川芎嗪對癲癇模型海馬內(nèi)信號分子的影響

1、川芎嗪對癲癇模型海馬內(nèi)信號分子的影響         09-08-04 09:22:00     作者：朱曉琴 雷水生    編輯：studa20【摘要】  目的：研究戊四氮（pentylenetetrazol, PTZ）點(diǎn)燃癲癇模型大鼠海馬內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（Cyclic Adenosine monophosphate,cAMP）、環(huán)-磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate, cGMP）的變化及川芎

2、嗪（Tetramethylpyrazine, TMP）對其的影響。方法：將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為 3 組，正常對照組、癲癇模型組、TMP 治療組。采用放射免疫法測定海馬內(nèi) cAMP、cGMP 的含量。結(jié)果：模型組與正常對照組比，cAMP、cGMP 含量明顯增加， cAMP/cGMP 比值明顯減小，差異均具有顯著性意義 （P < 0. 01），TMP 治療組與癲癇模型組比，cAMP 含量明顯增加，cGMP 含量則明顯減少，cAMP/cGMP 比值明顯增加，差異均具有顯著性意義（P < 0. 01）。結(jié)論：川芎嗪抑制癲癇放電作用與其調(diào)節(jié)海馬內(nèi) cAMP、cGMP 含量變化有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】&

3、#160; 川芎嗪；海馬；癲癇；環(huán)-磷酸腺苷；環(huán)-磷酸鳥苷；放射免疫    Abstract  Objective  To  study  the  effect  of  tetramethylpyrazine  (TMP)  in  treating  epilepsy  and  its  relationto  signaling  molecule  in  hippocamp

4、us  of  rats.    Methods     Experimental  animal  were  selected  and  randomized  into  three  groups:  normal  saline  control  group,  pentylenetetrazol  group  and  treat

5、ment  of  tetramethylpyrazine  group,and  the  changes  of  the  content  of  cAMP、cGMP  in  hippocampus  of  rats  were  detected  using  radioimmunity method.    Results    

6、 The  content  of  the  cAMP、cGMP  in  hippocampus  in  pentylenetetrazol  groups  were  significantly  higher  than  those  in  saline  control  groups.  While  the  proportionality  in

7、0; pentylenetetrazol  groups  were significantly  lower  than  those  in  saline  control  groups  (P  <  0.01).  The  content  of  cAMP  in  hippocampus  in  those  intreatment  of 

8、 tetramethylpyrazine  groups  were  significantly  higher  than  those  in  pentylenetetrazol  groups.  While  the  content  of  the  cGMP  in  hippocampus  in  intreatment  of  tetramethylpyrazi

9、ne  groups  were  significantly  lower  than  those  in  pentylenetetrazol  groups  (P  <  0.01).  The  proportionality  in  pentylenetetrazol  groups  were  significantly  higher  than 

10、those  in  saline  control  groups  (P  <  0.01).    Conclusion Tetramethylpyrazine  inhibit  epilepsy  discharge  may  be  its  regulation  the  content  of  cAMP、cGMP  in  hippocam

11、pus.    Key  Words    Tetramethylpyrazine  (TMP);  Hippocampus;  Epile;  cAMP;  cGMP;  Radioimmunity    癲癇（epilepsy, EP）是以腦部神經(jīng)元過度放電所致的突然反復(fù)和暫時性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的慢性腦部疾病，嚴(yán)重危害人類健康，其發(fā)病機(jī)制一直是國內(nèi)外研究者關(guān)注的焦點(diǎn)，但目前仍不清楚，所以至今尚未找到一種理想的根治手段。川

12、芎嗪為中藥川芎的有效成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)為四甲基吡嗪（Tetramethylpyrazine, TMP），大劑量的 TMP 對缺血、缺氧性腦損傷，海馬 Ca1 神經(jīng)元的缺血性損傷有改善和保護(hù)作用 1，2 。筆者以往的實(shí)驗(yàn)研究證明3-5：TMP 能夠抑制大鼠癲癇放電，對大鼠癲癇模型神經(jīng)細(xì)胞的損傷具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察TMP 對癲癇大鼠海馬內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）含量的影響，以探討 TMP 抑制大鼠癲癇放電的機(jī)制，從而為臨床治療癲癇提供理論依據(jù)。    1    材料與方法    1.

13、1    材料    1.1.1    實(shí)驗(yàn)動物    SD 大鼠（由廣州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供）30 只。雌雄不拘，體重 160200 g。    1.1.2    試劑及藥品    川芎嗪注射液（Tetramethylpyrazine, TMP, 40 mg/2 mL，北京第四制藥有限公司）。戊四氮（PTZ, Sigma 公司）用前以 9 g/L 氧化鈉溶液配制成溶液，濃度為 2.5

14、 mg/mL，置冰箱內(nèi)備用。試劑盒（購自上海中醫(yī)藥大學(xué)）。    1.1.3    實(shí)驗(yàn)儀器    EL-2001 型免疫計(jì)數(shù)器（陜西省西安 262 廠生產(chǎn)）。    1.2    方法    1.2.1    實(shí)驗(yàn)癲癇模型的復(fù)制    根據(jù)文獻(xiàn) 6，復(fù)制癲癇模型用 PTZ 亞驚厥劑量（32 mg/kg），每日 1 次，腹腔注射，持續(xù) 28 d 后停藥 7

15、d，再用相同劑量的 PTZ 測試，凡顯示連續(xù) 5 次 2 級以上驚厥的大鼠為達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)。大鼠驚厥發(fā)作評分標(biāo)準(zhǔn)：O 級：沒有行為上的發(fā)作；級：節(jié)律性點(diǎn)頭或頭部顫搐； 級：陣攣性咀嚼； 級：頭部顫搐加前肢陣攣性抽搐； 級：袋鼠姿勢（上身直立）； 級：跌倒；級：強(qiáng)直性驚厥。正常對照組給予相同劑量的 9 g/L 氧化鈉溶液腹腔注射，持續(xù) 28 d。     09-08-04 09:22:00     作者：朱曉琴 雷水生    編輯：studa20   

16、; 1.2.2    實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥    將 10 只 SD 大鼠隨機(jī)分為 3 組，每組 10 只，即正常對照組，癲癇模型組及川芎嗪治療組。其中癲癇模型組、TMP 治療組選自 PTZ 點(diǎn)燃癲癇模型復(fù)制成功的大鼠。正常對照組、癲癇模型組以雙蒸水 0.01 mL/g 灌胃，每日 1 次，持續(xù) 7 d；TMP 治療組每日按 800 mg/kg 劑量灌胃，每日 1 次，持續(xù) 7 d。    1.2.3    cAMP、cGMP 測定    以上各組

17、給藥 7 d 結(jié)束后，除正常對照組外，其他兩組用 PTZ 點(diǎn)燃測試 1 h 后，斷頭取腦組織，分離海馬（包括海馬、齒狀回和下托），取海馬標(biāo)本 50 mg 加入 2 mL 冷的 50 mol/L、pH 值為 4.76 的醋酸緩沖液中，立即冰浴勻漿，懸浮液加入 950 mL/L 乙醇 2 mL，靜置 5 min， 3 500 r/min，離心 10 min，收集上清液，再用 750 mL/L 乙醇 2 mL 洗沉淀物，混勻，3 500 r/min，離心 10 min，合并上清液，60 烘箱中烤干。再放射免疫法測定cAMP、cGMP 濃度。    1.2.4 

18、   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理    本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。組間比較采用成組 t 檢驗(yàn)。    2    結(jié)    果    各組大鼠海馬內(nèi) cAMP、cGMP 含量變化模型組與常對照組比，cAMP、cGMP 含量明顯增加， cAMP/cGMP 比值明顯減小，差異均具有顯著性意義（P < 0. 01），TMP 治療組與癲癇模型組比，cAMP 含量明顯增加，cGMP 含量明顯減少，cAMP/cGM

19、P 比值亦增加，接近正常，差異均具有顯著性意義（P < 0. 01）。見表 1。    3    討    論    點(diǎn)燃癲癇動物模型的形成是給予動物腦組織一種持續(xù)的、低于驚厥量的刺激化學(xué)的或物理的，當(dāng)刺激積累到一定程度，同樣的亞驚厥量，便能誘發(fā)動物癲癇的發(fā)生。由于這種模型的形成過程，極大程度的模擬了多數(shù)人類癲癇的形成，如外傷性癲癇系外傷導(dǎo)致瘀血或疤痕遺留在腦組織中，對周圍組織形成刺激源，經(jīng)過一段時期的刺激后，便導(dǎo)致癲癇發(fā)作，而某些腦部疾病如腦炎、腦膜炎、腦腫瘤后遺癥并

20、發(fā)癲癇，亦是有某一病灶作為刺激源，不斷刺激腦組織的結(jié)果。因此，點(diǎn)燃癲癇模型對研究癲癇的發(fā)病機(jī)制及藥物治療機(jī)理是最為理想的模型7。環(huán)核苷酸（cAMP、cGMP）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的“第二信使”，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動起重要調(diào)節(jié)作用。cAMP、cGMP 對中樞神經(jīng)調(diào)節(jié)作用是相互對應(yīng)并相互關(guān)聯(lián)的，體內(nèi) cAMP、cGMP 保持一定比例，得以維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常放電過程，而比例發(fā)生改變時出現(xiàn)異常興奮或抑制，發(fā)生異常放電，產(chǎn)生癲癇。關(guān)于環(huán)核苷酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)參與癲癇與發(fā)病機(jī)制的研究，已有較多的實(shí)驗(yàn)證明，動物癲癇及人類癲癇均可明顯影響腦內(nèi)環(huán)核苷酸水平8，9。TMP 在體內(nèi)有廣泛的抑制效應(yīng)，且有抑制缺血、抗再

21、灌所致心律失常的作用，TMP 通過抑制內(nèi)皮素-1 （ET-1）引起的冠脈血管收縮和缺血性改變，而實(shí)現(xiàn)其抗心肌缺血作用。TMP 對缺血再灌所致的心功能損傷有較好的保護(hù)作用，TMP 對 1-1 腎上腺素受體有競爭抑制作用10。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 TMP 能夠使癲癇大鼠海馬內(nèi) cGMP 含量明顯下降，而 cAMP 含量進(jìn)一步增加，表明 TMP 對癲癇大鼠海馬內(nèi) cAMP、cGMP 含量有一定的調(diào)節(jié)作用。有研究表明，腦內(nèi)cAMP 含量的進(jìn)一步增加，反作用于細(xì)胞膜，改變膜通透性，減弱神經(jīng)興奮性，使發(fā)作停止或減弱，因而提高腦內(nèi) cAMP 水平而可能有抗癲癇作用11 。cAMP/cGMP 比值的病理改變與癲癇發(fā)

22、生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示 TMP 在升高大鼠腦內(nèi) cAMP 降低 cGMP 的同時，使 cAMP/cGMP 比值恢復(fù)正常。所以，TMP 抑制大鼠癲癇放電的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié) cAMP 及 cGMP 含量有關(guān)。【參考文獻(xiàn)】  1NI JW, Matsumoto K, Watanabe H. Tetramthylpyrazine improve spatial cognitive impairment induced by permanent occlusion of bilateral common carotid arteries or scopolamine in ratsJ. Jpn J Pharma-col, 2005, 67(2): 137-1412 Luo XX, Ogata H, Xu X, et al. Protective effect of tetramthylpyrazine on ischemic neural damage in the qerbyl hippocampn