環(huán) 境中滴定, 根據(jù)反應(yīng)前后的濃度差可以算出反應(yīng)速度: 4 / 42H2O2酶 2H2O + O2 2KMnO4+5H2O2+3H2SO4 2MnO4+K2SO4+8H2O+5O2 本實驗以馬鈴薯提供過氧化氫酶, 以 1/v 1/S 作圖求 Km.2. 米氏反應(yīng)動力學(xué)米氏

2、方程 (Michaelis-Menten Equation):三、 實驗試劑1. 0.02mol/L 磷酸緩沖溶液 (pH=7.0): 實驗室提供.2. 酶液: 稱取馬鈴薯 5g, 加緩沖液 10mL, 勻漿過濾.3. 0.01107mol/L 高錳酸鉀.4. 0.098mol/L H2O2.5. 25%H2SO4.四、 實驗操作取 6 只錐形瓶, 按 表 1 的順序加入試劑.先加好過氧化氫和蒸餾水, 加酶液后立即混合, 依次記錄各瓶的起始反應(yīng)時間. 反映到達 5min 立即加入硫酸終止反應(yīng), 充分混勻. 用 0.0109mol/L 的 KMnO4 溶 液滴定瓶中剩余的過氧化氫至微紅色, 記錄消耗的高錳酸鉀體積.五、 實驗結(jié)果與討論1. 實驗結(jié)果管號012345實際消耗KMnO4/mL0.002.993.935.447.9415.89v/(mmol/min)00.004740.003670.005460.00730.00844S/(mol/L)00.0098 0.0123 0.01640.02450.0490 1/v327.8 364.0 381.4 197.9 99.51/S102.0 81.6 61.1

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