大鼠免疫球蛋白GIgG酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠免疫球蛋白 G（ IgG ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書96T本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：12g/ml -400 g/ml使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G（ IgG ）含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠免疫球蛋白G（ IgG）水平。用純化的大鼠免疫球蛋白 G（ IgG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入免疫 球蛋白 G（IgG），再與 HRP 標記的免疫球蛋白 G（IgG ）抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原 -酶標抗 體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在 酸的

2、作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G（IgG ）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（ OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠免疫球蛋白 G （IgG ）濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20ml× 1瓶7終止液6ml × 1 瓶2酶標試劑6ml × 1 瓶8標準品（ 800g/ml ）0.5ml ×1 瓶3酶標包被板12孔× 8條9標準品稀釋液1.5ml ×1 瓶4樣品稀釋液6ml × 1 瓶10說明書1份5顯色劑 A 液6ml × 1 瓶11封板膜2張6顯色劑 B 液6ml&

3、#215;1/瓶12密封袋1個標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20保存，但應避免反復凍融2不能檢測含 NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。 操作步驟1.標準品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標準品一支， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。400g/ml5 號標準品150l的原倍標準品加入 150l 標準品稀釋液200g/ml4 號標準品150l的 5 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液100g/ml3 號標準品150l的 4 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液50g/ml2

4、號標準品150l的 3 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液25g/ml1 號標準品150l的 2 號標準品加入 150 l 標準品稀釋液2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l ，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l ，然后再加待測樣品 10l（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置 37溫育 30 分鐘。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置3

5、0 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 l，再加入顯色劑 B50 l，輕輕震蕩混勻， 37避光顯色 15 分鐘 .10. 終止：每孔加終止液 50 l，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。11. 測定：以空白空調(diào)零， 450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。 測定應在加終止液 后 15 分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算以標準物的濃度為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準

6、物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。注意事項1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3. 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計算時 請最后乘以總稀釋倍數(shù)（× n× 5）。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物請避光保存。7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀