凝膠滲透色譜凈化氣相色譜測定中成藥中有機氯農(nóng)藥的殘留量

1、    凝膠滲透色譜凈化氣相色譜測定中成藥中有機氯農(nóng)藥的殘留量作者：夏品華 張明時 陳文生 伍慶【摘要】  目的建立凝膠滲透色譜（GPC）凈化-毛細管氣相色譜測定中成藥中有機氯農(nóng)藥殘留量的方法。方法凝膠滲透色譜采用的流動相為丙酮-環(huán)己烷 (14)，最佳流速是5 ml/min，最佳餾分收集時間是1526 min。結(jié)果低、中、高3個添加水平的回收率分別為85.5%115.0%，84.3%123.4%，86.7%114.0%，相對標準偏差（RSD）為0.1%9.3%，檢出限0.0080.05g/kg。結(jié)論該方法簡便，分離效果好，靈敏度高，重

2、現(xiàn)性好。 【關(guān)鍵詞】  氣相色譜 凝膠滲透色譜 有機氯農(nóng)藥 中成藥 殘留量有機氯類農(nóng)藥(OCPs)是一類高效廣譜殺蟲劑，廣泛應(yīng)用于殺滅農(nóng)業(yè)害蟲，曾是各國殺蟲劑中使用最廣泛的一大類。這類農(nóng)藥化學性質(zhì)穩(wěn)定，脂溶性強，殘效期長，易在脂肪體內(nèi)蓄積，造成慢性中毒，嚴重危及人體健康，中藥材及中成藥的農(nóng)藥殘留問題近年來逐漸引起人們的重視。盡快建立中藥中農(nóng)藥殘留的檢測方法及限量標準，對保證人們用藥安全具有積極的意義。目前中藥材中有機氯農(nóng)藥殘留測定主要采用有機溶劑提取，濃硫酸凈化，氣相色譜分析。但因中藥成分復雜，其中農(nóng)藥殘留量屬痕量范疇，這樣使得農(nóng)藥的提取、分離、凈化與富集的難度加大。凝膠滲

3、透色譜作為一種自動化的分離技術(shù)在農(nóng)藥殘留分析中得到了推廣和應(yīng)用17。本研究運用凝膠滲透色譜替代硫酸凈化，有效地克服了硫酸凈化回收率偏低的難題，建立的毛細管氣相色譜分析方法，具有操作簡便、分析速度快、分離效能高、檢測靈敏度高等優(yōu)點，適合于中成藥中痕量有機氯農(nóng)藥的測定。  1 材料 Agilent 6890N 氣相色譜儀，配備捕獲檢測器（-ECD），安捷倫GC工作站。GPC純化系統(tǒng)：泵（Waters 515 HPLC Pump ），二極管陣列檢測器（Waters 2996 PAD）, 自動餾分收集器（Waters Fraction Collector III），GPC純化柱（S

4、hodex CLNpak EV2000，20.0 mmID×300 mm），數(shù)據(jù)處理軟件（Waters Empower），5 ml定量環(huán)。OV-1701毛細管色譜柱30 m×0.32 mmID×0.32 m；R210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI）； 電子 分析天平（R200D）。丙酮、環(huán)己烷均為色譜純（天津科密歐），二氯甲烷為分析純（天津科密歐）。農(nóng)藥標準品：甲體-六六六（- BHC）；乙體-六六六（- BHC）；丙體-六六六（- BHC）；丁體-六六六（- BHC）；對對位滴滴依（PP'-DDE）；鄰對位滴滴涕（OP-DDT）；對對位滴滴滴（PP'

5、-DDD）；對對位滴滴涕（PP'-DDT）；五氯硝基苯（PCNB）。所用標準品由 中國 成都化學試劑生產(chǎn)，純度大于99%。用甲醇分別配成0.1 mg/ml的單標儲備液，再分別移取一定量的單標儲備液于10 ml容量瓶中，用丙酮-環(huán)己烷（14）混合液定容，配成混合標準液。  2 方法 2.1 樣品的提取 準確稱取仙靈骨葆膠囊樣品（膠囊直接取其粉末即可，顆粒須經(jīng)磨碎成粉末） 2.5 g于具塞錐形瓶中，加入10 ml水浸泡過夜或超聲30 min，加丙酮30 ml超聲30 min，加3 g氯化鈉，振搖，再加30 ml二氯甲烷，超聲30 min，靜置12 h，取30 min上清

6、液于100 ml濃縮瓶中，在50旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮近干，再加丙酮-環(huán)己烷（14）混合液5 ml，重復2次，用丙酮環(huán)己烷混合液定容至10 ml，4 000 r/min離心10 min待用。2.2 GPC凝膠凈化實驗2.2.1 GPC洗脫 規(guī)律 實驗取5 ml一定濃度的農(nóng)藥混合標準液進樣，用Waters 2996 PAD進行全波長掃描，以丙酮環(huán)己烷（14）混合液作流動相， 流量5 ml/ min，每毫升收集于一個試管中，收集30個，用氮吹近干，丙酮環(huán)己烷定容至1 ml得到待測液1。同樣在做成藥洗脫曲線時，用帶0.45 l尼龍微孔濾膜的10 ml的注射器取樣品提取液5 ml過GPC，其余同上，得到待測液2

7、。2.2.2 GPC凈化取“2.1”項的提取液5.0 ml進樣到GPC；保持流速為5 ml/ min，收集第1526 min餾分。濃縮淋洗液,用丙酮環(huán)己烷定容至5 ml待測，得到待測液3。2.3 GC分析條件Agilent 6890N 氣相色譜儀，配備捕獲檢測器（-ECD），ov-1701彈性石英毛細管色譜柱30 m×0.32 mmID×0.32 m；進樣口280，柱溫220，檢測器370，載氣為高純N2（純度99.99%），柱前壓105 KPa，柱流量1.5 ml/min，進樣量1 l，不分流進樣。  3 結(jié)果 3.1 凈化條件的確定餾分收集時間點的確

8、定要充分考慮被滲透排除的機體組分與混合標準組分的分離情況和回收率。成藥樣品和農(nóng)藥混合標準經(jīng)GPC凈化后GC-ECD檢測結(jié)果表明，收集第1526 min的餾分，成藥（仙靈骨葆膠囊，貴州同濟堂制藥有限責任公司生產(chǎn)）樣品凈化率可達70%，加標回收率為85%115%，回收率滿足痕量分析的要求，成藥樣品色譜圖見圖1。3.506 min為- BHC，3.77 min為PCNB，5.94 min為- BHC圖1 成藥樣品GC-ECD色譜圖3.2 成藥及9種有機氯農(nóng)藥的GPC流出 規(guī)律 GPC是根據(jù)多孔凝膠對不同大小分子的排阻效應(yīng)進行分離，大分子的油脂、色素(葉綠素、葉黃素)、生物堿、聚合物等先淋洗出來，農(nóng)藥

9、及 工業(yè) 污染物等分子量較小，后淋洗出。GPC凝膠柱對成藥以及9種有機氯農(nóng)藥的分離、凈化效果進行如下試驗。將待測液1分別用Agilent 6890N 氣相色譜儀， 電子 捕獲檢測器（-ECD）檢測出各段流出農(nóng)藥的含量，結(jié)果見圖2。9種有機氯農(nóng)藥在凝膠滲透色譜柱上都是在第1526 min時流出，但在第15 min僅有- BHC和第26 min有PCNB流出少量，所以，在樣品基質(zhì)較復雜的體系中，只需收集1625 min，這可最大限度去除油脂等雜質(zhì)的干擾，回收率達到85%115%。將待測液2分別用Agilent 6890N 氣相色譜儀，電子捕獲檢測器（-ECD）檢測出各段流出液雜質(zhì)的含量，結(jié)果見圖3

10、。成藥流出液雜質(zhì)（油脂、色素、生物堿等）在凝膠滲透色譜柱上是在第1035 min流出，其中1015 min時流出 50%的雜質(zhì)，第15分鐘收集的餾分在ECD上響應(yīng)值最高，第900分收集的餾分在ECD上有響應(yīng)。圖2 9種有機氯農(nóng)藥的GPC流出規(guī)律 圖3 仙靈骨葆膠囊的GPC流出規(guī)律3.3 標準工作曲線和方法學評價配制5個不同濃度的混合標準溶液，每個濃度重復3次，取峰面積平均值，得線性回歸方程，見表1。有機氯農(nóng)藥標準品色譜圖見圖4。從表1得出，在一定的濃度范圍內(nèi)，9種有機氯農(nóng)藥的線性關(guān)系良好，線性關(guān)系系數(shù)r（0.998 90.999 7）。加標樣品按3倍基線-噪聲比 計算 9種有機氯農(nóng)藥的檢出限。

11、3.4 回收率及精密度實驗在2.5 g成藥樣品中加入3種不同濃度（添加水平見表2）有機氯混合標準液，按上述方法進行，同時做空白對照，回收率及相對標準偏差結(jié)果見表2，成藥加標GC-ECD色譜圖見圖5。 表2 回收率與精密度測定結(jié)果3.5 樣品測定按照本文建立的方法，測定了貴州省出口潛力較大的3種中成藥，農(nóng)藥殘留測定結(jié)果見表3。結(jié)果表明，貴州中藥有機氯農(nóng)藥的殘留自實行中藥藥材規(guī)范化種植以來，中藥中有機氯農(nóng)藥污染已得到了控制。表3 3種成藥中有機氯農(nóng)藥的殘留量mg·kg-1 H1-仙靈骨葆膠囊（批號：060428），貴州同濟堂制藥有限責任公司生產(chǎn)；H2-抗婦炎膠囊，貴州遠程制藥有限責任有限

12、公司生產(chǎn)（批號：Z20025698）；H3-婦科再造丸（批號：Z20025056），貴州德昌祥藥業(yè)有限公司生產(chǎn)?！?”表示未檢出4 討論 本文以貴州出口中成藥仙靈骨葆膠囊為樣品，系統(tǒng)地研究了其提取液和有機氯農(nóng)藥的GPC流出規(guī)律，建立了仙靈骨葆膠囊中有機氯農(nóng)藥殘留的測定方法，并成功地運用于其他中藥的測定。建立的GPC凈化，氣相色譜測定中成藥中有機氯農(nóng)藥殘留量的方法具有自動化程度高，回收率和凈化效率好等優(yōu)點，適合于大部分中成藥中9種有機氯農(nóng)藥的測定。但對于含糖組分較高的中成藥，如糖漿類成藥，本文建立的樣品提取方法不適用，有待進一步研究?！?參考  文獻 】 1 劉詠梅，王志華，儲曉剛. 凝膠滲透色譜技術(shù)在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用J.分析測試學報, 2005, 24(2)：123.2 劉詠梅, 王志華, 儲曉剛. 凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜分離同時測定糙米中50種有機磷農(nóng)藥殘留J.分析化學，2005，33(6)：808.3 李 櫻，儲曉剛，仲維科，等.凝膠滲透色譜氣相色譜同時測定糙米中擬除蟲菊酯有機氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯的殘留量J.色譜，2004，22（5）：551.4 曾凡剛.凝膠滲透色譜凈化：氣相色譜法測定牛奶中10種有機氯農(nóng)藥殘留J. 中國 乳品工業(yè)，2006，34（5）：52.5 高夢南，王燕萍，唐紅衛(wèi)，等.凝膠滲透色譜凈化