強(qiáng)直性脊柱炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及其意義

1、強(qiáng)直性脊柱炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及其意義內(nèi)容提要： 強(qiáng)直性脊柱炎 特點(diǎn)及其與B27關(guān)系什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)、RRHLA-B27與哪些疾病相關(guān)HLA-B27 怎么檢測(cè)MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP2強(qiáng)直性脊柱炎(AS) 是一種慢性、進(jìn)行性，中軸關(guān)節(jié)受累 的關(guān)節(jié)病變，其中以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱關(guān)節(jié)受累為主要臨床表現(xiàn)。該病早期進(jìn)展較慢，但后期發(fā)展較快，很短時(shí)間內(nèi)形成 駝背畸形，髖、膝等關(guān)節(jié)強(qiáng)直，故早期診斷顯得尤為重要。強(qiáng)直性脊柱炎的流行病學(xué)v患病率患病率 我國(guó)我國(guó)0.3% 0.3% 高！高！ （RA 0.36%RA 0.36%）v發(fā)病年齡發(fā)病年齡

2、40 40歲以前發(fā)病歲以前發(fā)病 高峰高峰20-30 20-30 歲歲v男女比例男女比例 10:1 10:1強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)檢測(cè)：HLA-B27Ankylosing Spondylitis，AS患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直B27檢測(cè)可作為有相關(guān)癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！5強(qiáng)直性脊柱炎強(qiáng)直性脊柱炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大世界性性別分布男女女男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風(fēng)濕因子（）（

3、）AS與HLA-B276健康人群健康人群HLA-B27HLA-B27陽(yáng)性率及陽(yáng)性率及ASAS患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異HLAB27HLAB27與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病有很強(qiáng)的相關(guān)性與強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病有很強(qiáng)的相關(guān)性兩種錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)：兩種錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)：HLA-B27HLA-B27陽(yáng)性陽(yáng)性ASAS！ HLA-B27HLA-B27陽(yáng)性不會(huì)轉(zhuǎn)陰！陽(yáng)性不會(huì)轉(zhuǎn)陰！HLA-B27陽(yáng)性率陽(yáng)性率AS患病率患病率AS患者患者B27陽(yáng)性率陽(yáng)性率中國(guó)人2-7%0.3%9095%歐洲白種人413180100%南非黑人南非黑人1很低很低22%美國(guó)黑人2457%印地安人95061280100%AS與H

4、LA-B27的關(guān)聯(lián)機(jī)制連鎖不平衡學(xué)說(shuō)分子模擬學(xué)說(shuō)關(guān)節(jié)源性肽假說(shuō)其他：T細(xì)胞受體庫(kù)假說(shuō)超抗原假說(shuō)B27修飾因子假說(shuō)Cys67模型7HLA相關(guān)概念主要組織相容性抗原主要組織相容性復(fù)合體（ MHC 類)：H-2 SLA HLAMHC、HLA復(fù)合體基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人類白細(xì)胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）8HLA相關(guān)概念9不同地區(qū)不同地區(qū)HLA-B27亞型的流行病學(xué)分布亞型的流行病學(xué)分布?xì)W洲、非洲2705、2702、2707東南亞（印尼、馬來(lái)西亞、泰國(guó)）2706、2704、2705中國(guó)中國(guó)、新加坡、日本2704、2705、2707HLA-B27相關(guān)疾病 1

5、0疾病HLA-B27陽(yáng)性率(%)強(qiáng)直性脊椎炎90銀屑病性關(guān)節(jié)炎 55Reiters綜合癥37反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎沙門氏菌感染29.7志賀氏菌感染20.7耶爾森氏菌感染17.6淋病雙球菌感染14.0正常人群 27HLA-B27檢測(cè)方法及評(píng)價(jià)抗原水平微量細(xì)胞毒法 84%ELISA 85%IMS-ELISA 88%流式細(xì)胞術(shù)法 93%基因水平PCR-SSP 96%11微量細(xì)胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）原理：如果受試者淋巴細(xì)胞表面表達(dá)有相應(yīng)的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結(jié)合，形成Ag-Ab復(fù)合物激活補(bǔ)體，發(fā)生對(duì)細(xì)胞膜的破壞及細(xì)胞殺傷作用，通過(guò)染色法觀察，死細(xì)

6、胞的細(xì)胞膜通透性改變，染料能夠進(jìn)入使之著色，而活細(xì)胞細(xì)胞膜完整不被染色。根據(jù)死細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比，可以判斷受試者淋巴細(xì)胞表面是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反應(yīng)強(qiáng)度。優(yōu)點(diǎn)：不需特殊儀器設(shè)備，易于操作，一般的實(shí)驗(yàn)室都可開展。缺點(diǎn)：標(biāo)本存放不能超過(guò)8小時(shí)；感染可以使細(xì)胞膜表面的B27分子的數(shù)量或結(jié)構(gòu)改變，影響MLCT的結(jié)果，易出現(xiàn)假陰性。12J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189ELISA原理：應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中HLA-B27水平。用純化的B27抗體包被微孔板，依次加入

7、HLA-B27抗原（待檢標(biāo)本）、生物素化的抗HLA-B27抗體、HRP標(biāo)記的親和素，形成雙抗體夾心反應(yīng)，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HLA-B27呈正相關(guān)。其結(jié)果與MLCT法符合率為99，且不受感染因素的影響，重復(fù)性好。 13瞿良等實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，瞿良等實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2005,19(21):2190-2191磁珠酶聯(lián)免疫分析（IMS-ELISA）磁珠分離與ELISA結(jié)合B27單抗標(biāo)記磁珠HRP標(biāo)記CD45單抗通過(guò)磁場(chǎng)分離游離相優(yōu)點(diǎn)：反應(yīng)時(shí)間短（1小時(shí)完成）對(duì)標(biāo)本新鮮度要求不高28靜置4 d之內(nèi)可用14楊

8、雅瓊等現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，楊雅瓊等現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002,17(2):60-62流式細(xì)胞術(shù)法利用熒光標(biāo)記的HLA-B27單克隆抗體，與細(xì)胞表面的B27抗原結(jié)合，使結(jié)合后的淋巴細(xì)胞具有一定的熒光強(qiáng)度，這種熒光強(qiáng)度可由流式細(xì)胞儀測(cè)得的通道值來(lái)反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達(dá)百分比，從而判斷HLA-B27是否陽(yáng)性。優(yōu)點(diǎn)：全自動(dòng)儀器檢測(cè)，減少了人為因素的影響，重復(fù)性高，操作簡(jiǎn)單，自動(dòng)化程度高；靈敏度可達(dá)100%，特異性達(dá)97.4%；結(jié)果穩(wěn)定，樣本之間，不同儀器之間，不同實(shí)驗(yàn)室之間可重復(fù)性高。結(jié)果判斷準(zhǔn)確，為目前較為理想的方法，國(guó)外已將FCM法檢測(cè)HLA-B27作為AS 診斷的常規(guī)檢測(cè)方法。缺點(diǎn)：儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應(yīng)用，且熒光易淬滅。15PCR-SSP通過(guò)設(shè)計(jì)基因序列特異的引物SSP，特異性的擴(kuò)增出標(biāo)本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，若出