工業(yè)發(fā)酵染菌的防治

1、第七章第七章 工業(yè)發(fā)酵染菌的防治工業(yè)發(fā)酵染菌的防治本章內(nèi)容簡(jiǎn)介本章內(nèi)容簡(jiǎn)介v染菌的危害染菌的危害v染菌的發(fā)現(xiàn)染菌的發(fā)現(xiàn)v染菌的分析染菌的分析v染菌的預(yù)防染菌的預(yù)防v染菌后的挽救染菌后的挽救1 染菌的危害染菌的危害l 浪費(fèi)原材料，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失浪費(fèi)原材料，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失l 擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計(jì)劃擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計(jì)劃l 影響人們的情緒和生產(chǎn)積極性影響人們的情緒和生產(chǎn)積極性l 影響產(chǎn)品外觀及內(nèi)在質(zhì)量影響產(chǎn)品外觀及內(nèi)在質(zhì)量1.1 染菌對(duì)發(fā)酵的影響染菌對(duì)發(fā)酵的影響生產(chǎn)菌種生產(chǎn)菌種污染微生物的種類和性質(zhì)、污染菌量污染微生物的種類和性質(zhì)、污染菌量污染時(shí)間，污染途徑污染時(shí)間，污染途徑培養(yǎng)基，培養(yǎng)

2、條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件感染不同種類和性質(zhì)雜菌對(duì)發(fā)酵的影響不同感染不同種類和性質(zhì)雜菌對(duì)發(fā)酵的影響不同染菌對(duì)不同產(chǎn)品的影響不同染菌對(duì)不同產(chǎn)品的影響不同不同染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響不同不同染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響不同染菌染菌危害危害一、染菌對(duì)不同產(chǎn)品的影響一、染菌對(duì)不同產(chǎn)品的影響v青霉素：產(chǎn)量降低；青霉素：產(chǎn)量降低；v疫苗：全部廢棄。疫苗：全部廢棄。v檸檬酸：前期染菌嚴(yán)重；檸檬酸：前期染菌嚴(yán)重；v氨基酸：噬菌體污染常發(fā)生；氨基酸：噬菌體污染常發(fā)生；v核苷酸：易染菌（生產(chǎn)菌常為缺陷型，生長(zhǎng)慢）；核苷酸：易染菌（生產(chǎn)菌常為缺陷型，生長(zhǎng)慢）；v鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素：程度不同地降低鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、

3、卡那霉素：程度不同地降低產(chǎn)量。產(chǎn)量。v灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素：抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素：抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾乎沒有抑制和殺滅作用。乎沒有抑制和殺滅作用。二、不同種類和性質(zhì)的雜菌對(duì)發(fā)酵的影響二、不同種類和性質(zhì)的雜菌對(duì)發(fā)酵的影響v污染噬菌體污染噬菌體 噬菌體的感染力強(qiáng)，傳播蔓延迅速，也較防噬菌體的感染力強(qiáng)，傳播蔓延迅速，也較防治，故危害極大。治，故危害極大。 污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重的造成斷種，被迫停產(chǎn)嚴(yán)重的造成斷種，被迫停產(chǎn)。 污染其它雜菌污染其它雜菌 有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生

4、大量泡沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。過程的通氣攪拌。 有的雜菌會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使有的雜菌會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pH下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。 芽孢桿菌耐熱，不易殺死。芽孢桿菌耐熱，不易殺死。 v不同發(fā)酵對(duì)雜菌感染的敏感性不同。不同發(fā)酵對(duì)雜菌感染的敏感性不同。v(1)(1)青霉素和鏈霉素：細(xì)短桿菌的危害青霉素和鏈霉素：細(xì)短桿菌的危害大于大于粗大桿粗大桿菌；菌；v(2)(2)四環(huán)素：對(duì)雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌污染四環(huán)素：對(duì)雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌污染敏感；敏感；v(3)(3)檸檬酸：對(duì)青霉菌

5、敏感；檸檬酸：對(duì)青霉菌敏感；v(4)(4)核苷酸：對(duì)芽孢桿菌敏感核苷酸：對(duì)芽孢桿菌敏感v(5)(5)氨基酸：對(duì)噬菌體敏感；氨基酸：對(duì)噬菌體敏感；三、不同染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響三、不同染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響 污染時(shí)間：無菌檢測(cè)方法測(cè)出的污染時(shí)污染時(shí)間：無菌檢測(cè)方法測(cè)出的污染時(shí)間，不是雜菌竄入培養(yǎng)液的時(shí)間。間，不是雜菌竄入培養(yǎng)液的時(shí)間。 v(1)(1)種子染菌：影響最大；種子染菌：影響最大；v(2)(2)前期：滅菌后重新接種；前期：滅菌后重新接種；v(3)(3)中期：對(duì)生產(chǎn)影響大；中期：對(duì)生產(chǎn)影響大；v(4)(4)后期：一般不嚴(yán)重，若嚴(yán)重時(shí)可放罐；后期：一般不嚴(yán)重，若嚴(yán)重時(shí)可放罐； 1.4 發(fā)酵染菌對(duì)

6、提煉和產(chǎn)品質(zhì)量的影響發(fā)酵染菌對(duì)提煉和產(chǎn)品質(zhì)量的影響1 1）發(fā)酵染菌對(duì)過濾的影響）發(fā)酵染菌對(duì)過濾的影響粘度大粘度大 過濾困難過濾困難 拉長(zhǎng)過濾時(shí)間，拉長(zhǎng)過濾時(shí)間，影響設(shè)備周轉(zhuǎn)影響設(shè)備周轉(zhuǎn) 降低過濾收率降低過濾收率影響程度：雜菌種類，污染程度影響程度：雜菌種類，污染程度措施：加熱、冷卻、添加助濾劑等措施：加熱、冷卻、添加助濾劑等2） 發(fā)酵染菌對(duì)提煉的影響發(fā)酵染菌對(duì)提煉的影響l 沉淀法：雜質(zhì)污染產(chǎn)物沉淀法：雜質(zhì)污染產(chǎn)物l 有機(jī)溶劑萃取：乳化，難分離。有機(jī)溶劑萃?。喝榛y分離。l 離子交換：降低離子交換樹脂的交換容量，雜離子交換：降低離子交換樹脂的交換容量，雜菌難沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液

7、。菌難沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液。2 染菌的表現(xiàn)染菌的表現(xiàn)種子：種子：v生長(zhǎng)緩慢生長(zhǎng)緩慢v菌絲結(jié)團(tuán)菌絲結(jié)團(tuán)v代謝異常代謝異常發(fā)酵：發(fā)酵：v菌體生長(zhǎng)差菌體生長(zhǎng)差vpH異常異常v溶氧異常溶氧異常v泡沫過多泡沫過多v菌體濃度異常菌體濃度異常3 染菌的分析染菌的分析 總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比的百分率。包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)料批（次）數(shù)之比的百分率。包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)?？?cè)揪士側(cè)揪?=%100*總投料批（次）數(shù)總投料批（次）數(shù)發(fā)酵染菌批（次）數(shù)發(fā)酵染菌批（次

8、）數(shù)染菌原因：種子、無菌空氣、設(shè)備滲漏、滅菌不染菌原因：種子、無菌空氣、設(shè)備滲漏、滅菌不徹底、操作不當(dāng)、管理不善等。徹底、操作不當(dāng)、管理不善等。染菌時(shí)間染菌時(shí)間早期：種、氣、設(shè)備、滅菌不徹底、操作不早期：種、氣、設(shè)備、滅菌不徹底、操作不當(dāng)；當(dāng)；后期：補(bǔ)料不當(dāng)、滲漏。后期：補(bǔ)料不當(dāng)、滲漏。v染菌種類染菌種類耐熱芽孢桿菌：滅菌不徹底；耐熱芽孢桿菌：滅菌不徹底；球菌或無芽孢桿菌：種、滲漏；球菌或無芽孢桿菌：種、滲漏；淺綠色雜菌：冷水管滲漏；淺綠色雜菌：冷水管滲漏；霉菌：滅菌不徹底或操作問題；霉菌：滅菌不徹底或操作問題；v染菌幅度染菌幅度各個(gè)或數(shù)個(gè)發(fā)酵罐感染相同雜菌：空氣系統(tǒng)；各個(gè)或數(shù)個(gè)發(fā)酵罐感染相同

9、雜菌：空氣系統(tǒng)；個(gè)別罐連續(xù)感染雜菌：設(shè)備問題；個(gè)別罐連續(xù)感染雜菌：設(shè)備問題；日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素發(fā)酵染菌原因分析日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素發(fā)酵染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 9.64接種時(shí)罐壓跌零接種時(shí)罐壓跌零 0.19培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 0.79總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 19.96泡沫冒頂泡沫冒頂 0.48夾套穿孔夾套穿孔 12.36盤管穿孔盤管穿孔 5.89接種管穿孔接種管穿孔 0.39閥門滲漏閥門滲漏 1.45攪拌軸密封滲漏攪拌軸密封滲漏 2.09罐蓋漏罐蓋漏 1.54其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 1

10、0.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94上海第三制藥廠染菌原因分析上海第三制藥廠染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%種子帶菌種子帶菌 14.15盤管穿孔盤管穿孔 14.20閥門滲漏閥門滲漏 23.30空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 10.0管理不善管理不善 25.80其它其它 7.49原因不明原因不明 5.78 管理不善而染菌的有管理不善而染菌的有31個(gè)罐批，占個(gè)罐批，占25.08經(jīng)分析有經(jīng)分析有下表所列原因：下表所列原因： 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查 25.8接種違反操作規(guī)程接種違反操作規(guī)程 25.8檢修質(zhì)量缺乏驗(yàn)收制度檢修

11、質(zhì)量缺乏驗(yàn)收制度 19.35操作不熟練操作不熟練 19.35配料違反工藝規(guī)程配料違反工藝規(guī)程 6.45調(diào)度不當(dāng)調(diào)度不當(dāng) 3.25第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率%外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料）外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料） 8.20設(shè)備穿孔設(shè)備穿孔 7.60空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 26.00停電罐壓跌零停電罐壓跌零 1.60接種接種 11.00蒸汽壓力不足或蒸汽量不足蒸汽壓力不足或蒸汽量不足 0.60管理問題管理問題 7.80 操作違反規(guī)程操作違反規(guī)程 1.60種子帶菌種子帶菌 0.60原因不明原因不明 35.00染菌的原因有多種，對(duì)于實(shí)際情況

12、如何分析呢？染菌的原因有多種，對(duì)于實(shí)際情況如何分析呢？單罐染菌單罐染菌不是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。如種子帶不是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。如種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失效效多罐染菌多罐染菌系統(tǒng)問題，如空氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總過系統(tǒng)問題，如空氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總過濾器長(zhǎng)期沒有檢查，可能受潮失效；移種或補(bǔ)料濾器長(zhǎng)期沒有檢查，可能受潮失效；移種或補(bǔ)料的分配站有滲漏或滅菌不徹底的分配站有滲漏或滅菌不徹底前期染菌前期染菌種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底中后期染菌中后期染菌補(bǔ)料的料液滅菌不徹底或補(bǔ)料管道、閥

13、門滲補(bǔ)料的料液滅菌不徹底或補(bǔ)料管道、閥門滲漏，一般不會(huì)是種子問題漏，一般不會(huì)是種子問題檢查與判斷檢查與判斷n表觀法：表觀法：v溶氧水平溶氧水平v排氣中排氣中COCO2 2n實(shí)驗(yàn)法：實(shí)驗(yàn)法：v鏡檢法鏡檢法v平皿劃線或斜面檢查法平皿劃線或斜面檢查法v肉湯培養(yǎng)法肉湯培養(yǎng)法1 1）防止種子帶菌）防止種子帶菌4 染菌的預(yù)防染菌的預(yù)防種子帶菌的原因種子帶菌的原因滅菌不徹底滅菌不徹底(如假壓如假壓)；移種污染；移種污染；養(yǎng)或保藏過程中污染；養(yǎng)或保藏過程中污染；無菌室管理不善；無菌室管理不善；制備壯、純、量足的種子是發(fā)酵成功的關(guān)鍵，制備壯、純、量足的種子是發(fā)酵成功的關(guān)鍵，為此：為此： 強(qiáng)化無菌室的管理強(qiáng)化無菌

14、室的管理( (使用前滅菌使用前滅菌) )； 嚴(yán)格接種、移種的無菌操作；嚴(yán)格接種、移種的無菌操作； 在擴(kuò)培各階段定時(shí)取樣做無菌實(shí)驗(yàn)；在擴(kuò)培各階段定時(shí)取樣做無菌實(shí)驗(yàn)； 嚴(yán)格接種管滅菌，并用無菌空氣保壓；嚴(yán)格接種管滅菌，并用無菌空氣保壓；無菌狀況的檢測(cè)無菌狀況的檢測(cè)環(huán)境無菌的檢查環(huán)境無菌的檢查v塵埃粒子檢測(cè)塵埃粒子檢測(cè)v無菌平板檢測(cè)無菌平板檢測(cè)無菌室要求無菌室要求v 打開紫外燈，照半小時(shí)，關(guān)燈后打開紫外燈，照半小時(shí)，關(guān)燈后15分鐘再接種。分鐘再接種。v 消毒藥水擦桌子、拖地，開啟超凈臺(tái)的通風(fēng)，消毒藥水擦桌子、拖地，開啟超凈臺(tái)的通風(fēng)，v 接種時(shí)必須在超凈臺(tái)上操作，保證無菌條件。接種時(shí)必須在超凈臺(tái)上操作

15、，保證無菌條件。v 接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。棉球擦干凈。種子及發(fā)酵液無菌狀況檢測(cè)種子及發(fā)酵液無菌狀況檢測(cè)2 2）防止空氣引起的染菌）防止空氣引起的染菌l 流程或設(shè)備設(shè)計(jì)的合理性；流程或設(shè)備設(shè)計(jì)的合理性；l 過慮介質(zhì)選用、裝填；過慮介質(zhì)選用、裝填；l 過慮介質(zhì)的滅菌和管理；過慮介質(zhì)的滅菌和管理；l 從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空氣帶菌而造成的染菌分別為氣帶菌而造成的染菌分別為19.96和和 26%。空氣除菌系統(tǒng)復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會(huì)空氣除菌系統(tǒng)復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會(huì)導(dǎo)致空

16、氣除菌失敗。導(dǎo)致空氣除菌失敗?？諝膺^濾除菌設(shè)備流程空氣過濾除菌設(shè)備流程空壓機(jī)空壓機(jī)儲(chǔ)罐儲(chǔ)罐二級(jí)冷卻二級(jí)冷卻加熱器加熱器空氣過濾空氣過濾粗過濾粗過濾空氣冷卻器的列管穿孔泄露，冷卻水會(huì)滲入到空氣空氣冷卻器的列管穿孔泄露，冷卻水會(huì)滲入到空氣中，造成染菌。中，造成染菌。棉花棉花-活性炭過濾器長(zhǎng)期使用后變薄的一邊失效。活性炭過濾器長(zhǎng)期使用后變薄的一邊失效。過濾介質(zhì)受潮失效：過濾器滅菌完畢應(yīng)立即緩慢通過濾介質(zhì)受潮失效：過濾器滅菌完畢應(yīng)立即緩慢通入壓縮空氣，將水分吹干。超細(xì)纖維紙作過濾介質(zhì)，入壓縮空氣，將水分吹干。超細(xì)纖維紙作過濾介質(zhì)，滅菌時(shí)必須將管道中冷凝水放干凈，以免介質(zhì)受潮滅菌時(shí)必須將管道中冷凝水放干

17、凈，以免介質(zhì)受潮失效。失效。 在生產(chǎn)實(shí)踐中，空氣管道大多與其它物料管道在生產(chǎn)實(shí)踐中，空氣管道大多與其它物料管道相接，要裝上止逆閥防止其它物料竄入空氣管道污相接，要裝上止逆閥防止其它物料竄入空氣管道污染過濾器，導(dǎo)致過濾介質(zhì)失效。染過濾器，導(dǎo)致過濾介質(zhì)失效。3 3）防止培養(yǎng)基滅菌不徹底）防止培養(yǎng)基滅菌不徹底培養(yǎng)基滅菌方法培養(yǎng)基滅菌方法高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌分批滅菌分批滅菌 121，30分鐘分鐘連續(xù)滅菌連續(xù)滅菌 罐溫罐溫125130 ，3045分鐘分鐘連續(xù)滅菌設(shè)備流程連續(xù)滅菌設(shè)備流程連連 消消 塔塔滅菌技術(shù)好壞與滅菌質(zhì)量相關(guān)滅菌技術(shù)好壞與滅菌質(zhì)量相關(guān)l蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時(shí)間蒸汽通入培養(yǎng)

18、基，升溫快慢、保溫時(shí)間產(chǎn)產(chǎn)生過多泡沫生過多泡沫l蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)l雜菌數(shù)量：季節(jié)、原材料儲(chǔ)存和保管雜菌數(shù)量：季節(jié)、原材料儲(chǔ)存和保管l設(shè)備的清洗質(zhì)量、有無滅菌的死角設(shè)備的清洗質(zhì)量、有無滅菌的死角為什么蒸汽滅菌時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫呢？為什么蒸汽滅菌時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫呢？ 培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌時(shí)升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐如果滅菌時(shí)升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢，就會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上內(nèi)的空氣排出較慢，就會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直升到發(fā)酵罐頂，泡

19、沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。接接觸，未被殺死。防止方法：緩慢開啟蒸汽閥門，或加入消泡劑防止方法：緩慢開啟蒸汽閥門，或加入消泡劑培養(yǎng)基滅菌不徹底原因培養(yǎng)基滅菌不徹底原因v蒸氣壓力或蒸氣量不足、滅菌時(shí)間不夠；蒸氣壓力或蒸氣量不足、滅菌時(shí)間不夠；v滅菌時(shí)培養(yǎng)基產(chǎn)泡沫或罐內(nèi)有污垢堆積、或基滅菌時(shí)培養(yǎng)基產(chǎn)泡沫或罐內(nèi)有污垢堆積、或基質(zhì)中有不溶解的固體顆粒；質(zhì)中有不溶解的固體顆粒；v蒸汽短路蒸汽短路v(1)(1)原料性狀：原料性狀：v(2)(2)假壓的形成；假壓的形成；v(3)(3)參數(shù)不穩(wěn)定（連續(xù)滅菌）；參數(shù)不穩(wěn)定（連續(xù)滅菌）；v(4)(4)設(shè)備死角設(shè)備死角( (下圖下圖) ) ； v消滅

20、死角消滅死角減少擋板和開孔；減少擋板和開孔；焊接光滑；焊接光滑；法蘭、閥門連接正好；法蘭、閥門連接正好；減少殘?jiān)练e；減少殘?jiān)练e；嚴(yán)格清洗和檢查；嚴(yán)格清洗和檢查；定期檢修易壞部件定期檢修易壞部件化學(xué)腐蝕化學(xué)腐蝕電化學(xué)腐蝕電化學(xué)腐蝕磨蝕磨蝕設(shè)備加工不良設(shè)備加工不良4 4） 防止設(shè)備滲漏防止設(shè)備滲漏 包括夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門包括夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。v防止設(shè)備滲漏防止設(shè)備滲漏肉眼可見肉眼可見冷卻盤管、夾套穿孔、閥門滲漏冷卻盤管、夾套穿孔、閥門滲漏肉眼不可見肉眼不可見試漏試漏 水壓試漏法水

21、壓試漏法 集氣桶來試漏集氣桶來試漏5 5）加強(qiáng)操作和衛(wèi)生管理）加強(qiáng)操作和衛(wèi)生管理 v嚴(yán)格操作規(guī)程、保持環(huán)境干凈。嚴(yán)格操作規(guī)程、保持環(huán)境干凈。v提高操作人員素質(zhì)提高操作人員素質(zhì)v溫度壓力的維持溫度壓力的維持v培養(yǎng)基、傳感器培養(yǎng)基、傳感器6 6） 噬菌體污染及其防治措施噬菌體污染及其防治措施v染噬菌體對(duì)發(fā)酵的影響染噬菌體對(duì)發(fā)酵的影響v產(chǎn)生噬菌體的原因：自然界中的噬菌體在活菌產(chǎn)生噬菌體的原因：自然界中的噬菌體在活菌體中大量生長(zhǎng)。隨著風(fēng)沙塵土和空氣流動(dòng)傳播，體中大量生長(zhǎng)。隨著風(fēng)沙塵土和空氣流動(dòng)傳播，以及人們的走動(dòng)、車輛的往來也攜帶著噬菌體以及人們的走動(dòng)、車輛的往來也攜帶著噬菌體到處傳播，使噬菌體潛入生

22、產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)，尤其到處傳播，使噬菌體潛入生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)，尤其是通過空氣系統(tǒng)進(jìn)入種子室、種子罐、發(fā)酵罐。是通過空氣系統(tǒng)進(jìn)入種子室、種子罐、發(fā)酵罐。染噬菌體表現(xiàn)為：染噬菌體表現(xiàn)為：v鏡檢鏡檢vpH值值v發(fā)酵液能力：殘?zhí)?、產(chǎn)物濃度發(fā)酵液能力：殘?zhí)?、產(chǎn)物濃度v發(fā)酵液性質(zhì)：泡沫、粘度、氣味發(fā)酵液性質(zhì)：泡沫、粘度、氣味vOD值值vCO2，O2噬菌體的檢測(cè)方法噬菌體的檢測(cè)方法v雙層瓊脂法：在培養(yǎng)皿上倒入培養(yǎng)生產(chǎn)菌的雙層瓊脂法：在培養(yǎng)皿上倒入培養(yǎng)生產(chǎn)菌的培養(yǎng)基（加瓊脂）作下層。同樣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)基（加瓊脂）作下層。同樣的培養(yǎng)基中加入加入20203030培養(yǎng)好的種子液，再加入懷培養(yǎng)好的種子液，再加入懷疑染噬菌體的發(fā)

23、酵液，搖均勻后，鋪上層。疑染噬菌體的發(fā)酵液，搖均勻后，鋪上層。培養(yǎng)過夜觀察培養(yǎng)皿上是否出現(xiàn)噬菌斑。培養(yǎng)過夜觀察培養(yǎng)皿上是否出現(xiàn)噬菌斑。v也可以在上層培養(yǎng)基中不加懷疑染噬菌體的也可以在上層培養(yǎng)基中不加懷疑染噬菌體的發(fā)酵液，而將發(fā)酵液直接點(diǎn)種在上層培養(yǎng)基發(fā)酵液，而將發(fā)酵液直接點(diǎn)種在上層培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)過夜，觀察有無透明圈出現(xiàn)。表面，培養(yǎng)過夜，觀察有無透明圈出現(xiàn)。噬菌體的防治噬菌體的防治 車間設(shè)計(jì)車間設(shè)計(jì) 地面環(huán)境衛(wèi)生地面環(huán)境衛(wèi)生 嚴(yán)格無菌操作嚴(yán)格無菌操作 認(rèn)真進(jìn)行發(fā)酵罐、補(bǔ)料系統(tǒng)的滅菌認(rèn)真進(jìn)行發(fā)酵罐、補(bǔ)料系統(tǒng)的滅菌 廢液滅菌排放廢液滅菌排放 選育抗噬菌體的菌種，或輪換使用菌種選育抗噬菌體的菌種，或

24、輪換使用菌種 T T4 4的感染過程的感染過程吸附吸附侵入侵入復(fù)制與聚集復(fù)制與聚集成熟與釋放成熟與釋放感染感染T4后的異?，F(xiàn)象：后的異?，F(xiàn)象：OD值不升反降；耗糖值不升反降；耗糖速度降低；氨氮大量釋放；速度降低；氨氮大量釋放；T T4 4感染的防治感染的防治v凈化環(huán)境；凈化環(huán)境；v光潔地面；光潔地面；v嚴(yán)禁活排；嚴(yán)禁活排；v消除死角；消除死角；v無菌室少與外界接觸；無菌室少與外界接觸；v使用無使用無T T4 4的菌株；的菌株；v嚴(yán)格種檢；嚴(yán)格種檢；v加強(qiáng)管理；加強(qiáng)管理； 改變菌株或篩選抗改變菌株或篩選抗T T4 4的菌株；的菌株； 藥物防治藥物防治( (利用藥物使利用藥物使T T4 4失活失活

25、) )：(1)(1)螯合劑：抑制吸附或阻止注入；螯合劑：抑制吸附或阻止注入；(2)(2)抗生素：抑制抗生素：抑制T T4 4蛋白質(zhì)的合成；蛋白質(zhì)的合成；(3)(3)表面活性劑：抑制表面活性劑：抑制T4T4的吸附；的吸附；(4)N-(4)N-脂酰氨基酸：抑制脂酰氨基酸：抑制T T4 4復(fù)制或子代成熟；復(fù)制或子代成熟；(5)(5)聚胺類衍生物：與聚胺類衍生物：與T T4 4DNADNA結(jié)合，使結(jié)合，使T T4 4失活；失活；5 5 染菌后的挽救措施染菌后的挽救措施v 染菌時(shí)間染菌時(shí)間v 染菌程度染菌程度v 最大效益最大效益（1）種子培養(yǎng)期染菌）種子培養(yǎng)期染菌染菌的特點(diǎn)：生產(chǎn)菌少，防御雜菌能力低，染

26、菌的特點(diǎn)：生產(chǎn)菌少，防御雜菌能力低，容易污染雜菌。容易污染雜菌。染菌后的處理：全部廢棄培養(yǎng)液染菌后的處理：全部廢棄培養(yǎng)液（2）發(fā)酵前期染菌）發(fā)酵前期染菌發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。原因原因 發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜菌能且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜菌能力弱。力弱。染菌措施染菌措施 補(bǔ)救補(bǔ)救培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng)，培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng)，重新接種再用。重新接種再用。（3）發(fā)酵中期染菌）發(fā)酵中期染菌 影響影響干

27、擾產(chǎn)生菌的代謝干擾產(chǎn)生菌的代謝改變發(fā)酵液環(huán)境改變發(fā)酵液環(huán)境措施措施 降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料提前放罐提前放罐串罐串罐（4）發(fā)酵后期染菌）發(fā)酵后期染菌 已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對(duì)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對(duì)雜菌有一定的抑制或殺滅能力。雜菌有一定的抑制或殺滅能力。措施：措施：染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響不大染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響不大染菌嚴(yán)重，破壞性較大，可提前放罐染菌嚴(yán)重，破壞性較大，可提前放罐（5 5）T4T4感染后的挽救感染后的挽救v并罐法并罐法v更換菌種：輪換菌株、抗性菌株更換菌種：輪換菌株、抗性菌株v放罐重消，補(bǔ)料，接種放罐重消，補(bǔ)料，接種v罐內(nèi)滅菌罐內(nèi)滅菌染菌的善后染菌的善后v培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道。培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道。 滅菌方法：蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌方法：蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時(shí)，才放下水道。滅菌劑攪拌半小時(shí)，才放下水道。v找到染菌的原因，對(duì)癥下藥，徹底清洗消毒。找到染菌的原因，