分離提取微生物

1、 生物科學(xué)1102 李超 2013.11.29 n在社會(huì)高速發(fā)展的今天環(huán)境污染已然成為一個(gè)我們必須面對(duì)的難題。例如芳香族化合物包括苯酚類及其衍生物和喹啉類等化合物，是工業(yè)廢水中的主要的污染物。工業(yè)含芳香族化合物的廢水大量排放給環(huán)境帶來了嚴(yán)重的污染,該類化合物是原型質(zhì)毒物,對(duì)一切生命個(gè)體都有毒害作用，其一旦進(jìn)入人體,會(huì)引起人體的蛋白質(zhì)變性和凝固。有害于人類健康及生物的生長(zhǎng)繁殖,并且影響經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)性發(fā)展。那么，如何從自然界獲得這種能降解芳香族化合物的微生物？n 確定目的菌物n 特定環(huán)境采樣n 實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)n 篩選目標(biāo)菌落n 重復(fù)培養(yǎng)純化n 獲得目的細(xì)菌n確定目的菌物 首先確定你所要篩選的目的微生

2、物，本實(shí)驗(yàn)我們要從自然界中篩選分離能降解苯酚等芳香族化合物，例如高效降酚菌株JY03、石油降解菌A10、石油降解菌 B-5、嗜鹽堿陳摶泛菌TJB5、苯酚降解菌ZJ-1、苯酚降解菌MW-1、苯酚降解菌NTZH-1、高效苯酚降解菌株XH-10等等。n特定環(huán)境采樣 特定環(huán)境中采樣，即要于可能存在此類微生物的環(huán)境中采集菌樣。苯酚類化合物是有機(jī)合成的重要原料,是造紙、煉焦、農(nóng)藥和醫(yī)藥合成等行業(yè)生產(chǎn)的原料或中間體,大量用于制造酚醛樹脂以及其他高分子材料、燃料等，所以可去煉油廠、造紙廠、醫(yī)藥廠等排放工業(yè)廢水的環(huán)境中采集。本實(shí)驗(yàn)可于該環(huán)境中采取部分土樣。n實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng) 采好菌物樣品，拿回實(shí)驗(yàn)室，稱取適量土樣，

3、加水，靜置一定時(shí)間后再培養(yǎng)。首先進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，就是把樣品中所有的微生物都培養(yǎng)增殖，以獲得更多的數(shù)量的細(xì)菌。一般就用全營養(yǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。n篩選目標(biāo)菌落 增殖結(jié)束后，取上清液稀釋至不同倍數(shù)后，做平板單細(xì)胞培養(yǎng)。取合適梯度涂平板，按照自己要分離的菌選擇培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)利用選擇性培養(yǎng)基（selected media），以芳香族化合物如苯酚作為唯一碳源和能源物質(zhì)進(jìn)行篩選，即只有目標(biāo)菌體才能利用該培養(yǎng)基中的能源物質(zhì)。經(jīng)過培養(yǎng)之后在培養(yǎng)基上找出生長(zhǎng)旺盛的目標(biāo)菌落。n重復(fù)培養(yǎng)純化 在獲得少量的生長(zhǎng)良好的目標(biāo)菌落后，多次重復(fù)以上步驟，進(jìn)行再培養(yǎng)，繼續(xù)進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，篩選，把生長(zhǎng)良好的菌體挑出來，在選擇平板上，這

4、樣會(huì)得到一些單菌落，然后根據(jù)你的目的菌的菌落形態(tài)和鏡檢分子特征選出某個(gè)單菌落，然后再次劃線或者稀釋梯度，進(jìn)行純化以及再純化。同時(shí)也可以可以多挑選幾支進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以增加實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。n獲得目的菌體 對(duì)不常見的或者難辨的目的細(xì)菌就要在微生物鑒定儀上首先鑒定是否存在這種菌 再進(jìn)行科學(xué)研究和工業(yè)化生產(chǎn)，保證其科學(xué)意義。 全球重大的石油泄漏事件盤點(diǎn)n 1967年3月托利卡尼翁號(hào)油輪在英吉利海峽觸礁使得所載11.8萬噸原油全部流入海中，近140千米的海岸受到嚴(yán)重污染。受污海域有25000多只海鳥死亡，50%90%的鯡魚卵不能孵化，幼魚也瀕于絕跡。n 1978年超級(jí)油輪阿莫戈卡迪茲號(hào)在法國西北部布

5、列塔尼半島布列斯特海灣觸礁，22萬噸原油全部泄入海中。n 1979年6月墨西哥灣“Ixtoc-I”油井發(fā)生井噴，一直到1980年3月24日才封住，共漏出原油47.6萬噸，這是直至目前最嚴(yán)重的石油泄漏事件。n 1999年12月，埃里卡號(hào)油輪在法國西北部海域因遭遇風(fēng)暴而斷裂沉沒。2萬多噸重油瀉入海中，是法國遭遇的最嚴(yán)重泄漏石油污染海域事件。n 2005年7月6日，一艘油輪與瓦爾河筑堤相撞，造成30多噸石油泄漏。n 2006年3月10日在美國阿拉斯加該州北部海灣地區(qū)發(fā)生一起重大石油泄漏事故，超過1000噸（共6357桶）泄漏并污染了附近約84畝的苔原地帶。這次事故造成了大批周圍海洋生物及海洋大批死亡，附近的漁業(yè)損失近千萬美元。n 2007年11月10日晚，亞速海和黑海突起風(fēng)暴，裝載4700噸燃油的 “伏爾加石油139”號(hào)油輪斷為兩截，致2000 噸燃油流入海中。n 2009年9月15日