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文檔簡介

1、 引物查詢方法 一共有兩種查詢引物的方法，包括primerbank和primer3，當(dāng)我們查到引物時，我們需要用Pubmed來驗證。詳細(xì)說明見下文。1. Primerbank 用引物銀行查詢引物時，我們只需要輸入引物的名稱，種屬網(wǎng)址：1. 將search by 修改為keyword2. 將species修改為您所需要的種屬，如mouse3. 輸入您所需查的基因的名字，如atg5 4. 點擊submit點擊這里，您將看到引物在編碼序列中的位置您將得到所需查的基因的引物的結(jié)果點擊這里綠色的部分，您可以看到這個引物的Qpcr的結(jié)果2.primer 3 使用這個工具之前您需要在Pubmed中查到您的目

2、的基因的序列，然后黏貼到primer3中，軟件便會自動設(shè)計引物。Pumed的使用方法如下：網(wǎng)址：輸入您的目的基因，如atg7修改為nucleotide最后單擊search點擊這里選種屬點擊fasta選項篩選符合您需求的，我們是自噬相關(guān)的atg7，因此選這個這就是您所要的序列，復(fù)制Primer3打開primer3的網(wǎng)址網(wǎng)址：黏貼如在pubmed中查到的基因序列修改為None選中pick left和pick right點擊這個選項修改為您所需產(chǎn)物的大小范圍這個是軟件默認(rèn)的最好的引物，下面還有其他引物這就是結(jié)果的頁面下拉頁面，您將看到軟件對您的基因鎖設(shè)計的全部引物完成引物的設(shè)計后，我們可以用pubmedblast來驗證引物Blast 網(wǎng)址：輸入網(wǎng)址會顯示以下頁面，按照以下步驟便可驗證.輸入網(wǎng)址后選擇網(wǎng)頁下面的這個地方，primer blast 修改種屬修改您所期望得到的擴增產(chǎn)物的大小，如qpcr 一般在200以內(nèi)輸入查得的上下游引物的序列最后點擊頁面最下的此選項點擊這個紫色的，這是引物的一個編號，您會看到詳細(xì)的介紹這個頁面有引物的位置等信息點擊這里您會看到一些文獻是使用

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