絲裂霉素C-右旋糖酐交聯(lián)物的親淋巴組織的實(shí)驗(yàn)研究

1、    絲裂霉素C-右旋糖酐交聯(lián)物的親淋巴組織的實(shí)驗(yàn)研究        摘要：目的本實(shí)驗(yàn)使用絲裂霉素C-右旋糖酐交聯(lián)物(MMC-D)，證實(shí)其可通過改變絲裂霉素C藥代動力學(xué)特性，使藥物宜于聚集在淋巴系統(tǒng)和局部用藥部位。方法將MMC-D注入到Wistar大鼠左大腿肌肉內(nèi)，與MMC作對照，分析其藥代動力學(xué)特性及淋巴組織趨向性。組織及血漿中的絲裂霉素濃度用生物檢測法測定。結(jié)果MMC-D肌注后，24 h后仍有33.5%以結(jié)合方式存在于注射部位，而MMC肌注后30 min內(nèi)消失。MMC-

2、D于引流的腹腔淋巴結(jié)中2 h濃度達(dá)185.2 g/g，24 h濃度仍為55.6 g/g。MMC于淋巴結(jié)內(nèi)5 min濃度達(dá)高峰23.1 g/g，30 min內(nèi)消失。MMC-D肌注后于大鼠血中測不到藥物濃度，提示MMC-D吸收后主要分布到血液以外的組織器官中，可減輕因MMC高血濃度而產(chǎn)生的嚴(yán)重副作用。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)顯示，MMC-D有淋巴組織分布多，釋放緩慢，維持作用時(shí)間長，可能消除淋巴組織中的微小轉(zhuǎn)移灶，為預(yù)防和治療惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移開辟一個新的途徑。關(guān)鍵詞：絲裂霉素C；右旋糖酐；藥代動力學(xué)中分類號：R73-361文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1000-7431(2000)05-0337-03ENHANCE

3、D LYMPHATIC DELIVERY AND SLOW RELEASED CHARACTER OF MITOMYCIN C-DEXTRAN CONJUGATEZHANG Rong-he, QI Chun-lian, ZHAN Li-fen.(Oncology Department, China Medical University, Shenyang 110001,China)Abstract：ObjectiveA high molecular weight derivative of mitomycin C(MMC), the mitomycin C-dextran conjugate

4、(MMC-D), was synthesized the first time in our country. The absorption characteristics and enhanced lymphatic delivery of MMC-D in compare with MMC following intramuscular injection were studied in rats.MethodsMMC in the tissue and blood was determined by bioassay. ResultsAbout 33.5% MMC-D was retai

5、ned at the injection site after 24 h of injection. The concentration of MMC-D reached the peak value of 185.2 g/g of iliac lymph node 2 h after intramuscular injection, and was 55.6 g/g at 24 h. The concentration of MMC reached the peak value of 23.2 g/g at 5 minutes and disappeared within 30 minute

6、s. MMC-D couldn't be detected in rat's blood, but was distributed to the tissues and organs except serum, so that the seriuos side effect was reduced. ConclusionThe results showed that MMC-D had enhanced lymphatic delivery, and was released slowly. The affective time of MMC-D was much longer

7、. MMC-D might eliminate the minute metastatic cancer focus in the lymphatic tissue. Thus, a new way was found to prevent and to cure lymphatic metastasis of malignant tumor.Key words：MMC;Dextran;Pharmacokinetics惡性腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后有很大的關(guān)系。如胃癌無淋巴轉(zhuǎn)移者根治術(shù)后的生存率是有淋巴轉(zhuǎn)移者的二倍。胃癌復(fù)發(fā)死亡病例中以淋巴組織復(fù)發(fā)為死因者占20%。預(yù)防和治療惡性腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移將

8、改善患者的預(yù)后和生存質(zhì)量。藥物在淋巴組織中的聚集是一種預(yù)防淋巴轉(zhuǎn)移及術(shù)后淋巴組織癌復(fù)發(fā)的可靠方法，并可通過檢測組織中的抗腫瘤藥物濃度來決定可能的抗腫瘤活性。將抗癌藥直接注入到淋巴管中的方法因技術(shù)上的困難，臨床應(yīng)用價(jià)值有限，常規(guī)的全身給藥方法因?yàn)楦哐獫舛犬a(chǎn)生嚴(yán)重副作用，也沒有很好解決淋巴轉(zhuǎn)移的問題。因此有必要開發(fā)一種通過改變藥代動力學(xué)特性使其聚集在淋巴系統(tǒng)的藥物1。作者采用大分子右旋糖酐作為載體，6-氨基己酸為連接劑，將絲裂霉素C交聯(lián)于右旋糖酐，使其共價(jià)結(jié)合，合成了絲裂霉素C-右旋糖酐(MMC-D)，已經(jīng)獲得國家發(fā)明專利。本實(shí)驗(yàn)通過檢測MMC濃度，證實(shí)MMC-D于淋巴組織中的分布有顯著的增加，且

9、較長期滯留于局部用藥部位2，3。材料與方法一、動物及分組大白鼠，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供，Wistar系，雄性，體重 248±20.6 g，按組間一致的原則將動物隨機(jī)分為MMC給藥組及MMC-D給藥組。用乙醚開放麻醉。二、實(shí)驗(yàn)操作用生理鹽水配制1 mg MMC/ml及相當(dāng)量的MMC-D 10 mg/ml溶液。按2 ml/kg鼠重，注入到大鼠左大腿肌肉內(nèi)。MMC組于注射后5 min、15 min、30 min取左側(cè)腹腔髂淋巴結(jié)，注射部位肌肉及心臟取血。血離心5000 r/min， 10 min。淋巴結(jié)及肌肉以Cps-I型超聲波粉碎機(jī)粉碎后離心8000 r/min 5 min，取上清

10、測濃度。MMC-D組于注射后5 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h同上取樣送檢。離心前加熱90 5 min，使MMC-D裂解為MMC。三、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備將融化好的肉湯瓊脂培養(yǎng)基10 ml鋪底層，凝固后再加5 ml、45 混菌的肉湯瓊脂培養(yǎng)基(沈陽藥學(xué)院提供的大腸桿菌1093)，冷凝待用。把MMC制備成5、10、15、20、25、30、35、40 g/ml溶液，管碟法加入100 l，分別培養(yǎng)12 h，測抑菌圈大小，以濃度對抑菌圈直徑作，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測樣品抑菌圈直徑，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查樣品濃度。樣品濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍者稀釋后測定，再換算成實(shí)際濃度，繪制樣品藥物濃度-時(shí)間變化

11、曲線，得出并比較藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果1.MMC-D于淋巴結(jié)及肌肉中藥物濃度隨時(shí)間變化曲線(見1)1MMC-D 2 ml/kg注入大鼠左大腿肌肉后不同時(shí)間取淋巴結(jié)及肌肉中藥物濃度變化曲線2.MMC給藥組中淋巴結(jié)及肌肉MMC濃度-時(shí)間變化曲線(見2)從1，2可見MMC-D組內(nèi)，淋巴結(jié)中MMC濃度于2 h達(dá)峰值為185.2 g/g，24 h MMC濃度仍達(dá)到55.6 g/g。而MMC組于5 min時(shí)為23.1 g/g，15 min降為7.6 g/g，30 min MMC于淋巴結(jié)中消失。MMC-D組于淋巴結(jié)內(nèi)的消除半衰期為36.38 h，MMC組為3.87 min。淋巴結(jié)內(nèi)MMC-D組的曲線下面積(A

12、uc)為901.16 (g.h)/g，MMC組的Auc為4.095 (g.h)/g。MMC-D組于肌肉注射5 min后濃度達(dá)峰值為195.2(g.h)/g，MMC組用藥部位30 min后藥物近于消失。2MMC對照組注射后不同時(shí)間淋巴結(jié)及肌肉中藥物濃度變化曲線討論MMC的分子量為334.34，是一個小分子物質(zhì)。由于毛細(xì)血管中血液的流速為淋巴管內(nèi)淋巴液流速的500倍，如果沒有淋巴管選擇吸收的機(jī)制，組織中的藥物主要通過被動擴(kuò)散和濾過作用經(jīng)血液吸收并清除，而不經(jīng)過淋巴管道，故治療腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移是困難的。毛細(xì)血管壁上存在半徑為4 nm左右的細(xì)孔最多，尚有少數(shù)半徑比4 nm大419倍的細(xì)孔，當(dāng)藥物分子量從

13、2萬(半徑為3.2 nm)向4萬(半徑為4.9 nm)過渡時(shí)，淋巴液藥物濃度/血漿濃度比值增加4。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)這一原理，將MMC與7萬分子量的右旋糖酐相連接，合成的MMC-D半徑為7.4 nm，其合成方法已由作者獲得國家發(fā)明專利，作者試證實(shí)這是一種親淋巴性的藥物，并可較長期存在于注射部位，有很大的潛在臨床意義。結(jié)果顯示，MMC-D有強(qiáng)大的淋巴組織分布特性。淋巴結(jié)中注射MMC-D后2 h的峰值濃度185.2 g/g是MMC用藥后5 min達(dá)到的峰值濃度的8倍。MMC-D用藥24 h仍有30 %藥量存在于淋巴結(jié)中。MMC的抗腫瘤活性在組織中與藥物濃度乘以作用時(shí)間成正比(Auc)，淋巴結(jié)內(nèi)MMC-D的

14、Auc為MMC的220倍。故MMC-D可能為預(yù)防和治療淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的理想藥物5。結(jié)果還表明，MMC-D可長期存在于注射部位，24 h后仍有33.5 %的藥物尚未吸收，可不斷釋放活性的MMC，抑制和殺滅腫瘤細(xì)胞。因此，可通過胃鏡或術(shù)中在腫瘤及其周圍組織內(nèi)給藥，對胃癌不能切除病例的原發(fā)腫瘤治療，或?qū)ξ赴┬g(shù)后的腹膜復(fù)發(fā)的治療都具有重要的臨床意義。而本實(shí)驗(yàn)還顯示，MMC-D肌注后在血漿中測不到濃度，臨床上可減輕MMC的全身毒副作用?？傊?，本實(shí)驗(yàn)提示MMC-D具有于淋巴結(jié)內(nèi)濃度高，局部用藥后具有緩釋性，可能是預(yù)防惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移和腹膜轉(zhuǎn)移的有效藥物。 作者簡介：張榮河，博士，講師，主治醫(yī)師。張榮

15、河（中國醫(yī)科大學(xué)一院腫瘤科 沈陽110001）齊春蓮（中國醫(yī)科大學(xué)一院腫瘤科 沈陽110001）詹麗芬（中國醫(yī)科大學(xué)一院腫瘤科 沈陽110001）參考文獻(xiàn)1張榮河，齊春蓮.胃癌的淋巴化療J.國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊，1993，20(1)：122Kojma T, Hashida H, Muranishi,et al. Mitomycin dextran conjugate:A high molecular weight pro-drug of mitomycin CJ. J Pharm Pharmacol,1980,32:303Mitsuru H,Yoshinobu T, Satoshi M. Regeneration characteristics of mitomycin C-dextran conjugate in relation to its activity. Chem Pharm Bull,1983,31(6):20554Akira K, Yoshinobu T, Mistsuru H,et al. Physicohemical and antitumor characteristic