九牛造根中苯丙素類成分的分離及鑒定

1、九牛造根中苯丙素類成分的分離及鑒定                      作者：郭增軍，佐建峰，卜筱茜，譚林，徐穎 【摘要】  目的 研究九牛造根中的苯丙素類化學成分。方法 采用硅膠柱層析和葡聚糖凝膠柱層析分離純化技術，通過理化性質(zhì)和波譜特征分離并鑒定化合物。結果 分離并鑒定了3個苯丙素類化合物：3-甲氧基-4-羥基反式苯丙烯酸正十六醇酯()，短葉蘇木酚酸乙酯()，3(S)

2、-當歸酰氧基-4(S)-千里光酰氧基凱林內(nèi)酯()。結論 以上化合物均為首次從該植物中得到，其中化合物為首次從大戟科中分離得到。 【關鍵詞】  九牛造 苯丙素 化學成分ABSTRACT: Objective  To study the phenylpropanoid constituents from the roots of Euphorbia hylonoma Hand-Mazz. Methods  The chemical constituents were isolated and purified by silica gel and Sephadex LH

3、-20 column chromatography, and the structures were elucidated on the basis of chemical properties and spectral data. Results  Three phenylpropanoid constituents were isolated from the acetone extracts of the roots of Euphorbia hylonoma Hand-Mazz, which were hexadecyl-3-methoxy-4-hydroxybenzenea

4、crylate , ethyl brevifolincarboxylate and (+) 3-angeloyl-4-isovalerylcis-khellactone peuformosin . Conclusion  The above compounds were isolated from Euphorbia hylonoma Hand-Mazz for the first time, and the compound was the first obtained from the Euphorbiaceae.KEY WORDS: Euphorbia hylonoma Han

5、d-Mazz; phenylpropanoid; chemical constituent九牛造原植物為大戟科植物湖北大戟(Euphorbia hylonorma Hand-Mazz)，又名翻天印，震天雷，作為民間草藥，首載于陜西中草藥。九牛造為多年生草本，主要以根入藥，具有消積破癖、止痛、通便利水等功效，用于治療肝硬化腹水、消化不良、跌打損傷、疾血作痛、二便不通、積聚腹脹、無名腫毒等。實驗證明九牛造根具有一定的生物致死活性，其氯仿提取物對7721肝癌細胞具明顯的抑制作用1。九牛造在我國主要分布于陜西、湖南、湖北、四川、貴州等省。陜西主產(chǎn)于秦嶺南坡、漢中及安康地區(qū)各縣，秦嶺北坡及太白山也有分布

6、，資源豐富2。前期化學成分研究表明,九牛造根中含有萜類、甾體和鞣質(zhì)等類成分3-6。本研究報道從九牛造根丙酮提取物中分離得到的3個苯丙素類化合物，分別鑒定為3-甲氧基-4-羥基反式苯丙烯酸正十六醇酯(hexadecyl-3-methoxy-4-hydroxybenzeneacrylate )、短葉蘇木酚酸乙酯(ethyl brevifolincarboxylate )、3(S)-當歸酰氧基-4(S)-千里光酰氧基凱林內(nèi)酯(+)3-angeloyl-4-isovalerylcis-khellactone，peuformosin )。1  材料與方法1.1  儀器、試劑及藥材熔點

7、測定用MP-J3型顯微熔點測定儀，溫度計未校正。NMR譜用ARX-300、ARX-500型核磁共振儀測定。紅外光譜用FTIR-8400S型(日本島津)紅外光譜測定儀測定，溴化鉀壓片；ESI-MS用Agilent 1100 Series LC-MSD Trap質(zhì)譜儀測定；薄層硅膠G60、GF254和柱層硅膠(100-200目)為青島海洋化工廠產(chǎn)品；Sephadex LH-20為上海化學試劑采購供應站試劑廠產(chǎn)品，試劑均為分析純。    九牛造藥材采自陜西太白山，經(jīng)西北農(nóng)林科技大學植物標本館吳振海教授鑒定為大戟科植物湖北大戟(Euphorbia hylonorma Ha

8、nd-Mazz)。1.2  提取與分離 九牛造根1.5 kg，粉碎，丙酮浸提兩次，每次24 h，提取液合并，回收試劑，得到丙酮提取物300 g，取100 g經(jīng)反復常壓硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(1001-1100)洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱層析，得到化合物-。     2  結 果2.1  化合物的結構鑒定 白色針狀結晶，mp62-64 ，F(xiàn)eCl3反應陽性。ESI-MS顯示其分子離子峰M+為m/z 418.95，結合1HNMR和13CNMR波譜數(shù)據(jù)得知該化合物的分子式為C26H42O4。

9、1HNMR(CDCl3)ppm 6.89(1H, d，J=8.05 Hz)、7.05(1H,dd, J=8.05 Hz)和7.01(1H,s)為3個芳香質(zhì)子信號，提示含有苯環(huán)，且為1，2，4-三取代苯的形式。ppm 6.27(1H，d，J=15.9 Hz)和7.59(1H，d，J=15.9 Hz)說明苯環(huán)連有一個反式雙鍵,ppm 3.91(3H，s)提示苯環(huán)連有甲氧基，ppm 5.81(1H，s)示為Ph-OH，ppm 4.16(2H，t，J=6.5 Hz)為-O-CH2信號，ppm 1.67(2H，t，J=6.8 Hz)為2-CH2信號，ppm 1.23處出現(xiàn)多個CH2信號，ppm 0.86

10、(3H，t，J=6.5 Hz)出現(xiàn)一個甲基信號，提示可能為取代苯丙烯酸的直鏈飽和脂肪酸酯。13CNMR(CDCl3)及DEPT譜中167.3的季碳顯示該化合物中的羰基為酯羰基，147.9、146.7兩個季碳為苯環(huán)連氧碳信號，127.1季碳為苯環(huán)連烯碳信號，144.5、122.9、115.6、114.6、109.2五個叔碳為苯環(huán)未取代的三個碳信號及兩個反式雙鍵碳信號，64.6仲碳示為連氧亞甲基碳信號，55.9伯碳為甲氧基碳信號，31.9、28.8、25.9、22.7及29.4仲碳強信號提示化合物具有多個亞甲基，14.1為甲基碳信號。H-HCOSY、HMQC及HMBC譜顯示酯羰基與反式雙鍵相連，反

11、式雙鍵與苯環(huán)相連，羥基位于反式雙鍵的對位，甲氧基位于羥基鄰位。綜上分析，化合物為取代苯丙烯酸的直鏈飽和脂肪酸酯。根據(jù)I的分子式，可知組成酯的醇有16個碳，化學結構確定為3-甲氧基-4-羥基反式苯丙烯酸正十六醇酯。該化合物為首次從該植物中得到。2.2  化合物的結構鑒定 黃色針晶(甲醇)，mp>300 ，F(xiàn)eCl3反應陽性。IR(KBr)cm-1：3 455、3 227(-OH)、1 736(C=O)、1 697(C=O)、1 663(C=O)、1 600、1 581、1 389(芳環(huán))。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：10.90(1H，s)、10.11(

12、2H，s)為酚羥基質(zhì)子信號，7.30(1H，s)為芳環(huán)質(zhì)子信號，提示苯環(huán)為5取代，4.08(2H，q，J=7.2 Hz)、1.17(3H，t，J=7.2 Hz)提示為-O-CH2-CH3質(zhì)子信號。13C NMR(DMSO-d6，75 MHz)：192.61為酮羰基碳，171.59、159.69為酯羰基碳信號，且有一內(nèi)酯結構；149.15、145.32、143.20、139.74、138.08、114.46、112.52、107.55為烯碳信號，提示苯環(huán)與雙建共軛存在；60.14為連氧碳信號，40.24、36.56、13.44為脂肪碳信號。DEPT 譜顯示107.55、40.24為叔碳，60.1

13、4、36.56為仲碳，13.44為伯碳甲基信號，其余碳均為季碳。H-HCOSY譜圖提示2.98質(zhì)子與4.40及2.47質(zhì)子相關，4.08質(zhì)子與1.17質(zhì)子相關。綜合以上分析，化合物確定為短葉蘇木酚酸乙酯(ethyl brevifolin carboxylate)。該化合物為首次從該植物中分離得到，其 1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻基本一致7。1HNMR：10.90(1H，s，8-OH)、10.11(2H，s，9-OH，7-OH)、7.30(1H，s，H-8)、4.40(1H，d，J=7.2 Hz，H-3)、4.08(2H，q，J=7.2 Hz，-O-CH2-CH3)、2.98(1H，d

14、d，J=7.2，8.0 Hz，H-2)、2.47(1H，dd，J=19.2，8.0 Hz，H-2)、1.17(3H，t，J=7.2 Hz，-O-CH2-CH3)。13CNMR ：192.61(C-1)、171.59(C-4)、159.69(C-1)、149.15(C-7)、145.32(C-3)、143.20(C-5)、139.74(C-6)、138.08(C-4)、114.46(C-10)、112.52(C-9)、107.55(C-8)、60.14(-O-CH2-CH3)、40.24(C-3)、36.56(C-2)、13.44(-O-CH2-CH3)。2.3  化合物的結構鑒定&#

15、160;黃色粉末狀結晶，mp 137-139 。紫外燈下呈藍紫色熒光，異羥肟酸鐵反應呈陽性。UV max(甲醇)：322.50、220.50處有最大吸收，顯示-吡酮環(huán)和有氧取代苯環(huán)。以上表明化合物可能是香豆素類化合物。IRKBrmaxcm-1：1 730.03提示有羰基，2 935.46、2 923.88、1 488.94、1 608.52、1 456.16提示有苯環(huán)，1 647.10、840.69提示側鏈的取代基部分中有亞異丙烯基，而無異丙基存在。ESI-MS譜在m/z 449處給出M+Na+離子峰，表明化合物的分子量為426。結合1H-NMR，13C-NMR及DEPT譜等推斷其分子式為C2

16、4H26O7。1HNMR(DMSO-d6，500MHz)：6.28(1H，d，J=9.5)和7.98(1H，d，J=9.5)以及6.88(1H，d，J=8.5)和7.64(1H，d，J=8.5)處的兩對雙重峰，為香豆素類化合物的典型特征，它們分別為C-3和C-4以及芳環(huán)上兩個鄰位C-5和C-6的質(zhì)子的信號，這些信號的化學位移值和偶合常數(shù)提示此化合物為二氫吡喃香豆素。 6.47(1H，d，J=5)、5.30(1H，d，J=5)信號提示吡喃環(huán)上有兩個相鄰的次甲基質(zhì)子信號。6.16(1H，m，J=1，7)和1.78(3H，d，J=1)、1.88(3H，d，J=7)是雙鍵質(zhì)子和烯碳上兩個甲基質(zhì)子的信號

17、，說明含有一個當歸酰氧基。5.62(1H，q，J=1)，2.07(3H，d，J=1)，1.85(3H，d，J=1)為千里光酰氧基質(zhì)子信號。1.40(3H ，s)、1.37(3H ，s)為吡喃環(huán)中C-2上的兩個偕二甲基質(zhì)子信號。 13CNMR(DMSO-d6)：給出了24個碳原子，165.91、164.80、159.67為三個季碳，其中159.67為香豆素內(nèi)酯環(huán)的羰基信號，165.91、164.80為酯羰基碳原子信號，100-160范圍內(nèi)有多個芳香碳原子信號及烯碳原子信號，提示該化合物含有苯環(huán)。77.49、70.24、59.59為連氧脂肪碳信號，15.73、20.20、20.27、22.42、2

18、5.35、27.15為六個甲基信號。DEPT譜提示化合物含有6個甲基，8個次甲基，10個季碳。HMQC譜提示15.73甲基與1.88的氫信號相關，20.20甲基與1.78的氫信號相關，139.40次甲基與6.16的氫信號相關，此為當歸酰氧基；20.27甲基與2.07的氫信號相關，27.15甲基與1.85的氫信號相關，115.13次甲基與5.62的氫信號相關，為千里光酰氧基；114.36次甲基與6.88的氫信號相關，130.43次甲基與7.64的氫信號相關，分別為苯環(huán)上C-5和C-6；112.87次甲基與6.28的氫信號相關，144.74次甲基與7.98的氫信號相關，分別為C-3和C-4。22.

19、42和25.35甲基與1.40、1.37的氫信號相關，為C-2位上的偕二甲基；70.24次甲基與5.30的氫信號相關，59.59次甲基與6.47的氫信號相關，為吡喃環(huán)上的C-3和C-4。HMBC譜提示6.28(1H，d，J=9.5)處的次甲基質(zhì)子信號與159.67的季碳遠程相關；7.98(1H，d，J=9.5)處的次甲基質(zhì)子信號與107.12、112.76、153.72、159.67處的季碳以及130.43處的次甲基碳遠程相關；7.64(1H，d，J=8.5)處的次甲基質(zhì)子信號與107.12、112.76、153.72、156.33處的季碳以及144.74處的次甲基碳遠程相關；6.88(1H，

20、d，J=8.5)處的次甲基質(zhì)子信號與107.12、 156.33處的季碳以及112.87、59.59處的次甲基碳遠程相關；5.30(1H，d，J=5) 處的次甲基質(zhì)子信號與22.42、25.35處的甲基質(zhì)子，77.49、165.91處的季碳以及59.59處的次甲基碳遠程相關，說明當歸酰氧基連接在吡喃環(huán)的3位；6.47(1H，d，J=5)處的次甲基質(zhì)子信號與77.49、112.76、164.80、153.72、156.33、107.12處的季碳以及70.24處的次甲基碳遠程相關，說明千里光酰氧基連接在吡喃環(huán)的4位；6.16(1H，m，J=1，7)處的次甲基質(zhì)子信號與165.91處的季碳以及15.73，20.27處的甲基碳遠程相關；5.62(1H，q，J=1)處的次甲基質(zhì)子信號與164.80處的季碳以及27.15，20.20處的甲基碳遠程相關。1H-1H COSY譜提示6.28(1H，d，J=9.5)處的次甲基質(zhì)子與7.98(1H，d，J=9.5)處的次甲基質(zhì)子互為相關，7.64(1H，d，J=8.5)處的次甲基質(zhì)子與6.88(1H，d，J=8.5)處的次甲基質(zhì)子互為相關。它們分別為C3和C4以及芳環(huán)上兩個鄰位C5和C6的質(zhì)子的信號；5.30(1H，d，J=5) 處的次甲基質(zhì)子與6.47(1H，d，J=5)處