從菠菜中提取葉綠素實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告示范文本 | Excellent Model Text 資料編碼：CYKJ-FW-382編號(hào)：_從菠菜中提取葉綠素實(shí)驗(yàn)報(bào)告編輯：_日期：_單位：_從菠菜中提取葉綠素實(shí)驗(yàn)報(bào)告用戶指南：該報(bào)告資料適用于任務(wù)完成后進(jìn)行全面的總結(jié)，從中深入細(xì)致地回顧、檢查，找出成績與缺點(diǎn)、勝利與失敗、經(jīng)驗(yàn)與教訓(xùn)，并在此基礎(chǔ)上對前段工作作出客觀評價(jià)，使得所有人員對問題的認(rèn)識(shí)更一致，思想更統(tǒng)一?？赏ㄟ^修改使用，也可以直接沿用本模板進(jìn)行快速編輯。綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素（綠）、胡蘿卜素（橙）和葉黃素（黃）等多種天然色素。葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式即葉綠素a(C55H72O5N4Mg)和葉綠素b(C55H70O

2、6N4Mg)，差別僅是a中一個(gè)甲基被b中的甲酰基所取代。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進(jìn)行光合作用所必需的催化劑，也是食用的綠色色素，可用于糕點(diǎn)、飲料水等中，添加于膠姆糖中還可消除口臭。植物中a的含量通常是b的3倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團(tuán)，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于石油醚等一些非極性溶劑。胡蘿卜素（C40H56）是具有長鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，,和胡蘿卜素，其中異構(gòu)體含量最多，也最重要。生長期較長的綠色植物中，異構(gòu)體中的含量多達(dá)90。具有維生素A的生理活性，其結(jié)構(gòu)是兩分子維生素A在鏈端失去兩分子水結(jié)合而成。生物體內(nèi)，體受酶催化氧化即形成維生素A。目前，體可作為維生

3、素A使用，也可作為食品工業(yè)的色素，一胡蘿卜素還有防癌功能。葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。在綠葉中通常是胡蘿卜素的兩倍。較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。 由此可見，葉綠素等天然色素有廣泛的用途，對于色素的提取與分離就顯得很重要了本實(shí)驗(yàn)就提取和分離做了相關(guān)的研究。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器與試劑儀器：研缽、分液漏斗、顯微載玻片、毛細(xì)管、層析柱(20×10 cm)、UV-240紫外分光光度計(jì)試劑：石油醚、乙醇(95%)、菠菜葉、丙酮(化學(xué)純)、乙酸乙酯(化學(xué)純)、無水硫酸鈉、硅膠G、中性氧化鋁(150目160目)1.2 提取與分離1.2.

4、1 浸泡法提取色素在研缽中放入20 g新鮮的菠菜葉，加入20 mL3：2(體積比)石油醚乙醇混合液，適當(dāng)研磨(不要研成糊狀，否則會(huì)給分離造成困難)，用傾析法將提取液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，每次用10ml水洗滌兩次,以除去萃取液中的乙醇。洗滌時(shí)要輕輕旋蕩，以防乳化。棄去水乙醇層，石油醚層用無水硫酸鈉干燥，干燥后濾入小圓底燒瓶，在水浴上蒸發(fā)濃縮至大約l m L。1.2.2 薄層層析取四塊顯微載玻片，硅膠G經(jīng)0.5羧甲基纖維素鈉調(diào)制后制板，在室溫下晾干后在110°C活化1h。選取效果最好的一塊進(jìn)行點(diǎn)樣。展開劑：（1）石油醚丙酮=8:2（體積比）（2）石油醚乙酸乙酯=6:4（體積比）取活化后的層析

5、板，點(diǎn)樣，放入預(yù)先選定展開劑的廣口瓶。瓶的內(nèi)壁貼一張高5cm，繞周長45的濾紙，下部浸入展開劑中，蓋上瓶蓋。待展開劑上升至規(guī)定高度時(shí)，取出層析板，晾干，做出標(biāo)記。分別用兩種展開劑展開，比較不同展開劑的展開效果。觀察斑點(diǎn)在板上的位置并排列出胡蘿卜素、葉綠素和葉黃素的Rf值的大小。注意更換展開劑時(shí)，需干燥層析瓶，不允許前一種展開劑帶入后一系統(tǒng)。1.2.3 柱層析取少量脫脂棉在小燒杯中用石油醚浸潤后，擠壓除去氣泡，放在層析柱底部。在層析柱中加15cm石油醚。加入中性氧化鋁8克，打開柱下活塞，保持石油醚高度不變，氧化鋁在柱子中堆積。裝完后，打開下端活塞，放出溶劑，直到氧化鋁表面剩下12mm高為止（不能

6、使氧化鋁表面露出液面）。將濃縮液用滴管加到柱頂部，打開下端活塞，讓液面下降到柱面以下1mm,關(guān)閉活塞，加數(shù)滴石油醚，打開活塞，使液面下降，幾次反復(fù)，使色素全部進(jìn)入柱體。在柱頂加1.5cm洗脫劑9：1（體積比）石油醚丙酮。打開活塞，用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)有色成分即將滴出時(shí)，取另一錐形瓶收集，得橙黃色溶液，即胡蘿卜素。2.結(jié)果與討論2.1提取由于甲醇與乙醇的極性相近，但是乙醇易得、無毒，所以用3：2的石油醚一乙醇通過浸泡的方法提取菠菜色素，而不是用石油醚甲醇。2.2分離薄層層析薄層層析又叫薄層色譜，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V

7、和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，可以用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離。實(shí)驗(yàn)中涉及的菠菜色素的比移值(Rf)（薄層色譜法中原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離的比值）列表如下：在一定的色譜條件下，特定化合物的Rf值是一個(gè)常數(shù)，因此有可能根據(jù)化合物的Rf值鑒定化合物。菠菜色素中各種色素的比移值Rf大小為：胡蘿b素> 葉黃素>葉綠素，按此順序它們的非極性依次減弱。物質(zhì)極性的判斷為柱層析中洗脫劑的選擇提供了參考價(jià)值。柱層析胡蘿卜素極性最小，因此胡蘿卜素的洗脫劑用極性較小的9：l的石油醚-丙酮溶劑效果較好。但要收集其他幾種色素得換用其他的洗脫劑，因?yàn)樯氐臉O性各不相同，且有一定差別。如用7：3石油醚-丙酮分離葉黃素分離出胡蘿卜素和葉黃素后，可加大溶劑極性以較快速度洗脫葉綠素用3：1：1的丁醇-乙醇-水洗脫劑洗脫葉綠素。3.結(jié)論采用浸泡法提取色素比抽濾法更好。在薄層