引種紫錐菊主要活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用研究

1、引種紫錐菊主要活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用研究         09-08-31 17:12:00     作者：吳建明 鄒文俊     編輯：studa20【摘要】  目的評價(jià)引種紫錐菊多糖、咖啡酸、烷酰胺三類成分的免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)比較引種與進(jìn)口紫錐菊免疫調(diào)節(jié)作用的異同。方法采用MTT法及ELISA法測定正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及免疫因子白細(xì)胞介素-2（IL-2）和干擾素-（IFN-）的分泌，以此評價(jià)引種紫錐菊三類成分的免疫調(diào)節(jié)作

2、用，并比較進(jìn)口與引種紫錐菊的作用異同。結(jié)果引種紫錐菊多糖、咖啡酸、烷酰胺三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，三類成分對脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-也表現(xiàn)出一定的促進(jìn)作用，但對IL-2的生成，咖啡酸類成分顯示較強(qiáng)的抑制作用。引種紫錐菊在促淋巴細(xì)胞增殖方面與進(jìn)口紫錐菊相同，但促IFN-生成作用強(qiáng)于進(jìn)口紫錐菊，而促IL-2分泌作用不及進(jìn)口紫錐菊。結(jié)論引種紫錐菊及其主要成分的免疫促進(jìn)作用與進(jìn)口紫錐菊相當(dāng)，可作為進(jìn)口紫錐菊替代品進(jìn)行相關(guān)開發(fā)利用研究。 【關(guān)鍵詞】  引種紫錐菊 多糖 咖啡酸 烷酰胺 淋巴細(xì)胞增殖 白細(xì)胞介素-2 干擾素-    Abs

3、tract：ObjectiveTo investigate the immunomodulatory action of polysaccharides, caffeic acid derivatives and alkylamides from introduced E. purpurea，and to compare the immunomodulatory  effect of foreign and introduced E. purpurea.MethodsThe proliferation of murine spleen lymphocyte and the secre

4、tion of IL-2 and IFN- were measured by MTT and ELISA assay to evaluate the immunomodulatory action. ResultsThe three fractions from introduced E. purpurea promoted the proliferation of lymphocytes and the secretion of IL-2 and IFN- stimulated by Con A, however, caffeic acid derivatives inhibited the

5、 secretion of IL-2. The results from the comparison of foreign and introduced E. purpurea extracts revealed that introduced extract was equally as effective as the foreign extract for the proliferation of lymphocytes. For the secretion of cytokines, each had his strong point between foreign and intr

6、oduced extracts. Introduced extract showed better effect than foreign extract for IFN- production, but not as good as foreign extract for IL-2 production. ConclusionThe introduced E. purpurea and their fractions had the similar immunomodulatory action as foreign E. purpurea, suggesting introduced E.

7、 purpurea will be important resources of medicinal materials in developing immunomodulatory agent or food supplement in China.    Key words：Introduced Echinacea purpurea;  Polysaccharides;   Caffeic acid derivatives;   Alkylamides;   Lymphocyte proli

8、feration;   IL-2;   IFN-    紫錐菊為菊科紫錐菊屬Echinacea Moench植物，作為藥用品種有3種，即紫錐菊E. purpurea Moench、狹葉紫錐菊E. angustifolia DC.和白紫錐菊E. pallida Nutt.1，其中以紫錐菊的市場需求量為最大。紫錐菊原產(chǎn)于北美，但歐洲和其它地區(qū)有引種栽培，近年在我國北京、上海、南京、湖南、山東等地也相繼引種成功2，并已形成一定的產(chǎn)業(yè)化規(guī)模。進(jìn)口紫錐菊及其成分的研究已經(jīng)十分廣泛，其免疫調(diào)節(jié)作用也很確切，而且以進(jìn)口紫錐菊為原料生產(chǎn)的免

9、疫調(diào)節(jié)劑或保健食品也具有顯著的功效，為我國引種紫錐菊的開發(fā)利用展現(xiàn)了良好的市場前景3。但引種的紫錐菊及其成分能否作為免疫調(diào)節(jié)劑原料使用，還缺乏相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究支持。盡管已有研究報(bào)道紫錐菊的理化性質(zhì)或成分分析4，5，但對引種紫錐菊及其成分的免疫調(diào)節(jié)作用研究仍然十分有限6，進(jìn)口和引種紫錐菊在免疫調(diào)節(jié)活性方面的差異也無人報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)并結(jié)合細(xì)胞因子檢測方法，研究了引種紫錐菊中三類成分對Con A刺激的正常小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)比較了進(jìn)口與引種紫錐菊乙醇提取物對Con A刺激的淋巴細(xì)胞作用的差異，為我國利用引種紫錐菊開發(fā)免疫調(diào)節(jié)劑或保健食品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。  

10、  1  材料與儀器    1.1  藥材和試劑進(jìn)口紫錐菊，購自美國“Mountain Rose Herb”植物藥公司，經(jīng)鑒定為紫錐菊Echinacea purpurea Moench。引種紫錐菊（品種引自美國），購自四川涼山種植基地，經(jīng)鑒定為紫錐菊Echinacea purpurea Moench。RPMI 1640培養(yǎng)基，GIBCO公司產(chǎn)品；小牛血清（FBS），上海輕工產(chǎn)品；青霉素、鏈霉素，華北制藥廠產(chǎn)品；四甲基偶氮唑鹽（MTT），Sigma公司產(chǎn)品；刀豆蛋白A(Con A),Sigma公司產(chǎn)品；異丙醇、甲醇、乙醇、醋酸乙酯、氯仿

11、均為分析純，廣東光華化學(xué)廠產(chǎn)品；小鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）以及小鼠干擾素-（IFN-） ELISA檢測試劑盒均由晶美公司提供。    1.2  動物清潔級昆明種小鼠，雌雄兼用，體重1822 g。由河南鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(豫）2005-0001。    1.3  儀器倒置相差顯微鏡：重慶光學(xué)儀器廠產(chǎn)品；Benchmark酶標(biāo)儀：BIO-RAD公司產(chǎn)品；Allegra 64R型高速冷凍離心機(jī)：Beckman公司產(chǎn)品；DU640紫外分光光度計(jì)：Beckman公司產(chǎn)品；Waters2690高效液

12、相色譜分析儀：Waters公司產(chǎn)品；SANYO CO2培養(yǎng)箱，日本SANYO公司產(chǎn)品。    2  方法    2.1  紫錐菊提取物的制備    2.1.1  進(jìn)口、引種紫錐菊醇提物將進(jìn)口、引種紫錐菊全草均粉碎為粗粉，用75% EtOH提取3次，1 h/次。合并醇提液，減壓回收EtOH，于50烘干即得上述兩種樣品。    2.1.2  引種紫錐菊多糖以引種紫錐菊為原料，采用水提醇沉方法制備7，用硫酸蒽酮法定量測定，多糖含量為38.26

13、%。    2.1.3  引種紫錐菊咖啡酸類成分將引種紫錐菊粉碎成粗粉，用10倍量MeOH回流提取3次，1 h/次，合并提取液，回收MeOH，以熱水溶解，EtOAc萃取3次，合并萃取液，濃縮EtOAc，以2% Na2CO3溶液萃取3次，合并Na2CO3溶液，用HCl酸化，再以EtOAc萃取，回收EtOAc即得咖啡酸類成分8。以菊苣酸為指標(biāo)成分，TLC進(jìn)行定性鑒別，以HPLC進(jìn)行含量測定，提取物中菊苣酸的含量為58.71%。    2.1.4  引種紫錐菊烷酰胺類成分以引種紫錐菊為原料，用10倍量95% EtOH超聲

14、提取3次，1 h/次,合并提取液，回收EtOH，以熱水溶解，CH3Cl萃取3次，回收CH3Cl置50 濃縮干燥即得9。經(jīng)紫外分光光度法測定其烷酰胺類成分為28.37%。    2.2  體外脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)參照文獻(xiàn)10 ，取清潔級KM小鼠10只，兼用，斷頸處死小鼠，立即分離脾臟，將脾臟剪碎，用1640培養(yǎng)液混懸并輕輕吹散細(xì)胞，靜置除去組織塊，取上清離心收集細(xì)胞，再用0.83% NH4Cl溶液破除紅細(xì)胞，用無血清1640洗滌3次，離心棄上清，加入含10%小牛血清、5 g/ml Con A的1640培養(yǎng)基，調(diào)整細(xì)胞密度為3×105個(gè)細(xì)胞/孔，以180

15、 l體積接種于96孔板；分別加入上述5種紫錐菊提取物20 l，起始濃度為100 g/ml， 10倍連續(xù)稀釋至0.01 g/ml，同時(shí)設(shè)置藥物空白對照，置37，5 CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，每種提取物濃度及對照均為3復(fù)孔操作，培養(yǎng)的細(xì)胞部分用于MTT檢測淋巴細(xì)胞增殖，上清部分用于IL-2及IFN- ELISA試劑盒定量測定。     09-08-31 17:12:00     作者：吳建明 鄒文俊     編輯：studa20    3

16、0; 結(jié)果    3.1  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響用MTT法檢測了引種紫錐菊中三類成分對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果如圖1所示，多糖、咖啡酸、烷酰胺三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，咖啡酸的作用尤其明顯，在0.1 g/ml濃度時(shí)其增殖率高于對照組達(dá)36.30%；此外，樣品濃度對淋巴細(xì)胞增殖率也有一定影響，低濃度作用促淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，而高濃度作用時(shí)淋巴細(xì)胞增殖能力減弱。    提取物濃度C/g·ml-1    圖1 

17、引種紫錐菊中三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖24。圖2顯示，多糖、烷酰胺類具有明顯促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用，以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，多糖、烷酰胺類分別高于對照組80.87%和59.10%，隨樣品濃度的加大，多糖、烷酰胺促IL-2生成作用有所下降，但仍明顯高于對照組水平，而咖啡酸類成分則顯示較強(qiáng)的抑制作用。圖3顯示，多糖、烷酰胺、咖啡酸三類成分均有不同程度促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，其作用特點(diǎn)為加大

18、藥物濃度，促IFN-分泌也增高，多糖類成分較為明顯。    圖2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖3  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    3.3  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響圖4顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，二者作用強(qiáng)度與作用趨勢均相似；因此，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖影響無顯著差異。 &

19、#160;  圖4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖56。圖5顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2，前者明顯優(yōu)于后者，在低濃度時(shí)作用更為明顯，但在高濃度（100 g/ml）時(shí)，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2作用相當(dāng)。圖6顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均具有促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，但就其作用強(qiáng)度看，引種紫

20、錐菊作用明顯高于進(jìn)口紫錐菊。尤以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，引種紫錐菊促IFN-分泌水平高于進(jìn)口紫錐菊達(dá)54.95%。    圖5  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖6  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    4  討論    已有研究報(bào)道引種紫錐菊對小鼠巨噬細(xì)胞的非特異性免疫作用6，但對引種紫錐菊的特異性免疫調(diào)節(jié)作用有待確認(rèn)。此外，國外研究已報(bào)道，紫錐菊

21、多糖、咖啡酸衍生物、烷酰胺類成分均有一定的免疫調(diào)節(jié)活性1114，但引種紫錐菊中這三類成分的免疫調(diào)節(jié)活性還有待證實(shí)。本文采用正常小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，結(jié)合MTT法和ELISA法研究了引種紫錐菊中多糖、咖啡酸、烷酰胺類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖及其分泌IL-2和IFN-的作用，結(jié)果表明，紫錐菊中三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，其中，咖啡酸衍生物的作用最為明顯，此結(jié)果與國外研究結(jié)果相吻合1，15，以上結(jié)果也提示引種紫錐菊的免疫調(diào)節(jié)作用應(yīng)體現(xiàn)多成分的組合，而非單一成分所能替代。紫錐菊的三類成分對IFN-的分泌也表現(xiàn)為促進(jìn)作用，對IL-2的分泌，多糖和烷酰胺類表現(xiàn)為促進(jìn)，咖啡

22、酸則顯示較強(qiáng)的抑制作用。    至今，尚無人對進(jìn)口、引種紫錐菊的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行比較，通過用正常小鼠脾淋巴細(xì)胞的研究表明，進(jìn)口與引種紫錐菊均能促進(jìn)Con A刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，其中進(jìn)口優(yōu)于引種紫錐菊。在促淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN-作用上，二者各有側(cè)重，進(jìn)口紫錐菊促IL-2的分泌作用明顯強(qiáng)于引種紫錐菊，但促IFN-分泌作用則弱于引種紫錐菊?？傊?，進(jìn)口與引種紫錐菊對正常小鼠T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用較為相似，在促IL-2和IFN-分泌作用則各有側(cè)重。    通過小鼠脾淋巴細(xì)胞的研究提示，引種紫錐菊對T淋巴細(xì)胞具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。但

23、引種紫錐菊對Con A刺激的淋巴細(xì)胞增殖并不能完全反映其全面的免疫調(diào)節(jié)作用，對B淋巴細(xì)胞的作用以及對免疫功能低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用等均有待闡明。而且，國內(nèi)市場以紫錐菊為原料生產(chǎn)的保健食品均采用進(jìn)口原料，隨著紫錐菊在國內(nèi)各地引種栽培面積的逐漸擴(kuò)大，更應(yīng)加快對引種紫錐菊品種的理化性質(zhì)，成分分析、免疫調(diào)節(jié)活性以及相關(guān)藥理及應(yīng)用等研究，以便國內(nèi)醫(yī)藥保健品行業(yè)盡早采用引種紫錐菊為原料生產(chǎn)免疫調(diào)節(jié)劑和保健食品。【參考文獻(xiàn)】  1 Barrett B. Medicinal properties of Echinacea: A critical reviewJ. Phytomedicine, 200

24、3,10(1):66.2 馬小軍,王雅玲,屠鵬飛,等.紫錐菊在北京地區(qū)的引種J.中國中藥雜志,1999,24 (10):590.3 肖培根.國際流行的免疫調(diào)節(jié)劑紫錐菊及其制劑J.中草藥,1996，27(1):46.4 王弘,王雪薇,陳世忠,等.松果菊屬3種植物的理化分析J.中草藥,2001,32 (10): 934.5 竇德明,崔樹玉,曹永智,等. 引種紫錐菊有效成分菊苣酸含量研究J.中草藥, 2001, 32(11):987.6 吳江濤,劉珂. 紫錐菊提取物對小鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能的影響J.煙臺大學(xué)學(xué)報(bào), 2001,14(2):131.7 吳立軍,姚新生.天然藥物化學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版

25、社, 2003：101.8 Hyun-ock K, Tomothy DD, Christine HS, et al. Retenion of caffeic acid derivatives in dried Echinacea purureaJ.J Agric Food Chem,2000,48(9):4182.9 Bauer R, Remiger P, Becker H, et al. Alkamides from the roots of Echinacea angustifolia. Phytochemistry, 1989,28(2):505.10 Bian TH, Wang XF,

26、 Li XY. Effects of morphine and naloxone on proliferation of lymphocyte in vitroJ. Acta Pharmacol Sin, 1995, 16(4):315.11 Bauer R, Jurcic K, Puhlmann J, et al. Immunological studies in vivo and in vitro of Echinacea extracts J.     09-08-31 17:12:00     作者：吳建明

27、 鄒文俊     編輯：studa20    3  結(jié)果    3.1  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響用MTT法檢測了引種紫錐菊中三類成分對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果如圖1所示，多糖、咖啡酸、烷酰胺三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，咖啡酸的作用尤其明顯，在0.1 g/ml濃度時(shí)其增殖率高于對照組達(dá)36.30%；此外，樣品濃度對淋巴細(xì)胞增殖率也有一定影響，低濃度作用促淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，而高濃度作用時(shí)淋巴細(xì)胞增殖能力減弱。&#

28、160;   提取物濃度C/g·ml-1    圖1  引種紫錐菊中三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖24。圖2顯示，多糖、烷酰胺類具有明顯促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用，以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，多糖、烷酰胺類分別高于對照組80.87%和59.10%，隨樣品濃度的加大，多糖、烷酰胺促IL-2生成作用有所下降，但仍明顯高于對照組水平，而咖啡酸類成分則顯

29、示較強(qiáng)的抑制作用。圖3顯示，多糖、烷酰胺、咖啡酸三類成分均有不同程度促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，其作用特點(diǎn)為加大藥物濃度，促IFN-分泌也增高，多糖類成分較為明顯。    圖2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖3  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    3.3  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響圖4顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激的正常小鼠脾

30、淋巴細(xì)胞增殖，二者作用強(qiáng)度與作用趨勢均相似；因此，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖影響無顯著差異。    圖4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖56。圖5顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2，前者明顯優(yōu)于后者，在低濃度時(shí)作用更為明顯，但在高濃度（100 g/ml）時(shí)，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2

31、作用相當(dāng)。圖6顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均具有促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，但就其作用強(qiáng)度看，引種紫錐菊作用明顯高于進(jìn)口紫錐菊。尤以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，引種紫錐菊促IFN-分泌水平高于進(jìn)口紫錐菊達(dá)54.95%。    圖5  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖6  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    4  討論    已有

32、研究報(bào)道引種紫錐菊對小鼠巨噬細(xì)胞的非特異性免疫作用6，但對引種紫錐菊的特異性免疫調(diào)節(jié)作用有待確認(rèn)。此外，國外研究已報(bào)道，紫錐菊多糖、咖啡酸衍生物、烷酰胺類成分均有一定的免疫調(diào)節(jié)活性1114，但引種紫錐菊中這三類成分的免疫調(diào)節(jié)活性還有待證實(shí)。本文采用正常小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，結(jié)合MTT法和ELISA法研究了引種紫錐菊中多糖、咖啡酸、烷酰胺類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖及其分泌IL-2和IFN-的作用，結(jié)果表明，紫錐菊中三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，其中，咖啡酸衍生物的作用最為明顯，此結(jié)果與國外研究結(jié)果相吻合1，15，以上結(jié)果也提示引種紫錐菊的免疫調(diào)節(jié)作用應(yīng)體現(xiàn)多成分的

33、組合，而非單一成分所能替代。紫錐菊的三類成分對IFN-的分泌也表現(xiàn)為促進(jìn)作用，對IL-2的分泌，多糖和烷酰胺類表現(xiàn)為促進(jìn)，咖啡酸則顯示較強(qiáng)的抑制作用。    至今，尚無人對進(jìn)口、引種紫錐菊的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行比較，通過用正常小鼠脾淋巴細(xì)胞的研究表明，進(jìn)口與引種紫錐菊均能促進(jìn)Con A刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，其中進(jìn)口優(yōu)于引種紫錐菊。在促淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN-作用上，二者各有側(cè)重，進(jìn)口紫錐菊促IL-2的分泌作用明顯強(qiáng)于引種紫錐菊，但促IFN-分泌作用則弱于引種紫錐菊。總之，進(jìn)口與引種紫錐菊對正常小鼠T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用較為相似，在促IL-2和IFN-分泌作用則

34、各有側(cè)重。    通過小鼠脾淋巴細(xì)胞的研究提示，引種紫錐菊對T淋巴細(xì)胞具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。但引種紫錐菊對Con A刺激的淋巴細(xì)胞增殖并不能完全反映其全面的免疫調(diào)節(jié)作用，對B淋巴細(xì)胞的作用以及對免疫功能低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用等均有待闡明。而且，國內(nèi)市場以紫錐菊為原料生產(chǎn)的保健食品均采用進(jìn)口原料，隨著紫錐菊在國內(nèi)各地引種栽培面積的逐漸擴(kuò)大，更應(yīng)加快對引種紫錐菊品種的理化性質(zhì)，成分分析、免疫調(diào)節(jié)活性以及相關(guān)藥理及應(yīng)用等研究，以便國內(nèi)醫(yī)藥保健品行業(yè)盡早采用引種紫錐菊為原料生產(chǎn)免疫調(diào)節(jié)劑和保健食品。【參考文獻(xiàn)】  1 Barrett B. Medicinal

35、properties of Echinacea: A critical reviewJ. Phytomedicine, 2003,10(1):66.2 馬小軍,王雅玲,屠鵬飛,等.紫錐菊在北京地區(qū)的引種J.中國中藥雜志,1999,24 (10):590.3 肖培根.國際流行的免疫調(diào)節(jié)劑紫錐菊及其制劑J.中草藥,1996，27(1):46.4 王弘,王雪薇,陳世忠,等.松果菊屬3種植物的理化分析J.中草藥,2001,32 (10): 934.5 竇德明,崔樹玉,曹永智,等. 引種紫錐菊有效成分菊苣酸含量研究J.中草藥, 2001, 32(11):987.6 吳江濤,劉珂. 紫錐菊提取物對小鼠單核

36、巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能的影響J.煙臺大學(xué)學(xué)報(bào), 2001,14(2):131.7 吳立軍,姚新生.天然藥物化學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2003：101.8 Hyun-ock K, Tomothy DD, Christine HS, et al. Retenion of caffeic acid derivatives in dried Echinacea purureaJ.J Agric Food Chem,2000,48(9):4182.9 Bauer R, Remiger P, Becker H, et al. Alkamides from the roots of Echinacea an

37、gustifolia. Phytochemistry, 1989,28(2):505.10 Bian TH, Wang XF, Li XY. Effects of morphine and naloxone on proliferation of lymphocyte in vitroJ. Acta Pharmacol Sin, 1995, 16(4):315.11 Bauer R, Jurcic K, Puhlmann J, et al. Immunological studies in vivo and in vitro of Echinacea extracts J. 

38、0;   09-08-31 17:12:00     作者：吳建明 鄒文俊     編輯：studa20    3  結(jié)果    3.1  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響用MTT法檢測了引種紫錐菊中三類成分對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果如圖1所示，多糖、咖啡酸、烷酰胺三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，咖啡酸的作用尤其明顯，在0.1 g/ml濃度時(shí)其增殖率高于對照組達(dá)36.

39、30%；此外，樣品濃度對淋巴細(xì)胞增殖率也有一定影響，低濃度作用促淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，而高濃度作用時(shí)淋巴細(xì)胞增殖能力減弱。    提取物濃度C/g·ml-1    圖1  引種紫錐菊中三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖24。圖2顯示，多糖、烷酰胺類具有明顯促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用，以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，多糖、烷酰胺類分別高于對照組8

40、0.87%和59.10%，隨樣品濃度的加大，多糖、烷酰胺促IL-2生成作用有所下降，但仍明顯高于對照組水平，而咖啡酸類成分則顯示較強(qiáng)的抑制作用。圖3顯示，多糖、烷酰胺、咖啡酸三類成分均有不同程度促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，其作用特點(diǎn)為加大藥物濃度，促IFN-分泌也增高，多糖類成分較為明顯。    圖2  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖3  引種紫錐菊三類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    3.3  進(jìn)口、

41、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響圖4顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，二者作用強(qiáng)度與作用趨勢均相似；因此，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖影響無顯著差異。    圖4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響    3.4  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-的影響結(jié)果見圖56。圖5顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均能促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2，前者明顯優(yōu)于后者，

42、在低濃度時(shí)作用更為明顯，但在高濃度（100 g/ml）時(shí)，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物促Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2作用相當(dāng)。圖6顯示，進(jìn)口紫錐菊與引種紫錐菊乙醇提取物均具有促進(jìn)Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IFN-作用，但就其作用強(qiáng)度看，引種紫錐菊作用明顯高于進(jìn)口紫錐菊。尤以低濃度最為明顯，在0.01 g/ml濃度下，引種紫錐菊促IFN-分泌水平高于進(jìn)口紫錐菊達(dá)54.95%。    圖5  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響    圖6  進(jìn)口、引種紫錐菊提取物對Con A刺激

43、淋巴細(xì)胞分泌IFN-的影響    4  討論    已有研究報(bào)道引種紫錐菊對小鼠巨噬細(xì)胞的非特異性免疫作用6，但對引種紫錐菊的特異性免疫調(diào)節(jié)作用有待確認(rèn)。此外，國外研究已報(bào)道，紫錐菊多糖、咖啡酸衍生物、烷酰胺類成分均有一定的免疫調(diào)節(jié)活性1114，但引種紫錐菊中這三類成分的免疫調(diào)節(jié)活性還有待證實(shí)。本文采用正常小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，結(jié)合MTT法和ELISA法研究了引種紫錐菊中多糖、咖啡酸、烷酰胺類成分對Con A刺激淋巴細(xì)胞增殖及其分泌IL-2和IFN-的作用，結(jié)果表明，紫錐菊中三類成分均能增強(qiáng)Con A刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，其中，咖啡酸衍生物的作用最為明顯，此結(jié)果與國外研究結(jié)果相吻合1，15，以上結(jié)果也提示引種紫錐菊的免疫調(diào)節(jié)作用應(yīng)體現(xiàn)多成分的組合，而非單一成分所能替代。紫錐菊的三類成分對IFN-的分泌也表現(xiàn)為促進(jìn)作用，對IL-2的分