實(shí)驗(yàn)室常用溶液配制

1、實(shí)驗(yàn)室常用溶液的配置Amp+/Kan+:貯存液濃度為50mg/mL稱取500mg于10mL超純水中溶解，抽濾后1mL分裝到離心管中，于-30C凍存X-gal：貯存濃度為20mg/mL稱取20mgX-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30中用錫箔紙包裹后避光保存，不需要過濾除菌IPTG：貯存濃度為L稱取2gIPTG溶于8mL超純水中，用水定容到10mL，用的一次性濾過器過濾除菌，1mL分裝到離心管中并于-30保存CaCl2：貯存濃度為1mol/L稱取CaCl（或者CaCl:2H2O）溶于8mL超純水中，定容到10mL,用0,22um的一次性濾過器過濾除菌，1mL分裝到離心管中，并于-30保存LB

2、培養(yǎng)基：胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L酵母提取物（YeastExtraction）5g/L氯化鈉10/L根據(jù)經(jīng)驗(yàn)用NaOH調(diào)節(jié)PH為，然后高壓蒸汽滅菌，注意及時(shí)從滅菌鍋中取出無DNA酶的RNA酶：將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/LTris-Cl（）、15mmol/LNaCl中,配成10mg/mL的濃度，于100加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20Bradford貯存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG250室溫下可儲(chǔ)存，一般4Bradford工作液Bradford貯存液30mL雙蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL儲(chǔ)存于4超聲破碎緩沖液

3、KCl300mMKH2PO450mMgEDTA1mMg(EDTA-2Na-2H2O)g定容至1L，調(diào)pH至包涵體洗滌液KCl300mMgKH2PO450mMgEDTA5mMg(EDTA-2Na-2H2O)g尿素2M120gTritonX-100%5ml脫氧膽酸鈉鹽%1g定容到1L調(diào)pH至勻漿緩沖液（pH=）成分：20mMHEPES=加入MgCl2=加入EDTA=加入NaCl=0.58g加入釩酸鈉=加入加100mL水進(jìn)行溶解，NaOH調(diào)pH至DTT總體積500仙L加入仙LPMSF總體積500仙L力口入20L1%SDS加入50L10%SDS其中DTT和PMSF勻漿之前加入，SDS勻漿之后離心之前加

4、入DTT配成1M母液，溶于乙酸鈉（pH=）中，過濾除菌PMSF配成10mM母液，溶于異丙醇10*PBSNaClgKClgNa2HPO4gKH2PO4g水定容至1L,使用時(shí)稀釋10倍，用NaOH調(diào)pH至Startwith800mLofdistilledwatertodissolveallsalts.AdjustthepHtowithHCl.Adddistilledwatertoatotalvolumeof1liter.Theresultant1xPBSshouldhaveafinalconcentrationof10mMPO43?,137mMNaCl,andmMKClIfusedincellcu

5、lturing,thesolutioncanbedispensedintoaliquotsandsterilizedbyautoclaving(20min,121°C,liquidcycle).Sterilizationmaynotbenecessarydependingonitsuse.PBScanbestoredatroomtemperatureorinthefridge.However,concentratedstocksolutionsmayprecipitatewhencooledandshouldbekeptatroomtemperatureuntilprecipitat

6、ehascompletelydissolvedbeforeuse.轉(zhuǎn)膜緩沖液（含有SDS）1L劑量甘氨酸TrisSDS甲醇200mL水800mL10>S白電泳緩沖液1L劑量Tris堿（Mr甘氨酸（Mr188gSDS（Mr10g加水至1L用時(shí)稀釋10倍即可30丙稀酰胺1L劑量丙烯酰胺290gN,N-亞甲基雙丙稀酰胺10g溶于600ml蒸儲(chǔ)水中，加熱至37c溶解，補(bǔ)足體積至1L,過濾，且pH不大于1MTris-Cl（）gTris堿溶解于400ml蒸餾水，溶解后調(diào)pH值，總體積為500mlMTris-Cl（）Tris堿溶解于400ml蒸餾水，溶解后調(diào)pH值，總體積為500ml。加約濃鹽酸，再調(diào)

7、整到500ml體積1MDTT用20mLL乙酸鈉溶液（pH=）溶解DTT，過濾除菌后分裝考馬斯亮藍(lán)R-250染液在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解考馬斯亮藍(lán)R-250,過濾后室溫保存蛋白酶K（20mg/mL）滅菌的50mMTris（pH），mM乙酸鈣溶解，配置成濃度為20mg/mL的溶液，-20保存流式緩沖液PBS+5%FBS+%sodiumazideWater45mL20%疊氮鈉50叱L10*PBS5mLFBSmL文獻(xiàn)常見配方：PBS+%BSA(5-10%FBS)+%sodiumazide酸酐稱取50g重銘酸鉀（KCrO4）溶于80mL雙蒸水中，90c中?§解2

8、h,每半小時(shí)攪拌促進(jìn)溶解，溶解完成后，加入1000mL硫酸，分裝于2個(gè)瓶子中。注意使用過程中，如果其中一瓶的效果不好，不要混合使用。使用5次，就要重配。滴管酸酊中浸泡24h,自來水沖洗至無明顯可見顏色，自來水正反面各20遍，雙蒸水正反面各20遍，復(fù)印紙中包裹，烘干，加棉花塞和膠頭，單獨(dú)包裝，滅菌，烘干。雙抗（青霉素和鏈霉素）g鏈霉素和80WU青霉素，一起溶于8mlPBS,單位分別為10A5ug/ml和10A5U/ml,然后稀釋10倍，分別為10A4ug/ml和10A4U/ml,使用時(shí)，按照1%加入，分別為100ug/ml與100U/ml培養(yǎng)基I2%FCS，1%雙抗，128uL/40mL肝素鈉，

9、RPMI1640成關(guān)主tII培養(yǎng)基II%FCS，1%雙抗，128uL/40mL肝素鈉，RPMI1640完全培養(yǎng)基10%FCS（5%FCS+5%魚血清），1%雙抗LPS稱取2mgLPS溶于1mLPBS中，濾膜過濾，硅化離心管，-20C保存1*Turk染液GentianVioler（結(jié)晶紫）50mgAceticAcid（冰乙酸）5mLWater495mL1%巴比妥鈉1g巴比妥鈉溶于100mL的PBS中，充分混勻，避光保存（80ug/g用量）誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞所需溶液硫代硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基（Thioglycollatebroth）：稱取3g,加入到100ml純水中，高溫121c滅菌15min,然后冷

10、卻到室溫,再重復(fù)2次，進(jìn)行老化操作。此時(shí)已經(jīng)溶解，呈現(xiàn)透明溶液。沖洗液：RPMI1640+1%雙抗培養(yǎng)基：RPMI1640+10%FBS+1%雙抗氯化錢紅細(xì)胞裂解液(10X的儲(chǔ)存液)參考流式中文網(wǎng)gNH4ClM)gNaHCO3(100mM)gEDTA二鈉(10mM)加水至900ml,然后用1M的HCl或1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值至。最后加水至1升。該10*的儲(chǔ)存液可在4保存6個(gè)月。工作液的配制：在使用前蒸餾水稀釋10倍即可。(1份儲(chǔ)存液加上9份水)。工作液用來裂解紅細(xì)胞。不能以<10*的濃度儲(chǔ)存，否則會(huì)形成碳酸銨而失效。ACK裂解液參考文獻(xiàn)Dynamicvariationincycling

11、ofhematopoieticstemcellsinsteadystateandinflammation,JEM,2011ACK(Ammonium-Chloride-Potassium)LysingBufferAmmoniumChloride150mMMwPotassiumBicarbonate10mMMwEDTAmMMwACKLysisBuffer(1L)ComponentAmountFinalConcentrationNH4ClgKHCO3g10mMEDTA200uladdddH2Oto800ml,adjustpHto-,finalizevolumeto1LwithddH20RedBloo

12、dCellLysisUsingACKLysingBuffer1) CollectwholebloodbyvenipunctureinEDTA-treatedcollectiontubes.2) Pipette1mLEDTA-treatedwholebloodintoatubecontaining10-20mLofACKLysingBufferatroomtemperature.3) AllowthebloodsampleplusACKLysingBuffertoincubateatroomtemperaturefor3-5minutes.Lysisoftheredcellsshouldbeev

13、identduringthisincubation.4) Collectthewhitebloodcellsbycentrifugationat300xgfor5minutesatroomtemperature.5) Aspiratethesupernatant,leavingapproximately50uLtoavoiddisturbingthepellet.6) Gentlymixthecellsandtheremainingfluid,thenadd5mLcoldphosphatebufferedsaline.7) Mixthecellsandphosphatebufferedsaline,andthencollectthece