變應(yīng)性鼻炎大鼠模型的建立_宋建明

1、文章編號(hào)1671-587(201206-1152-04收稿日期2012-05-06基金項(xiàng)目福建省莆田市科技局科研基金資助課題(2010G 06;莆田學(xué)院創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目資助課題(2010P 11352作者簡(jiǎn)介宋建明(1988-,男,福建省莆田市人,醫(yī)學(xué)本科,主要從事變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制方面的研究。通信作者張敏(T e l E -m a i l :z m 5995s i n a .c o m 變應(yīng)性鼻炎大鼠模型的建立宋建明1,黃秀清1,林燕惠1,張敏2(1.莆田學(xué)院醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系,福建莆田351100;2.莆田學(xué)院醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室,福建莆田351100摘要目的:建立變

2、應(yīng)性鼻炎(A R W i s t a r 大鼠模型,探討呼吸道變應(yīng)性炎癥的發(fā)病機(jī)制,為臨床治療A R 提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將30只W i s t a r 大鼠隨機(jī)分成模型組、正常組和地塞米松(D E X 組,每組10只。模型組大鼠經(jīng)腹腔注射卵清蛋白(O V A 變應(yīng)原,鼻腔滴入O V A 鼻內(nèi)激發(fā);正常組大鼠以生理鹽水替代O V A ;D E X 組大鼠激發(fā)成A R 后再用D E X (0.2m L ·k g -1后肢肌肉注射,觀察大鼠行為學(xué)癥狀;采用H E 染色和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)大鼠鼻黏膜組織學(xué)變化、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及其鼻黏膜免疫球蛋白E (I g E 的吸光度(A 值。結(jié)果

3、:模型組大鼠均出現(xiàn)鼻癢、噴嚏和流清涕等A R 的臨床特征,大鼠鼻黏膜可見(jiàn)大量的嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),黏膜水腫增厚、腺體增生、分泌旺盛和鼻黏膜表面纖毛破壞等組織形態(tài)學(xué)變化。正常組大鼠僅輕度抓鼻,且噴嚏少。D E X 組W i s t a r 大鼠小血管無(wú)明顯擴(kuò)張,黏膜厚度較模型組明顯降低,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕。模型組和D E X 組大鼠嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及其A 值均高于正常組(P <0.05,D E X 組大鼠鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及A 值均低于模型組(P <0.05。結(jié)論:成功建立O V A 變應(yīng)原致敏的A R W i s t a r 大鼠模型。關(guān)鍵詞變應(yīng)性鼻炎;疾病模型,動(dòng)

4、物;卵清蛋白;嗜酸性粒細(xì)胞;免疫球蛋白E 中圖分類號(hào)R 765.21文獻(xiàn)標(biāo)志碼A E s t a b l i s h m e n t o f a l l e r gi c r h i n i t i s m o d e l s o f r a t s S O N G J i a n -m i n g 1,HU A N G X i u -q i n g 1,LI N Y a n -h u i 1,Z HA N G -M i n 2(1.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l M e d i c i n e ,C o l l e g e o f M e d

5、i c a l S c i e n c e s ,P u t i a n U n i v e r s i t y ,P u t i a n 351100,C h i n a ;2.D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y ,C o l l e g e o f M e d i c a l S c i e n c e s ,P u t i a n U n i v e r s i t y,P u t i a n 351100,C h i n a A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o e s t a b l i s

6、h a l l e r g i c r h i n i t i s (A R m o d e l s o f W i s t a r r a t s ,a n d t o d i s c u s s t h e p a t h o g e n e s i s o f a l l e r g i c i n f l a m m a t i o n o f r e s p i r a t o r y t r a c t ,a n d t o p r o v i d e b a s i s f o r c l i n i c a l t r e a t m e n t o f A R.M e t h

7、 o d s 30W i s t a r r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p (n =10,n o r m a l g r o u p (n =10a n d d e x a m e t h a s o n e (D E X g r o u p (n =10.T h e r a t s i n m o d e l g r o u p w e r e i m m u n i z e d i n t r a p e r i t o n e a l l y w i t h o v a l

8、b u m i n (O V A ,f o l l o w e d b y i n t r a n a s a l a d m i n i s t r a t i o n o f O V A ;a n d t h e r a t s i n n o r m a l g r o u p w e r e a d m i n s t r a t e d w i t h s a l i n e i n s t e a d o f O V A ;t h e r a t s i n D E X g r o u p w e r e c h a l l e n g e d i n t o A R ,t h e

9、 n t h e y w e r e i n j e c t e d w i t h 0.2m L ·k g -1d e x a m e t h a s o n e m u s c l e o f h i n d l e g s .T h e b e h a v i o r a l s y m p t o m s ,h i s t o l o g i c a l c h a n g e s o f n a s a l m u c o s a ,t h e n u m b e r o f e o s i n o p h i l e g r a n u l o c y t e s a n

10、 d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f I g E w e r e d e t e c t e d b y H E s t a i n i n g a n d i m m u n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o d s .R e s u l t s T h e A R s y m p t o m s ,s u c h a s n a s a l i t c h i n g ,s n e e z i n g ,a n d r h i n o r r h e a o f t h e r a t s i n

11、 m o d e l g r o u p w e r e o b s e r v e d .T h e r e w e r e a l o t o f h i s t o l o g i c a l c h a n g e s ,s u c h a s e o s i n o p h i l e g r a n u l o c y t e s ,l y m p h o c y t e s ,e d e m a o f t h e m u c o s a ,g l a n d h y p e r p l a s i a ,s t r o n g s e c r e t i o n ,a n d

12、c i l i a d e s t r u c t i o n o n n a s a l s u r f a c e o f t h e r a t s i n m o d e l g r o u p .T h e r e w e r e o n l y m i l d g r a s p i n g n o s e a n d a s m a l l a m o u n t o f s n e e z i n g o f t h e r a t s i n n o r m a l g r o u p .T h e s m a l l b l o o d v e s s e l s o f

13、t h e r a t s i n D E X g r o u p h a d n o s i g n i f i c a n t e x p a n s i o n ,t h e m u c o s a l t h i c k n e s s w a s l o w e r t h a n t h a t i n m o d e l g r o u p a n d t h e d e g r e e o f i n f l a m m a t o r y c e l l i n f i l t r a t i o n w a s a l l e v i a t e d .T h e n u

14、m b e r s o f e o s i n o p h i l e g r a n u l o c y t e s a n d t h e i r A v a l u e s o f t h e r a t s i n D E X g r o u p a n d m o d e l g r o u p w e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n n o m a l g r o u p (P <0.05.T h e n u m b e r o f 2511第38卷第6期2012年11月吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版J o u r n a l o f J i

15、 l i n U n i v e r s i t y (M e d i c i n e E d i t i o n V o l .38N o .6N o v .2012e o s i n o p h i l eg r a n u l o c y t e sa n di t sAv a l u eo ft h er a t si nD E Xg r o u pw e r el o w e rt h a nt h o s ei nm o d e lg r o u p(P<0.05.C o n c l u s i o nT h eA Rr a tm o d e li n d u c e db

16、yO V Ai se s t a b l i s h e ds u c c e s s f u l l y.K e yw o r d s:a l l e r g i cr h i n i t i s;d i s e a s em o d e l,a n i m a l;o v a l b u m i n;e o s i n o p h i l eg r a n u l o c y t e s;i m m u n o g l o b u t i n變應(yīng)性鼻炎(a l l e r g i cr h i n i t i s,A R是發(fā)生在鼻黏膜的變態(tài)反應(yīng)性疾病,是主要由I g E介導(dǎo)的I型變態(tài)反應(yīng)。

17、A R是變應(yīng)原致敏激發(fā)產(chǎn)生一系列生化反應(yīng),導(dǎo)致黏膜的各種病理改變,包括毛細(xì)血管通透性增高、黏膜水腫、多形核細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)的一種慢性鼻黏膜炎癥性疾病。近幾十年來(lái),由于人們生活方式的改變和環(huán)境污染的加重,該病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)1。A R發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者對(duì)A R的研究2-4均是通過(guò)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型實(shí)現(xiàn)的。豚鼠是最早被用來(lái)建立變應(yīng)性模型的動(dòng)物,早在1988年T a n a k a等5就利用甲苯二異氰酸酯建立豚鼠A R模型。本研究以W i s t a r大鼠為研究對(duì)象,通過(guò)注射卵清蛋白(o v a l b u m i n,O V A變應(yīng)原致敏,觀察大鼠行為學(xué)表現(xiàn)和組織學(xué)的改變,

18、旨在制備實(shí)驗(yàn)性A R模型,為進(jìn)一步探討呼吸道變應(yīng)性炎癥的發(fā)病機(jī)制及臨床研究提供基礎(chǔ)。1材料與方法1.1動(dòng)物、主要試劑及儀器30只健康W i s t a r 大鼠購(gòu)自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,S P F級(jí), 56周齡,體質(zhì)量120150g,隨機(jī)分為正常組、模型組和地塞米松(d e x a m e t h a s o n e,D E X組,每組10只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分籠飼養(yǎng),飼以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料,在空調(diào)動(dòng)物房飼養(yǎng),飼養(yǎng)房避免過(guò)敏原存在,早晚12h間斷照明,溫度保持在1825。O V A (美國(guó)S i g m a公司;氫氧化鋁、10%水合氯醛(北京化學(xué)試劑公司;D E X注射液、I g E(美國(guó)R&D

19、公司;S P二步法試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;D A B顯色試劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;光學(xué)顯微鏡(上海儀圓光學(xué)儀器有限公司;可調(diào)移液器(芬蘭F i n n p i p e t t e D i g i t a l公司;5m L注射器、電子天平(英國(guó)A1003P h a r m a c i aB i o t e c h公司。1.2動(dòng)物分組及給藥6-7基礎(chǔ)致敏過(guò)程:模型組,0.3m gO V A加15m gA l(O H3混于1m L 生理鹽水中,按大鼠體質(zhì)量隔日行腹腔注射,共14d;正常組,以等量生理鹽水替代O V A混懸液,按大鼠體質(zhì)量隔日行腹腔注射,共14d;D E X組,

20、基礎(chǔ)致敏的方法和步驟同模型組。激發(fā)階段:模型組,以0.1g·L-1O V A每日滴鼻維持過(guò)敏狀態(tài),共7d;正常組,用生理鹽水代替O V A 每日滴鼻,共7d;D E X組,用0.1g·L-1O V A 每日滴鼻,同時(shí)用0.2m L·k g-1D E X后肢肌肉注射,共7d。1.3大鼠A R模型成功判定標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)激發(fā)實(shí)驗(yàn),模型大鼠會(huì)出現(xiàn)打噴嚏、撓鼻、抓臉和鼻溢等癥狀。趙秀杰等8在給藥后30m i n內(nèi)對(duì)上述癥狀建立了評(píng)分系統(tǒng)。鼻癢:輕度為1分,輕擦鼻幾次;重度為2分,抓撓鼻、面不止,到處擦磨。噴嚏: 13個(gè)為1分,410個(gè)為2分,11個(gè)以上為3分。清涕:流到鼻前孔為1

21、分,過(guò)鼻前孔為2分,流涕滿面為3分。以疊加法記錄總分,總分超過(guò)5分即為建模成功。1.4A S標(biāo)本制備大鼠末次激發(fā)24h后,用10%水合氯醛(300m g·k g-1行腹腔注射,麻醉后將大鼠心臟放血處死,迅速打開(kāi)鼻背,剝?nèi)ド项M骨部皮膚,沿右側(cè)鼻中隔外側(cè)前庭壁剪斷,向上翻開(kāi)暴露鼻中隔和雙側(cè)鼻腔,取雙側(cè)鼻中隔黏膜,固定于10%中性甲醛溶液中過(guò)夜后,先后放在20%和30%蔗糖溶液中分別過(guò)夜,然后制成切片,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。1.5免疫組織化學(xué)染色觀察各組大鼠嗜酸性粒細(xì)胞采用S P法染色,切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化, 3%H2O2室溫10m i n,微波抗原修復(fù)10m i n,冷卻,P B S沖洗

22、,非免疫血清封閉20m i n,P B S沖洗,加一抗(I g E12004過(guò)夜;滴加生物素化二抗室溫靜置20m i n,P B S沖洗,滴加100L 新配制的D A B液,顯微鏡下觀察,顯色約2m i n、雙蒸餾水沖洗、蘇木精復(fù)染、脫水、透明和封片,光鏡下觀察各組大鼠嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及其I g E的吸光度(A值。1.6免疫組織化學(xué)法測(cè)定I g E吸光度(A值采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠反應(yīng)切片中選取的形態(tài)典型的對(duì)應(yīng)切面,所得圖像經(jīng)S i m p P C I圖像分析系統(tǒng)分析。在不同鼻黏膜切片間測(cè)量相同解剖結(jié)構(gòu)區(qū),每一解剖區(qū)各測(cè)5個(gè)點(diǎn),每個(gè)測(cè)量點(diǎn)測(cè)量的像素量(即被測(cè)量面積保持一致。以上每個(gè)解剖

23、區(qū)測(cè)量值總和的平均值即為鼻黏膜結(jié)構(gòu)區(qū)域的最終A值,通過(guò)A值間接反映大鼠鼻黏膜表面3511宋建明,等.變應(yīng)性鼻炎大鼠模型的建立I g E的表達(dá)水平。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用S P S S10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各組大鼠行為學(xué)評(píng)分、鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及其I g E的A值以x±s表示,組間比較采用單因素方差分析。2結(jié)果2.1各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)模型組10只W i s t a r 大鼠打噴嚏均多于11個(gè),持續(xù)抓鼻,臉部布滿鼻分泌物,總評(píng)分>5分。D E X組大鼠致敏期和激發(fā)第1次開(kāi)始出現(xiàn)明顯的抓鼻、打噴嚏和流鼻涕癥狀,總評(píng)分>5分,激發(fā)后期,癥狀逐漸緩解;D E X組大鼠的鼻

24、噴嚏平均次數(shù)較模型組的鼻噴嚏平均次數(shù)明顯減少。正常組10只W i s t a r大鼠僅有輕度抓鼻,且噴嚏少,總評(píng)分<5分。各組大鼠癥狀評(píng)分變化見(jiàn)表1。表1各組大鼠行為學(xué)癥狀評(píng)分T a b.1T h eb e h a v i o rs y m p t o ms c o r e so fr a t si nv a r i o u sg r o u p s(n=10,x±sG r o u pS y m p t o ms c o r e(t/d1234567N o m a l0.40±0.510.59±0.650.60±0.661.00±1.02

25、0.70±0.780.80±0.781.10±0.89 M o d e l4.98±0.57*5.60±0.54*5.00±1.29*6.20±0.66*6.60±0.76*7.00±0.83*7.10±0.99* D E X4.97±0.46*4.89±0.88*4.40±1.10*3.96±0.98*3.78±0.76*3.12±0.87*3.17±0.21*P<0.05c o m p a r e dw i t hn

26、 o m a lg r o u p;P<0.05c o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p.2.2各組大鼠鼻黏膜組織學(xué)表現(xiàn)模型組大鼠鼻黏膜組織中有大量嗜酸性粒細(xì)胞和其他炎性細(xì)胞浸潤(rùn),上皮細(xì)胞有脫落,杯狀細(xì)胞化生、肥大,黏膜間質(zhì)水腫增高,腺體增生肥大、分泌旺盛且鼻黏膜表面纖毛破壞等。正常組大鼠鼻黏膜上皮完整,呈柱狀排列,未見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞和其他炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。D E X組大鼠小血管無(wú)明顯擴(kuò)張,黏膜厚度較模型組明顯降低,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕。見(jiàn)圖1 (插頁(yè)三。2.3各組大鼠嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和鼻黏膜I g E表達(dá)平均A值模型組和D E X組大鼠嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)

27、和A值均高于正常組(P<0.05;D E X組大鼠鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和A值低于模型組(P<0.05。見(jiàn)表2和圖2(插頁(yè)三。表2各組大鼠鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和I g E表達(dá)A值T a b.2T h en u m b e r so fe o s i n o p h i l eg r a n u l o c y t e sa n dA v a l u e so fI g Eo fr a t si nv a r i o u sg r o u p s(n=10,x±sG r o u pN o.o fe o s i n o p h i l eg r a n u l c o y

28、 t e sAv a l u eo fI g EN o m a l0.45±0.5622.46±1.46M o d e l11.78±2.24*39.56±4.58*D E X7.12±2.12*25.34±4.43*P<0.05c o m p a r e dw i t hn o m a lg r o u p;P<0.05c o m p a r e d w i t hm o d e lg r o u p.3討論建立有效可行的大鼠A R模型,可以更有效地研究該疾病的發(fā)病機(jī)制,克服人體實(shí)驗(yàn)的局限性。目前國(guó)內(nèi)外制備A R模型尚未

29、統(tǒng)一和標(biāo)準(zhǔn)化,造模使用的致敏原、免疫佐劑致敏和激發(fā)的方法、途徑和試劑等也不完全相同。致敏原有真菌性抗原致敏9、豚草花粉變應(yīng)原致敏10等。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠經(jīng)O V A長(zhǎng)期刺激,產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng),使鼻部黏膜炎癥長(zhǎng)期存在,促進(jìn)了I g E的合成并使組織內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量增加11-13,表現(xiàn)為鼻黏膜組織中有大量嗜酸性粒細(xì)胞和其他炎性細(xì)胞浸潤(rùn),上皮細(xì)胞脫落,杯狀細(xì)胞化生、肥大,黏膜間質(zhì)水腫加重,腺體增生肥大、分泌旺盛,鼻黏膜表面纖毛破壞等,鼻黏膜部的I g E的A值高于正常組。D E X 組大鼠中,D E X可抑制白細(xì)胞的黏附,降低免疫蛋白超家族黏附分子1/黏合素分子1(I C AM-1/ L F A-

30、1間相互作用,使A R的癥狀得到一定的緩解,同時(shí)D E X防止或抑制細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),減少嗜酸性細(xì)胞的數(shù)目,使D E X組大鼠鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)低于模型組,與模型組和正常組比較,D E X組大鼠的癥狀較輕,同時(shí)大鼠鼻黏膜部I g E的含量較模型組大鼠降低。通過(guò)動(dòng)物疾病模型來(lái)研究人類疾病,可以觀察到無(wú)法在患者身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的各種致病因素對(duì)人體的作用,同時(shí)還可克服人類疾病發(fā)生、發(fā)展緩慢,潛伏期長(zhǎng),發(fā)病原因多樣,經(jīng)常伴有各種其他疾病等因素的干擾,可以用單一的病因,在短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出典型的動(dòng)物疾病模型。動(dòng)物模型是研究人類各種疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和疾病防治的重要工具之一。4511吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版

31、第38卷第6期2012年11月參考文獻(xiàn)1K n i p p i n g S ,H o l z h a u s e n H J ,R i e d e r e r A ,e t a l .I m m u n o e l e c t r o n m i c r o s c o p i c f i n d i n g s i n p a t i e n t s w i t h a l l e r g i c r h i n i t i s J .L a r y n g o r h i n o o t o l o gi e ,2002,81(12:861-865.2顧之燕.呼吸道炎癥反應(yīng)J .中華耳鼻咽

32、喉科雜志,2001,36(5:397-399.3張羅,周炎,韓德民,等.變應(yīng)性鼻炎研究進(jìn)展(一:發(fā)病機(jī)制J .耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2003,10(5:316-320.4佘文煜,董震.實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜組織的特點(diǎn)J .中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2006,41(1:48-53.5T a n a k a K ,O k a m o t o Y ,N a g a y a Y ,e t a l .A n a s a l a l l e r g yn o d e l d e v e l o p e d i n t h e g u i n e a p i g b y i n t r a n a s a

33、l a p p l i c a t i o n o f 2,4-T o l u e n e d i s o c y -a n a t e J .I n t A r c h A l l e r g y A p p l I m m u n o l ,1988,85(4:392-397.6趙宇,v a n H a s s e l t C A ,吳港生,等.卵白蛋白經(jīng)鼻致敏建立變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型J .中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2005,4(3:176-180.7R o b e r t J ,H o M ,J a c k A.A i r w a y r e m o d e l i n g i n a s

34、 t h m a :t h e r a p e u t i c i m p l i c a t i o n s o f m e c h a n i s m s J .P h y s i o l o g y ,2005,20(1:28-35.8劉建國(guó),楊政,劉月輝.變應(yīng)性鼻炎大鼠模型建造J .江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,48(5:33-34.9張志明.真菌性抗原致變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型建立J .中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科,2005,12(5:313.10余洪猛,文三立.豚草花粉變應(yīng)性過(guò)敏性鼻炎豚鼠模型的建立J .上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué),2001,21(4:212.11孔紅.細(xì)胞黏附分子和變應(yīng)性鼻炎J .國(guó)外醫(yī)學(xué):

35、耳鼻咽喉科分冊(cè),1999,22(2:92-94.12W a t a n a b e T ,O k a n o M ,H a t t o r i H ,e t a l .R o l e s of f cg a m m a R I I B i n n a s a l e o s i n o phi l i a a n d I g E p r o d u c t i o n i n m u r i n e a l l e r g i c r h i n i t i s J .A m J R e s p i r C r i t C a r e M e d ,2004,169(1:105-112.13D

36、 i a r m e C W ,A n d r e w N J ,A u l i k k i M L ,e t a l .I n t e gr a t e d s i g n a l s b e t w e e n I L -13,I L -4,a n d I L -5r e g u l a t e a i r w a y s h y p e r r e a c t i v i t y J .J I m m u n o l ,2000,165(1:108-113.856株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥性分析河南省南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校微生物學(xué)教研室(河南南陽(yáng)473061包東武,滿永宏1資料與方法

37、1.1標(biāo)本來(lái)源2010年1月2011年12月從本院臨床各科室送檢痰液、創(chuàng)面分泌物、尿液、血液、前列腺液、引流液和穿刺液等標(biāo)本分離出的金黃色葡萄球菌共856株,其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(m e t h i c i l -l i n -r e s i s t a n t s t a p h y l o c o c c u s a u r e u s,M R S A 共446株,檢出率為52.1%。1.2細(xì)菌鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)方法按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程,第3版進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng),菌種鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)采用生物梅里埃公司細(xì)菌鑒定卡、G N 13藥敏卡,V i t e k -2細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng)。金黃色葡萄球菌

38、質(zhì)控菌株為A T C C 25923標(biāo)準(zhǔn)株(購(gòu)于衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析采用WH O N E T 5.4軟件。2結(jié)果與討論M R S A 對(duì)萬(wàn)古霉素、利奈唑烷、替加環(huán)素和達(dá)托霉素敏感率為100%,對(duì)其他抗生素的耐藥率由高到低依次為青霉素(100%、頭孢唑林(100%、紅霉素(95.8%、左氧氟沙星(85.4%、克林霉素(83.3%、環(huán)丙沙星(81.2%、頭孢噻肟(79.3%、慶大霉素(75.6%、四環(huán)素(71.8%、阿卡米星(70.1%、復(fù)方新諾明(54.1%、亞胺培南(43.1%、夫西地酸(15.2%、呋喃妥因(13.4%、利福平(9.3%和強(qiáng)力霉素(8.7%。M R S A 是

39、院內(nèi)革蘭氏陽(yáng)性菌感染的主要細(xì)菌,其感染率和臨床分離率呈逐年上升趨勢(shì)。2011年本院M R S A 檢出率為52.1%,其中普通外科、呼吸科、腦外科和I C U 的檢出率最高。M R S A 的甲氧西林耐藥由m e c A 基因介導(dǎo),該基因存在于葡萄球菌染色體盒(S C C m e c 側(cè)面D N A ,編碼青霉素結(jié)合蛋白2a (P B P 2a ,可以降低-內(nèi)酰胺抗生素親和力。P B P 2a 與固有青霉素結(jié)合蛋白2(P B P 2共同作用,使M R S A 在內(nèi)酰胺抗生素的環(huán)境中合成細(xì)胞壁而對(duì)青霉素、頭孢菌素和碳青霉烯類產(chǎn)生耐藥。研究表明:M R S A 的耐藥譜系與基因型間無(wú)相關(guān)性,因此不

40、能借助生化反應(yīng)、藥物敏感分析和其他生物學(xué)性狀確定院內(nèi)感染株的流行特征。但S C C m e c 的基因分型有助于這些菌株的同源性和相關(guān)性分析。有報(bào)道顯示:亞洲地區(qū)S C C m e c 型和型發(fā)生頻率占有優(yōu)勢(shì),分別占M R S A 分離菌株的60.2%和33.6%。臨床上萬(wàn)古霉素仍是M R S A 用藥的首要選擇,尤其用于M R S A 菌血癥和心內(nèi)膜炎的治療。雖然近年來(lái)伴隨M R S A 感染率和萬(wàn)古霉素臨床使用率的上升,已經(jīng)出現(xiàn)萬(wàn)古霉素耐藥株的報(bào)道,但該現(xiàn)象明顯存在地區(qū)性。此外,利奈唑烷、替加環(huán)素對(duì)M R S A 同樣具有極好的抗菌活性,也是被美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)的可用于成年患者皮膚和

41、軟組織M R S A 感染(如深部軟組織感染、外科手術(shù)創(chuàng)傷感染和燒傷治療的抗生素。藥物對(duì)比實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):替加環(huán)素可能增加死亡風(fēng)險(xiǎn),由于有多種抗M R S A 的有效替代抗生素,替加環(huán)素應(yīng)盡量排除或慎重選用。已有的數(shù)據(jù)表明:利奈唑胺對(duì)M R S A 長(zhǎng)期保持較低的最小抑菌濃度值,是萬(wàn)古霉素耐藥M R S A 感染的良好替代藥物,尤其用于醫(yī)院獲得性肺炎的治療,具有良好的安全性和耐受性,也適用于新生兒和兒童M R S A 感染的治療。達(dá)托霉素藥效具有濃度依賴性,但在對(duì)比研究中發(fā)現(xiàn):該藥對(duì)M R S A 的抗菌活性最強(qiáng),適用于萬(wàn)古霉素治療無(wú)效的反復(fù)性M R S A 菌血癥。本組檢出的M R S A 對(duì)強(qiáng)

42、力霉素和利福平耐藥率較小,可用于M R S A 感染的經(jīng)驗(yàn)性口服抗生素治療,但由于可能存在耐藥株,在無(wú)病原和藥敏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的情況下,不適合單獨(dú)用于治療M R S A 感染。5511宋建明,等.變應(yīng)性鼻炎大鼠模型的建立 圖2各組小鼠中腦黑質(zhì)i N O S 和I L -6免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)F i g .2T h e m o r p h o l o g y o f i m m u n o r e a c t i v e p o s i t i v e c e l l s o f i N O S a n d I L -6i n t h e s u b s t a n t i a n i g r a

43、o f m i c e i n v a r i o u s g r o u p s A ,B ,C :i N O S ;D ,E ,F :I L -6;A ,D :C o n t r o l g r o u p ;B ,E :M o d e l g r o u p ;C ,F :R o s i g l i t a z o n e g r o u p;S c a l e b a r =100m.(s e e n o n p a g e 1126i n p a r a g r a ph 圖3各組小鼠中腦黑質(zhì)T H 免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)F i g .3T h e m o r p h o l o g

44、 y of T H i m m u n o r e a c t i v e p o s i t i v e c e l l s i n t h e s u b s t a n t i a n ig r a o f m i c e i n v a r i o u s g r o u p s A :C o n t r o l g r o u p ;B :M o d e l g r o u p ;C :R o s i g l i t a z o n e g r o u p ;S c a l e b a r =50m.(s e e n o n p a g e 1126i n p a r a g r a

45、 ph 圖1間歇性低氧6周后大鼠海馬區(qū)磷酸化J N K 表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色,×400F i g .1E x p r e s s i o n s o f p h o s p h o r y l a t e d J N K p r o t e i n s i n h i p p o c a m p a l r e g i o n o f r a t s 6w e e k s a f t e r i n t e r m i t t e n t h y po x i a (I m u n o h i s t o c h e m i s t r y s t a i n i n g ,

46、15;400A :C o n t r o l g r o u p ;B :M i l d i n t e r m i t t e n t h y p o x i a g r o u p;C :M o d e r a t e i n t e r m i t t e n t h y p o x i a g r o u p ;D :S e v e r e i n t e r m i t t e n t h y p o x i a g r o u p .(s e e n o n p a g e 1137i n p a r a g r a ph 圖3T U N E L 法檢測(cè)間歇性低氧6周后大鼠海馬區(qū)凋亡神經(jīng)細(xì)胞(×